【摘要】：目的甲基化 CpG 結(jié)合域蛋白 3(methyl-CpG-binding domain protein 3,MBD3)是核小體重塑和組蛋白去乙�；�(NuRD)復(fù)合物中的核心亞基,通過表觀遺傳調(diào)控參與乳腺癌、胰腺癌等腫瘤的發(fā)生與發(fā)展。然而,MBD3在肝細(xì)胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中的作用目前尚無報道。本課題旨在通過分析MBD3在肝癌組織與癌旁正常肝組織中的表達(dá)差異以及肝癌組織中MBD3的表達(dá)與患者預(yù)后的相關(guān)性,探討MBD3在肝癌發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移過程中的作用,深入闡明其影響肝癌細(xì)胞增殖及侵襲能力的具體分子機(jī)制,為發(fā)現(xiàn)與HCC預(yù)后相關(guān)的新的腫瘤標(biāo)志物及治療靶點(diǎn)提供理論基礎(chǔ)。方法(1)收集HCC臨床樣本并制作成組織芯片,通過免疫組化染色分析MBD3在肝癌組織及癌旁正常肝組織中的表達(dá)差異,并統(tǒng)計分析肝癌中MBD3的表達(dá)與患者總生存時間(Overall survival,OS)、無腫瘤復(fù)發(fā)時間(Disease-free survival,DFS)、無腫瘤轉(zhuǎn)移時間(Metastasis-free survival,MF S)的關(guān)系。(2)利用MTS、平板克隆形成、軟瓊脂克隆球形成、劃痕實(shí)驗(yàn)、Transwell實(shí)驗(yàn)體外檢測MBD3對肝癌細(xì)胞增殖及侵襲能力的影響。(3)利用裸鼠皮下成瘤、裸鼠尾靜脈注射構(gòu)建肺轉(zhuǎn)移模型體內(nèi)檢測MBD3對肝癌細(xì)胞增殖及侵襲能力的影響。(4)通過全基因轉(zhuǎn)錄組生物測序分析、癌癥基因組圖譜(The Cancer Genome Atlas,TCGA)數(shù)據(jù)庫分析、細(xì)胞表型及動物表型的rescue實(shí)驗(yàn)以及臨床肝癌樣本的連續(xù)石蠟切片IHC染色全方位深入探討MBD3調(diào)控肝細(xì)胞癌生長及轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制。結(jié)果(1)臨床肝癌樣本的IHC染色結(jié)果顯示MBD3在肝癌組織中較癌旁正常肝組織明顯高表達(dá),且肝癌組織中MBD3的表達(dá)與預(yù)后OS、DFS、MFS均呈明顯負(fù)相關(guān)性。(2)MTS、平板克隆形成及軟瓊脂克隆球形成實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示MBD3可促進(jìn)肝癌細(xì)胞的增殖能力,劃痕實(shí)驗(yàn)、Transwell實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示MBD3可促進(jìn)肝癌細(xì)胞的侵襲能力。(3)裸鼠皮下成瘤實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示MBD3可促進(jìn)肝癌細(xì)胞的生長,裸鼠尾靜脈注射構(gòu)建肺轉(zhuǎn)移模型結(jié)果顯示MBD3可促進(jìn)肝癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移。(4)全基因轉(zhuǎn)錄組測序分析篩選出受MBD3調(diào)控的下游靶基因一抑癌基因TFPI2。TCGA數(shù)據(jù)庫分析結(jié)果提示MBD3在肝癌中的表達(dá)較正常肝組織明顯增高,且與預(yù)后呈負(fù)相關(guān),進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)在肝癌中MBD3的表達(dá)與TFPI2呈負(fù)相關(guān)。在肝癌細(xì)胞中經(jīng)Q-PCR及Western Blot驗(yàn)證MBD3與TFPI2的表達(dá)呈現(xiàn)相反的關(guān)系。細(xì)胞水平及動物學(xué)水平的rescue實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示MBD3可通過抑制TFPI2促進(jìn)肝癌細(xì)胞的生長及轉(zhuǎn)移。肝癌臨床樣本的連續(xù)石蠟切片IHC染色結(jié)果提示MBD3的表達(dá)與TFPI2的表達(dá)呈明顯負(fù)相關(guān),且TFPI2的表達(dá)與標(biāo)記CD34的MVD(微血管密度)值呈明顯負(fù)相關(guān)。結(jié)論(1)MBD3在肝癌組織中明顯高表達(dá),且與肝癌患者預(yù)后密切相關(guān),是肝癌患者的一個獨(dú)立的不良預(yù)后因素。(2)MBD3通過抑制抑癌基因TFPI2的轉(zhuǎn)錄及蛋白表達(dá)從而促進(jìn)了肝癌細(xì)胞的生長及轉(zhuǎn)移。
【圖文】：

