【摘要】：甘草,是一種傳統(tǒng)的藥食同源的植物,幾個(gè)世紀(jì)以來(lái)一直被用于多種疾病的治療,包括肝癌。然而,甘草的不同生物學(xué)功能的化學(xué)基礎(chǔ)和生物學(xué)機(jī)制尚未完全闡明。甘草香豆素是從甘草中提取的具有生物活性的主要香豆素類化學(xué)物。本課題以甘草香豆素為研究對(duì)象,深入研究了其抗肝癌的功效及其機(jī)制。原發(fā)性肝癌(肝細(xì)胞癌和肝內(nèi)膽管癌)是世界上最常見的腫瘤之一,死亡率在腫瘤誘發(fā)的相關(guān)死亡率中列第二位。且肝癌是惡性較強(qiáng)的癌癥,缺乏特異的靶向治療手段,且愈后較差,對(duì)大多抗腫瘤藥物具有很強(qiáng)的耐藥性。肝癌發(fā)病因素廣泛,其中酒精性肝損傷為肝癌發(fā)病的主要誘因之一�？刂聘伟┌l(fā)病危險(xiǎn)因素,尋找肝癌的天然化學(xué)預(yù)防、治療藥物及有效地靶點(diǎn)藥物成為當(dāng)前預(yù)防和治療肝癌的研究熱點(diǎn)。本文首先采用酒精性肝損傷細(xì)胞及動(dòng)物模型,闡明甘草香豆素可抑制酒精暴露引起的肝臟脂肪變性,緩解急性或慢性酒精性肝損傷。機(jī)制上,通過體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)和體內(nèi)小鼠急性及慢性酒精性肝損傷模型表明甘草香豆素可通過激活Nrf2信號(hào)通路從而保護(hù)酒精性肝損傷。甘草香豆素的這一作用降低了酒精性脂肪肝向肝癌的轉(zhuǎn)化風(fēng)險(xiǎn)。此外,本文通過肝癌體外細(xì)胞及肝癌細(xì)胞皮下異位成瘤模型的建立,進(jìn)一步證明甘草香豆素能通過引起肝細(xì)胞周期阻滯及細(xì)胞凋亡,抑制肝癌細(xì)胞的生長(zhǎng)。機(jī)制上,甘草香豆素的這一作用依賴于與TOPK的直接結(jié)合,使TOPK激酶活性降低,進(jìn)而激活抑癌基因p53,起到預(yù)防和治療肝細(xì)胞癌的作用。本文在進(jìn)行甘草香豆素抗肝細(xì)胞癌的機(jī)制研究中發(fā)現(xiàn),甘草香豆素可以顯著抑制肝細(xì)胞癌的mTOR活性及造成細(xì)胞周期阻滯,并且在肝內(nèi)膽管癌細(xì)胞中同樣具有此特性。因此,文中將mTOR抑制劑和細(xì)胞周期抑制劑(CDK4/6抑制劑)聯(lián)合使用,發(fā)現(xiàn)聯(lián)合用藥具有抑制體外ICC細(xì)胞生長(zhǎng)的作用且具有協(xié)同性。此外,相較于mTOR抑制劑或CDK4/6抑制劑單獨(dú)用藥,聯(lián)合治療組在小鼠ICC模型中顯示出更加顯著的療效。機(jī)制上,本文證明聯(lián)合使用mTOR和CDK4/6抑制劑能在體外和體內(nèi)顯著抑制ICC細(xì)胞的細(xì)胞增殖。同時(shí),CDK4/6抑制劑能增強(qiáng)mTOR抑制劑的活性;而mTOR抑制劑阻止CDK4/6抑制劑誘導(dǎo)的細(xì)胞周期蛋白D1的上調(diào),增加癌細(xì)胞對(duì)CDK4/6抑制劑的敏感性,從而進(jìn)一步誘導(dǎo)細(xì)胞周期阻滯。本文圍繞原發(fā)性肝癌的預(yù)防和治療,分別闡明甘草香豆素防治酒精性肝損傷,抑制肝細(xì)胞癌和肝內(nèi)膽管癌的作用,同時(shí)分別就甘草香豆素對(duì)肝癌細(xì)胞的周期阻滯作用及對(duì)mTOR信號(hào)通路的抑制作用進(jìn)行進(jìn)一步研究,深入論證了相應(yīng)靶點(diǎn)的抗癌作用。綜上,本文對(duì)肝癌的防治提供了新的治療方法及理論基礎(chǔ)。
【圖文】：

露逡逑的主要代謝器官，酒精通過一系列的氧化過程完成解化過程可有效避免酒精大量在體內(nèi)細(xì)胞或器官內(nèi)沉量酒精之后，肝臟不能及時(shí)代謝，從而酒精積累，導(dǎo)取代，即產(chǎn)生肝硬化［１５］。肝硬化之后無(wú)法行使解毒功染，增加罹患肝癌的風(fēng)險(xiǎn)。有研究指出，與非飲酒者風(fēng)險(xiǎn)增加約９０％，邋ＩＣＣ風(fēng)險(xiǎn)增加約６８％％１，表明酒之一。逡逑長(zhǎng)期飲酒會(huì)加重肝臟負(fù)擔(dān)，，從而誘發(fā)酒精性脂肪肝等甚至肝癌。其中酒精性脂肪肝是酒精引起的最早、最攝入，酒精性肝病可導(dǎo)致肝臟炎癥反應(yīng)，即脂肪性肝終導(dǎo)致癌癥的發(fā)生，如圖１－１所示。隨著人們生活水的消耗量也呈逐年遞增的趨勢(shì)。因此，肝癌的這一風(fēng)

由此猜想，ＧＣＭ對(duì)于酒精性肝損傷的保護(hù)作用可能通過Ｎｒｆ２信號(hào)通路完成。逡逑為進(jìn)一步驗(yàn)證此假設(shè)是否正確，文中使用蛋白免疫印跡法對(duì)Ｎｒｆ２蛋白及其相關(guān)轉(zhuǎn)錄逡逑靶點(diǎn)Ｈ０－１及ＧＣＬＣ蛋白的表達(dá)進(jìn)行分析。如圖２－４邋Ａ所示，慢性酒精性肝損傷模型逡逑中，ＧＣＭ對(duì)照組中，ＧＣＭ處理可以顯著升高Ｎｒｆ２，邋Ｈ０－１及ＧＣＬＣ蛋白含量。且與逡逑對(duì)照組相比，酒精暴露能下調(diào)Ｎｒｆ２，邋ＩＩＯ－１及ＧＣＬＣ蛋白的表達(dá)（圖２－４Ｂ）。經(jīng)ＧＣＭ逡逑２６逡逑
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R735.7

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2595196