【摘要】：目的:乳腺癌發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移是患者死亡的主要原因之一,眾多研究表明EGFR在癌組織中的表達(dá)水平與這些腫瘤的轉(zhuǎn)移情況及進(jìn)展程度存在明顯的正相關(guān)。前期研究顯示上皮間質(zhì)化在腫瘤的發(fā)生、惡性轉(zhuǎn)變及化療抵抗上起著重要的作用,近年文獻(xiàn)報道Src激酶家族成員c-Src在轉(zhuǎn)移性乳腺癌組織樣本中表達(dá)最為顯著。因此本實驗旨在探討乳腺癌中EGFR的表達(dá)是否與其轉(zhuǎn)移潛能相關(guān),EGF激活EGFR導(dǎo)致乳腺癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移是否通過上皮間質(zhì)化過程得以實現(xiàn),c-Src是否與EGF介導(dǎo)的乳腺癌細(xì)胞上皮間質(zhì)化和遷移能力相關(guān)。方法:(1)篩選出EGFR高表達(dá)的乳腺癌細(xì)胞株:通過RT-qPCR及Western blot檢測正常乳腺上皮細(xì)胞(MCF-10A)、LuminalA型乳腺癌細(xì)胞(MCF-7)、三陰性乳腺癌細(xì)胞(MDA-MB-231)三株細(xì)胞的EGFR及EGFL-7表達(dá)情況,高表達(dá)EGFR細(xì)胞株用于后續(xù)實驗。(2)探究EGF對高表達(dá)EGFR細(xì)胞株上皮間質(zhì)化和遷移能力的影響:分別給予EGF以及EGF抑制劑利多卡因進(jìn)行處理,利用RT-qPCR及Western blot檢測EGF誘導(dǎo)前后上皮間質(zhì)化標(biāo)志蛋白(ZO-1、MMP-9)的表達(dá)情況,劃痕實驗檢測乳腺癌細(xì)胞遷移能力的改變。(3)明確c-Src在EGF誘導(dǎo)的乳腺癌細(xì)胞上皮間質(zhì)化和遷移能力改變中的作用:將乳腺癌細(xì)胞分成對照組、c-Src抑制劑PP2組、PBS組、EGF組、EGF+PP2組及EGF+PBS組;利用Western blot檢測上皮間質(zhì)化標(biāo)志物的表達(dá)情況,劃痕實驗檢測乳腺癌細(xì)胞遷移能力的變化。結(jié)果:(1)MCF-10A、MCF-7、MDA-MB-231細(xì)胞均有EGFR的表達(dá)。在檢測的細(xì)胞中高轉(zhuǎn)移潛能的三陰性乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞其EGFR的mRNA及EGFR的蛋白水平在檢測的三株細(xì)胞中表達(dá)最高。(2)EGF作用于乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞48 h后細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生變化,細(xì)胞極性消失,細(xì)胞呈梭型、紡錘樣;細(xì)胞與細(xì)胞之間連接疏松,細(xì)胞間隙增大。而給予500μM利多卡因預(yù)處理后,細(xì)胞形態(tài)改變不明顯,保持乳腺癌細(xì)胞上皮細(xì)胞的特征。RT-qPCR及Western blot實驗結(jié)果顯示單用EGF激活組與其它組相比上皮標(biāo)記蛋白ZO-1表達(dá)下調(diào),而間質(zhì)標(biāo)記蛋白MMP-9表達(dá)上調(diào);劃痕實驗結(jié)果顯示EGF誘導(dǎo)的細(xì)胞遷移能力顯著高于對照組及利多卡因干預(yù)組。(3)在EGF誘導(dǎo)乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231發(fā)生上皮間質(zhì)化前加入c-Src激酶抑制劑PP2進(jìn)行干預(yù),乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231仍維持上皮細(xì)胞形態(tài);Western blot結(jié)果顯示加PP2干預(yù)后上皮細(xì)胞標(biāo)志物ZO-1與未加PP2干預(yù)組比較表達(dá)上調(diào),而間質(zhì)細(xì)胞的標(biāo)志物MMP-9加PP2組與未加PP2組比較表達(dá)下調(diào);劃痕實驗結(jié)果PP2干預(yù)組較未加PP2組細(xì)胞遷移能力下降。結(jié)論:正常乳腺上皮細(xì)胞及乳腺癌細(xì)胞中均存在EGFR的表達(dá),其在三陰性乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231中表達(dá)最高,表明EGFR的表達(dá)與乳腺癌細(xì)胞的侵襲遷移潛能呈正相關(guān),EGFR可能為預(yù)測乳腺癌轉(zhuǎn)移的標(biāo)志物之一;EGF與EGFR結(jié)合可以誘導(dǎo)乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231發(fā)生上皮間質(zhì)化,促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231的浸潤及轉(zhuǎn)移;非受體酪氨酸激酶c-Src蛋白在EGF激活的MDA-MB-231乳腺癌細(xì)胞上皮間質(zhì)化和遷移中具有重要作用,非受體酪氨酸激酶c-Src蛋白可能是乳腺癌的潛在治療靶點。
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R737.9

【參考文獻(xiàn)】

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1 Lihua Huang;Liwu Fu;;Mechanisms of resistance to EGFR tyrosine kinase inhibitors[J];Acta Pharmaceutica Sinica B;2015年05期

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本文編號：2600416