【摘要】：目的:利用生物信息學(xué)方法篩選參與結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移的腫瘤干細(xì)胞相關(guān)miRNA的集合,并驗(yàn)證其在原發(fā)灶和肝轉(zhuǎn)移灶組織中的表達(dá)差異,為結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移的發(fā)生預(yù)測(cè)探索新的生物學(xué)指標(biāo)。方法:本研究首先通過GEO數(shù)據(jù)庫挖掘出已發(fā)表的結(jié)直腸癌轉(zhuǎn)移灶差異表達(dá)的miRNA集合,再通過COREMINE Medical文本工具挖掘出與結(jié)直腸癌腫瘤干細(xì)胞相關(guān)的miRNA集合,兩者取交集作為目標(biāo)的miRNA集合。用熒光定量PCR方法檢測(cè)30例配對(duì)結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移原發(fā)灶和轉(zhuǎn)移灶組織中目的miRNA的表達(dá),篩選出與結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移相關(guān)的miRNA,測(cè)定其在不同組織中的表達(dá)差異,并分析其與原發(fā)腫瘤部位、原發(fā)腫瘤分化程度、淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移等臨床病理特征的關(guān)系。同時(shí)利用生物信息學(xué)方法預(yù)測(cè)結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移相關(guān)的miRNA下游靶基因和信號(hào)通路分析。結(jié)果:本研究對(duì)GEO數(shù)據(jù)庫中與轉(zhuǎn)移性結(jié)直腸癌相關(guān)全基因組miRNA表達(dá)譜芯片進(jìn)行篩選,比對(duì)肝轉(zhuǎn)移灶與原發(fā)灶中存在差異表達(dá)的miRNA,剔除其中不配對(duì)的組織標(biāo)本后,共納入22例配對(duì)的原發(fā)灶和肝轉(zhuǎn)移灶芯片數(shù)據(jù)集,將基因芯片數(shù)據(jù)導(dǎo)入GEO2R,采用重疊一致對(duì)比的研究方法,取得每組芯片數(shù)據(jù)中一致性表達(dá)變化的miRNA共43個(gè),其中,上調(diào)的基因共34個(gè),下調(diào)的基因共9個(gè)。另一方面,通過文本挖掘,尋找已確認(rèn)的能夠調(diào)控結(jié)直腸癌干細(xì)胞特性的miRNAs。將兩種來源的miRNA數(shù)據(jù)集取交集,分析出7個(gè)可能參與肝轉(zhuǎn)移性結(jié)直腸癌干細(xì)胞的miRNAs:hsa-miR-20a、hsa-miR-26b、hsa-miR-146a、hsa-miR-17、hsa-miR-451、hsa-miR-23a、hsa-miR-29a。在20組配對(duì)的原發(fā)灶和肝轉(zhuǎn)移灶中對(duì)這7個(gè)miRNA的表達(dá)進(jìn)行熒光定量PCR分析,發(fā)現(xiàn)僅有hsa-miR-17的引物能夠較好的擴(kuò)增出目的基因。相對(duì)于原發(fā)灶組織,miR-17在結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移灶組織中表達(dá)顯著上調(diào),肝轉(zhuǎn)移灶中的表達(dá)量為原發(fā)灶的3.48倍,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。其中miR-17的表達(dá)上調(diào)與原發(fā)腫瘤分化程度及術(shù)前是否接受化療相關(guān)(P0.05),和患者的性別、年齡、原發(fā)腫瘤部位、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無關(guān)。通過對(duì)4個(gè)數(shù)據(jù)庫的檢索,找到其中3個(gè)數(shù)據(jù)庫中hsamiR-17共同的靶基因618個(gè)。對(duì)hsa-miR-17的618個(gè)靶基因進(jìn)行了KEGG信號(hào)通路分析結(jié)果顯示這些靶基因主要參與MAPK信號(hào)通路、內(nèi)吞信號(hào)通路、腫瘤信號(hào)通路、軸突生長(zhǎng)信號(hào)、細(xì)胞骨架、神經(jīng)生長(zhǎng)因子信號(hào)通路、酪氨酸激酶信號(hào)通路、細(xì)胞周期、胰島素信號(hào)通路、細(xì)胞節(jié)律和包括結(jié)直腸癌在內(nèi)的多種腫瘤相關(guān)通路。結(jié)論:1.篩選出7個(gè)與結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移相關(guān)的miRNA,分別為hsamiR-20a、hsa-miR-26b、hsa-miR-146a、hsa-miR-17、hsa-miR-451、hsa-miR-23a、hsa-miR-29a,可能作為預(yù)測(cè)結(jié)直腸癌發(fā)生肝轉(zhuǎn)移的分子標(biāo)志物。2.熒光定量PCR驗(yàn)證結(jié)果提示7個(gè)分子標(biāo)志物僅有miR-17能夠較好的反應(yīng)腫瘤干細(xì)胞相關(guān)miRNA在結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移中的表達(dá)差異。相對(duì)于原發(fā)灶組織,miR-17在結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移灶組織中表達(dá)顯著上調(diào),且其表達(dá)上調(diào)與原發(fā)腫瘤分化程度及術(shù)前是否接受化療相關(guān)。3.對(duì)miR-17靶基因信號(hào)通路分析的結(jié)果提示miR-17可能參與了結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移的發(fā)生發(fā)展過程,通過調(diào)控miR-17在結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移中的表達(dá),可能為結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移行靶向治療提供依據(jù),提高結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移的治療效果。
【圖文】：

圖 1-1 內(nèi)參基因 U6 的熔解曲線② 目的基因 miR-17 的熔解曲線呈單峰，未出現(xiàn)雙峰或多峰，且熔解溫（Tm）均在 80℃-82℃之間（圖 1-2），證明沒有非特異性產(chǎn)物或引物聚體生成，可以用來后續(xù)實(shí)驗(yàn)測(cè)定。

圖 1-1 內(nèi)參基因 U6 的熔解曲線② 目的基因 miR-17 的熔解曲線呈單峰，未出現(xiàn)雙峰或多峰，，且熔解溫（Tm）均在 80℃-82℃之間（圖 1-2），證明沒有非特異性產(chǎn)物或引物聚體生成，可以用來后續(xù)實(shí)驗(yàn)測(cè)定。
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R735.34

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 馬明;;79例結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移綜合治療效果分析[J];世界最新醫(yī)學(xué)信息文摘;2019年50期

2 文宇;張子建;顏世超;劉翔;周江蛟;熊力;李清龍;;理想小鼠結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移模型的建立及研究進(jìn)展[J];中國(guó)普通外科雜志;2019年04期

3 田靖波;曹李;董光龍;;結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移治療中存在的問題及爭(zhēng)議[J];臨床醫(yī)藥文獻(xiàn)電子雜志;2019年35期

4 陳杰;楊柱;唐東昕;羅莉;王鏡輝;王倩;李娟;;淺談結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移的防治措施[J];中西醫(yī)結(jié)合心血管病電子雜志;2017年22期

5 劉娟;蒲晏均;伍映鑫;葉華平;張自銀;青廉;;結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移以手術(shù)治療為主的綜合治療效果分析[J];中國(guó)處方藥;2018年01期

6 茅銳;張業(yè)繁;陳曉;趙建軍;趙宏;;肝動(dòng)脈灌注化療在結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移術(shù)后輔助治療中的應(yīng)用[J];肝癌電子雜志;2017年02期

7 ;編者按[J];肝癌電子雜志;2017年01期

8 付晨p

本文編號(hào)：2595320