【摘要】：目的:以體外培養(yǎng)的人肺癌A549細(xì)胞為研究對象,探討中藥單體丹皮酚對人肺癌A549細(xì)胞增殖、侵襲和遷移能力以及MAPKs信號(hào)通路的影響,為抗肺癌新藥的研發(fā)提供理論依據(jù)。方法:體外培養(yǎng)對數(shù)期肺癌A549細(xì)胞,采用CCK-8(Cell Counting Kit-8)法檢測不同濃度丹皮酚對肺癌A549細(xì)胞系的抑制率,計(jì)算半數(shù)抑制濃度(IC50)。將實(shí)驗(yàn)對象分為空白對照組、不同濃度的丹皮酚(6.25μg/m L、12.5μg/m L、25μg/m L)干預(yù)組,通過細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)、Transwell小室侵襲實(shí)驗(yàn)分別檢測不同濃度丹皮酚對A549細(xì)胞遷移及侵襲能力的影響。酶聯(lián)免疫吸附法(Elisa)檢測經(jīng)不同濃度丹皮酚處理24 h后培養(yǎng)上清中基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP-2、MMP-9)表達(dá)水平。Western blot法檢測A549細(xì)胞內(nèi)MAPKs信號(hào)通路中ERK、p-ERK1/2,JNK、p-JNK及P38、p-P38等通路關(guān)鍵蛋白表達(dá)水平的變化情況。結(jié)果:丹皮酚對A549細(xì)胞的增殖具有抑制作用,呈濃度依賴性,對A549細(xì)胞的IC50為54.68±3.59μg/m L。細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí):不同濃度(6.25μg/m L、12.5μg/m L、25μg/m L)的丹皮酚以濃度依賴的方式抑制A549細(xì)胞的遷移,,隨著各組藥物干預(yù)濃度增加,24 h劃痕愈合率逐漸降低,與空白對照組(0μg/m L)相比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。Transwell小室實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí),不同濃度的丹皮酚作用24 h后,A549細(xì)胞的侵襲能力明顯受到抑制,且隨著丹皮酚濃度增大,穿過微孔濾膜的細(xì)胞數(shù)逐漸降低,與空白對照組(0μg/m L)相比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。Elisa檢測發(fā)現(xiàn)6.25μg/m L、12.5μg/m L、25μg/m L的丹皮酚組可降低A549細(xì)胞培養(yǎng)上清分泌性MMP-2和MMP-9的表達(dá)水平,與空白對照組相比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)Western blot結(jié)果提示12.5μg/m L、25μg/m L的丹皮酚組可抑制MAPKs信號(hào)通路中ERK1/2通路p-ERK蛋白的磷酸化水平,與空白對照組相比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),而對P38、JNK通路的蛋白磷酸化水平無明顯影響。結(jié)論:在一定濃度范圍內(nèi),丹皮酚可抑制人非小細(xì)胞肺癌A549細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲,下調(diào)分泌蛋白MMP-2和MMP-9的表達(dá),其機(jī)制可能與抑制MAPKs信號(hào)通路中的ERK1/2通路有關(guān)。
【圖文】：

1 不同濃度的丹皮酚對 A549 細(xì)胞遷移能力的痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果（放大 100 倍）:圖 a-d：藥物干預(yù)前（0干預(yù) 24 h 后的劃痕；圖 a, e ：空白對照組；圖 b, c, g：12.5 μg/mL 丹皮酚組；圖 d, h：25 μg/mL 丹統(tǒng)計(jì)學(xué)分析結(jié)果（n=3）: 與空白對照組（0 μg/mL）酚對 A549 細(xì)胞侵襲能力的影響ll 侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，經(jīng)不同濃度（6.25 μg/mL、1丹皮酚作用 24 h 后，A549 細(xì)胞的侵襲能力明顯受到抑穿過微孔濾膜的細(xì)胞數(shù)逐漸降低，與空白對照組（0 μ學(xué)意義（P＜0.05）。丹皮酚對 A549 細(xì)胞侵襲能力的抑

圖 2 不同濃度的丹皮酚對 A549 細(xì)胞侵襲能力的ranswell 小室侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果（放大 100 倍）：圖 a：空白/mL 丹皮酚組；圖 c：12.5 μg/mL 丹皮酚組；圖 d,：25膜細(xì)胞數(shù)的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析結(jié)果（n=3）: 與空白對照組（0 ；**P＜0.01。皮酚對 A549 細(xì)胞 MMP-2 和 MMP-9 表達(dá)水平的影結(jié)果表明，12.5 μg/mL、25 μg/mL 的丹皮酚作用 24 h 上清分泌性 MMP-2 的表達(dá)水平，與空白對照組相比，，差異5）。6.25 μg/mL、12.5 μg/mL、25 μg/mL 的丹皮酚均9 的表達(dá)，與空白對照組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜濃度丹皮酚作用于 A549 細(xì)胞 24 h 后分泌性 MMP-2、MMP-
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R734.2

【參考文獻(xiàn)】

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1 陶s

本文編號(hào)：2593979