【摘要】：目的:以體外培養(yǎng)的人肺癌A549細胞為研究對象,探討中藥單體丹皮酚對人肺癌A549細胞增殖、侵襲和遷移能力以及MAPKs信號通路的影響,為抗肺癌新藥的研發(fā)提供理論依據(jù)。方法:體外培養(yǎng)對數(shù)期肺癌A549細胞,采用CCK-8(Cell Counting Kit-8)法檢測不同濃度丹皮酚對肺癌A549細胞系的抑制率,計算半數(shù)抑制濃度(IC50)。將實驗對象分為空白對照組、不同濃度的丹皮酚(6.25μg/m L、12.5μg/m L、25μg/m L)干預組,通過細胞劃痕實驗、Transwell小室侵襲實驗分別檢測不同濃度丹皮酚對A549細胞遷移及侵襲能力的影響。酶聯(lián)免疫吸附法(Elisa)檢測經(jīng)不同濃度丹皮酚處理24 h后培養(yǎng)上清中基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP-2、MMP-9)表達水平。Western blot法檢測A549細胞內(nèi)MAPKs信號通路中ERK、p-ERK1/2,JNK、p-JNK及P38、p-P38等通路關(guān)鍵蛋白表達水平的變化情況。結(jié)果:丹皮酚對A549細胞的增殖具有抑制作用,呈濃度依賴性,對A549細胞的IC50為54.68±3.59μg/m L。細胞劃痕實驗結(jié)果證實:不同濃度(6.25μg/m L、12.5μg/m L、25μg/m L)的丹皮酚以濃度依賴的方式抑制A549細胞的遷移,,隨著各組藥物干預濃度增加,24 h劃痕愈合率逐漸降低,與空白對照組(0μg/m L)相比,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。Transwell小室實驗結(jié)果證實,不同濃度的丹皮酚作用24 h后,A549細胞的侵襲能力明顯受到抑制,且隨著丹皮酚濃度增大,穿過微孔濾膜的細胞數(shù)逐漸降低,與空白對照組(0μg/m L)相比,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。Elisa檢測發(fā)現(xiàn)6.25μg/m L、12.5μg/m L、25μg/m L的丹皮酚組可降低A549細胞培養(yǎng)上清分泌性MMP-2和MMP-9的表達水平,與空白對照組相比,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)Western blot結(jié)果提示12.5μg/m L、25μg/m L的丹皮酚組可抑制MAPKs信號通路中ERK1/2通路p-ERK蛋白的磷酸化水平,與空白對照組相比,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05),而對P38、JNK通路的蛋白磷酸化水平無明顯影響。結(jié)論:在一定濃度范圍內(nèi),丹皮酚可抑制人非小細胞肺癌A549細胞的增殖、遷移和侵襲,下調(diào)分泌蛋白MMP-2和MMP-9的表達,其機制可能與抑制MAPKs信號通路中的ERK1/2通路有關(guān)。
【圖文】：

1 不同濃度的丹皮酚對 A549 細胞遷移能力的痕實驗結(jié)果（放大 100 倍）:圖 a-d：藥物干預前（0干預 24 h 后的劃痕；圖 a, e ：空白對照組；圖 b, c, g：12.5 μg/mL 丹皮酚組；圖 d, h：25 μg/mL 丹統(tǒng)計學分析結(jié)果（n=3）: 與空白對照組（0 μg/mL）酚對 A549 細胞侵襲能力的影響ll 侵襲實驗結(jié)果表明，經(jīng)不同濃度（6.25 μg/mL、1丹皮酚作用 24 h 后，A549 細胞的侵襲能力明顯受到抑穿過微孔濾膜的細胞數(shù)逐漸降低，與空白對照組（0 μ學意義（P＜0.05）。丹皮酚對 A549 細胞侵襲能力的抑

圖 2 不同濃度的丹皮酚對 A549 細胞侵襲能力的ranswell 小室侵襲實驗結(jié)果（放大 100 倍）：圖 a：空白/mL 丹皮酚組；圖 c：12.5 μg/mL 丹皮酚組；圖 d,：25膜細胞數(shù)的統(tǒng)計學分析結(jié)果（n=3）: 與空白對照組（0 ；**P＜0.01。皮酚對 A549 細胞 MMP-2 和 MMP-9 表達水平的影結(jié)果表明，12.5 μg/mL、25 μg/mL 的丹皮酚作用 24 h 上清分泌性 MMP-2 的表達水平，與空白對照組相比，，差異5）。6.25 μg/mL、12.5 μg/mL、25 μg/mL 的丹皮酚均9 的表達，與空白對照組相比，差異有統(tǒng)計學意義（P＜濃度丹皮酚作用于 A549 細胞 24 h 后分泌性 MMP-2、MMP-
【學位授予單位】：南華大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R734.2

【參考文獻】

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本文編號：2593979