【摘要】：研究背景:胰腺癌是常見的惡性腫瘤之一,預后較差,近年來,胰腺癌的發(fā)病率逐年上升。研究影響胰腺導管腺癌侵襲轉移的分子機制,有助于了解腫瘤的發(fā)生發(fā)展,并為臨床診治和疾病預后提供理論依據(jù)。大量的文獻報道,腫瘤的侵襲和轉移與血管生成、細胞外基質的降解及腫瘤上皮間質轉化過程相關,抗血管生成和抑制細胞基質降解及上皮間質轉化均可能在抗腫瘤治療中發(fā)揮一定作用。ASPM是一種異常紡錘體樣頭小畸形相關的基因,在胰腺導管癌細胞小管形成過程中表達降低,而在胰腺導管腺癌中高表達,通過Wnt通路促進胰腺導管腺癌的侵襲和維持胰腺導管腺癌細胞的干細胞特征。但ASPM在胰腺導管腺癌血管生成、細胞外基質降解、上皮間質轉化過程中是否起作用,是否通過Wnt信號調節(jié)腫瘤血管生成、上皮間質轉化、影響細胞外基質降解等機制仍不清楚。LRP16是白血病相關基因,亦是ERa信號通路上的應答基因,參與了人類腫瘤的發(fā)生發(fā)展,但是否參與了胰腺導管腺癌的發(fā)生、侵襲、轉移尚不清楚,其與ASPM的相互關系還需進一步研究。目的:通過檢測對胰腺導管腺癌標本中ASPM的表達,并結合檢測胰腺導管腺癌血管內皮生長因子VEGF、微血管密度MVD、β-catenin、基質金屬蛋白酶MMP7和LRP16的表達,評估ASPM在胰腺導管腺癌中的作用,并確定其作為預后判斷危險因素的可能性;通過免疫組化、RNAscope、體外細胞實驗,使用RNAi沉默技術,從蛋白、mRNA水平了解ASPM與胰腺導管腺癌腫瘤血管生成、上皮間質轉化、細胞外基質降解和Wnt信號通路的關系。方法:1.選取解放軍總醫(yī)院病理科經(jīng)病理證實的118例胰腺導管腺癌和34例癌旁正常胰腺組織蠟塊,采用免疫組織化學分析ASPM、LRP16、β-catenin、VEGF、MMP7在胰腺導管腺癌及正常胰腺組織中的表達情況;用CD34標記觀察腫瘤血管,分析ASPM、LRP16與胰腺導管腺癌臨床病理參數(shù)的關系;探討ASPM與LRP16、β-catenin、VEGF、MMP7和MVD之間的相關性。選取16例淋巴結和9例肝轉移癌的原發(fā)灶和轉移灶組織,通過免疫組化及RNAscope方法檢測ASPM的蛋白及mRNA的表達情況。2.在胰腺癌細胞株PANC-1、AsPC-1中采用瞬時轉染技術將ASPM基因沉默,CCK8、Transwell實驗檢測胰腺癌細胞株中ASPMmRNA水平降低情況下,胰腺癌細胞的生長情況、細胞增殖及侵襲能力的改變。3.qRT-PCR、Western blot實驗研究調控 ASPM,檢測 DVL、β-catenin、VEGF、α-SMA、MMP7 表達,分析 ASPM 的功能及與 DVL、β-catenin、VEGF、MMP7、α-SMA 因子間的關系。結果:1.ASPM在胰腺導管腺癌的表達與胰腺導管腺癌侵襲、轉移、TNM分期及預后明顯正相關(P0.05)。免疫組織化學及RNAscope方法檢測原發(fā)灶和轉移灶ASPM 的蛋白及 mRNA 表達差異顯著(P0.05)。ASPM 與β-catenin、VEGF、MVD、LRP16、MMP7 呈顯著正相關(P0.05)。2.ASPM 低表達可降低 PANC-1、AsPC-1胰腺癌腫瘤細胞的生長、增殖及侵襲能力(P0.05)。3.沉默PANC-1、AsPC-1腫瘤細胞的ASPM,β-catenin、DVL、MMP7、VEGF、α-SMA轉錄水平在沉默組與陰性對照組差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。Western blot檢測顯示β-catenin、DVL、α-SMA、VEGF、MMP7蛋白表達與陰性對照組差異有顯著性(P0.05)。結論:1.ASPM、LRP16與胰腺導管腺癌的預后相關,ASPM可以作為判斷胰腺導管腺癌侵襲、轉移、血管生成和預后的指標。2.ASPM與胰腺導管腺癌增殖、侵襲密切相關。沉默ASPM可以有效地抑制胰腺癌細胞的增殖、侵襲等惡性生物學行為。3.沉默ASPM可抑制Wnt信號通路關鍵因子的轉錄和蛋白表達,可抑制腫瘤血管生成,上皮間質轉化及細胞外基質的降解,ASPM可能通過Wnt-DVL-β-catenin調節(jié)MMP7、VEGF、α-SMAmRNA轉錄和蛋白表達。4.ASPM可通過多個途徑影響胰腺導管腺癌的侵襲和轉移。ASPM與LRP16協(xié)同影響胰腺導管腺癌的發(fā)生發(fā)展。靶向調控ASPM和LRP16,可能對胰腺導管腺癌侵襲轉移起到調控作用,可作為潛在的治療手段。
【圖文】：

原發(fā)灶和轉移灶的蠟塊，進行ＴＭＡ構建，通過免疫組化及ＲＮＡｓｃｏｐｅ方法檢測原發(fā)灶逡逑和轉移灶中ＡＳＰＭ的表達，并分析比較其中的差異。我們發(fā)現(xiàn)ＡＳＰＭ蛋白及ＲＮＡｓｃｏｐｅ逡逑評分在轉移灶高于原發(fā)灶，，差異具有顯著性（Ｐ＝０．０１８；Ｐ＝０．０２３）（圖２、３，表３、４）。逡逑表３．免疫組化檢測ＡＳＰＭ在原發(fā)胰腺導管腺癌和淋巴結、肝轉移性胰腺導管腺癌組織中的表達逡逑ＡＳＰＭ邋ｐｏｓｉｔｉｖｅ邋ＡＳＰＭ邋ｎｅｇａｔｉｖｅ邐ｙ２邐Ｐ邋ｖａｌｕｅ逡逑Ｐｒｉｍａｒｙ邐１２邐１３逡逑５．５６邐Ｐ＝０．０１８逡逑Ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ邐２０邐５逡逑ｒ邐Ｊ邋？邐？邋＇邐？邋－邋ＶＴ邋Ｔ邐？邐ｆ邋．逡逑、＇＇邋．邋－■邋？邋？邋＇邋．邋．邋＊逡逑ｉ邐－邐＇邋－邋？邋－１邋．逡逑４＊ｃ邋■＇邐＾邋ｒ邋．‘邐？邐，？邐＼、ｖ逡逑＾邐＊邐y義希鈴澹汗沐澹у危緬義希錚海義希簾湥義稀

本文編號：2600748