結(jié)果如圖１所示，２１４例肝癌組織及癌旁正常肝組織的ＩＨＣ染色評分結(jié)果表明癌旁組織逡逑中ＭＢＤ３平均表達(dá)強(qiáng)度為１．６５４±２．７４３，癌組織中平均強(qiáng)度為５．５５７土３．４９９，，統(tǒng)計學(xué)分逡逑析顯示在肝癌組織中ＭＢＤ３的表達(dá)明顯高于癌旁組織（戶＜０．０００１）（圖２）。逡逑２０邋Ｘ邐４００Ｘ逡逑ｉ逡逑圖１．ＭＢＤ３在肝癌組織與癌旁正常肝組織中的表達(dá)示例圖逡逑８－ｉ逡逑１５＂｜邋Ｐ＜邋０．０００１邐＊＊＊逡逑ｉ－邋Ｉ邋ａ邋ｉ邋■逡逑Ｊ邋ｊ悙：ｌａｌ－逡逑Ａｄｊａｃｅｎｔ邋ｎｏｎｔｕｍｏｒ邋ＨＣＣ邐＾邋＿Ｃ逡逑ｙ逡逑圖２．邋ＭＢＤ３在肝癌組織與癌旁正常肝組織中的表達(dá)統(tǒng)計圖逡逑１３逡逑

１邋ＭＢＤ３在肝癌組織及癌旁正常肝組織中的表達(dá)差異逡逑ＭＢＤ３蛋白陽性染色主要定位于肝癌細(xì)胞及正常肝細(xì)胞的細(xì)胞核內(nèi)，免疫組化染色逡逑結(jié)果如圖１所示，２１４例肝癌組織及癌旁正常肝組織的ＩＨＣ染色評分結(jié)果表明癌旁組織逡逑中ＭＢＤ３平均表達(dá)強(qiáng)度為１．６５４±２．７４３，癌組織中平均強(qiáng)度為５．５５７土３．４９９，統(tǒng)計學(xué)分逡逑析顯示在肝癌組織中ＭＢＤ３的表達(dá)明顯高于癌旁組織（戶＜０．０００１）（圖２）。逡逑２０邋Ｘ邐４００Ｘ逡逑ｉ逡逑圖１．ＭＢＤ３在肝癌組織與癌旁正常肝組織中的表達(dá)示例圖逡逑８－ｉ逡逑１５＂｜邋Ｐ＜邋０．０００１邐＊＊＊逡逑ｉ－邋Ｉ邋ａ邋ｉ邋■逡逑Ｊ邋ｊ悙：ｌａｌ－逡逑Ａｄｊａｃｅｎｔ邋ｎｏｎｔｕｍｏｒ邋ＨＣＣ邐＾邋＿Ｃ逡逑ｙ逡逑圖２．邋ＭＢＤ３在肝癌組織與癌旁正常肝組織中的表達(dá)統(tǒng)計圖逡逑
【學(xué)位授予單位】：中國人民解放軍醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R735.7

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 Mitsuro Kanda;Hiroyuki Sugimoto;Yasuhiro Kodera;;Genetic and epigenetic aspects of initiation and progression of hepatocellular carcinoma[J];World Journal of Gastroenterology;2015年37期

2 Danila CORADINI ;Annalisa SPERANZA;;Histone deacetylase inhibitors for treatment of hepatocellular carcinoma[J];Acta Pharmacologica Sinica;2005年09期

本文編號：2595073