RORα高表達(dá)對(duì)二烯丙基二硫抑制人胃癌MGC803細(xì)胞上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化的影響
發(fā)布時(shí)間：2020-03-20 18:06
【摘要】：背景與目的:二烯丙基二硫(diallyl disulfide,DADS)具有抗腫瘤的作用。該研究在DADS上調(diào)人胃癌MGC803細(xì)胞RORα的基礎(chǔ)上,觀察DADS與RORα高表達(dá)對(duì)MGC803細(xì)胞上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelialmesenchymal transformation,EMT)的影響。方法:相差顯微鏡觀察MGC803細(xì)胞形態(tài)的影響。采用反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)、蛋白[質(zhì)]印跡法(Western blot)、免疫熒光與免疫組織化學(xué)檢測(cè)EMT相關(guān)分子表達(dá)。裸鼠實(shí)驗(yàn)檢測(cè)對(duì)移植瘤生長的影響。結(jié)果:相差顯微鏡顯示,DADS組與RORα高表達(dá)組細(xì)胞大小較MGC803細(xì)胞一致,呈圓形或橢圓形,梭形細(xì)胞少見,異型性降低。RORα高表達(dá)加DADS后,上述改變更為明顯。Western blot檢測(cè)結(jié)果顯示,DADS組與RORα高表達(dá)組Snail蛋白表達(dá)明顯下調(diào),DADS+RORα高表達(dá)組更明顯(P0.05)。RT-PCR與Western blot檢測(cè)顯示,DADS與RORα高表達(dá)可明顯下調(diào)Vimentin和上調(diào)E-cadherin m RNA與蛋白表達(dá),DADS+RORα高表達(dá)組更為顯著(P0.05)。免疫熒光顯示,DADS組與RORα高表達(dá)組細(xì)胞Snail與Vimentin表達(dá)較對(duì)照組明顯減弱和E-cadherin表達(dá)顯著增強(qiáng),DADS+RORα高表達(dá)組更為顯著,與Western blot結(jié)果一致。裸鼠實(shí)驗(yàn)顯示,DADS組、RORα高表達(dá)組與RORα高表達(dá)+DADS組移植瘤較對(duì)照組生長減慢(P0.05),并且,移植瘤體重較對(duì)照組明顯降低,抑瘤率分別為15.07%、26.55%與49.27%(P0.05)。免疫組織化學(xué)檢測(cè)結(jié)果顯示,DADS組、RORα高表達(dá)組與RORα高表達(dá)+DADS組較對(duì)照組的Ki-67、CD34與Vimentin表達(dá)均明顯降低,E-cadherin表達(dá)明顯增強(qiáng)。結(jié)論:RORα高表達(dá)可增強(qiáng)DADS體內(nèi)外抑制人胃癌細(xì)胞EMT的作用。
【圖文】：
362降低。RORα高表達(dá)細(xì)胞大小較一致，呈圓形或橢圓形，細(xì)胞膜突起少見，核質(zhì)比例減少，異型性顯著降低。RORα高表達(dá)加DADS后，上述改變更為明顯。表明DADS與RORα高表達(dá)可從形態(tài)上抑制MGC803細(xì)胞EMT，RORα高表達(dá)可增強(qiáng)DADS的抑制作用(圖1)。(Phase-contrastmicroscopy,×40)圖1RORα高表達(dá)對(duì)MGC803細(xì)胞形態(tài)的影響Fig.1ThemorphologicaleffectofoverexpressionofRORαinMGC803cellsA:MGC803;B:DADS;C:RORα/MGC803;D:RORα/MGC803+DADS圖2DADS與RORα高表達(dá)對(duì)Snail蛋白表達(dá)的影響Fig.2TheeffectofSnailexpressionbyDADSandoverexpressionofRORα1:MGC803;2:vector/MGC803;3:RORα/MGC803;4:MGC803+DADS;5:vector/MGC803+DADS;6:RORα/MGC803+DADS;*:P<0.05,comparedwithMGC803andvector/MGC803;#:P<0.05,comparedwithMGC803+DADS,vector/MGC803+DADSandRORα/MGC8032.2DADS與RORα高表達(dá)抑制MGC803細(xì)胞EMTWesternblot檢測(cè)結(jié)果顯示，DADS與RORα高表達(dá)可明顯下調(diào)MGC803細(xì)胞Snail蛋白表達(dá)(P<0.05)。并且，RT-PCR與Westernblot檢測(cè)結(jié)果顯示，DADS與RORα高表達(dá)可下調(diào)Vimentin和上調(diào)E-cadherinmRNA與蛋白表達(dá)(P<0.05)。上述改變RORα/MGC803+DADS作用更為明顯(P<0.05)。表明DADS與RORα高表達(dá)可通過下調(diào)Snail與Vimentin和上調(diào)E-cadherin抑制MGC803細(xì)胞EMT，RORα高表達(dá)可增強(qiáng)DADS的抑制作用(圖2~4)。2.3細(xì)胞免疫熒光檢測(cè)DADS與RORα高表達(dá)對(duì)EMT相關(guān)蛋白表達(dá)的影響免疫熒光檢測(cè)結(jié)果顯示，Snail蛋白定位細(xì)胞核，Vimentin與E-cadherin蛋白主要定位于細(xì)胞質(zhì)。DADS與RORα高表達(dá)組細(xì)胞Snail與Vimentin陽性表達(dá)較對(duì)照組明顯減弱，而E-cadherin陽性表達(dá)顯著增強(qiáng)，與Westernblot檢測(cè)結(jié)果一致(圖5)。2.4DADS與RORα高表達(dá)
362降低。RORα高表達(dá)細(xì)胞大小較一致，呈圓形或橢圓形，細(xì)胞膜突起少見，核質(zhì)比例減少，，異型性顯著降低。RORα高表達(dá)加DADS后，上述改變更為明顯。表明DADS與RORα高表達(dá)可從形態(tài)上抑制MGC803細(xì)胞EMT，RORα高表達(dá)可增強(qiáng)DADS的抑制作用(圖1)。(Phase-contrastmicroscopy,×40)圖1RORα高表達(dá)對(duì)MGC803細(xì)胞形態(tài)的影響Fig.1ThemorphologicaleffectofoverexpressionofRORαinMGC803cellsA:MGC803;B:DADS;C:RORα/MGC803;D:RORα/MGC803+DADS圖2DADS與RORα高表達(dá)對(duì)Snail蛋白表達(dá)的影響Fig.2TheeffectofSnailexpressionbyDADSandoverexpressionofRORα1:MGC803;2:vector/MGC803;3:RORα/MGC803;4:MGC803+DADS;5:vector/MGC803+DADS;6:RORα/MGC803+DADS;*:P<0.05,comparedwithMGC803andvector/MGC803;#:P<0.05,comparedwithMGC803+DADS,vector/MGC803+DADSandRORα/MGC8032.2DADS與RORα高表達(dá)抑制MGC803細(xì)胞EMTWesternblot檢測(cè)結(jié)果顯示，DADS與RORα高表達(dá)可明顯下調(diào)MGC803細(xì)胞Snail蛋白表達(dá)(P<0.05)。并且，RT-PCR與Westernblot檢測(cè)結(jié)果顯示，DADS與RORα高表達(dá)可下調(diào)Vimentin和上調(diào)E-cadherinmRNA與蛋白表達(dá)(P<0.05)。上述改變RORα/MGC803+DADS作用更為明顯(P<0.05)。表明DADS與RORα高表達(dá)可通過下調(diào)Snail與Vimentin和上調(diào)E-cadherin抑制MGC803細(xì)胞EMT，RORα高表達(dá)可增強(qiáng)DADS的抑制作用(圖2~4)。2.3細(xì)胞免疫熒光檢測(cè)DADS與RORα高表達(dá)對(duì)EMT相關(guān)蛋白表達(dá)的影響免疫熒光檢測(cè)結(jié)果顯示，Snail蛋白定位細(xì)胞核，Vimentin與E-cadherin蛋白主要定位于細(xì)胞質(zhì)。DADS與RORα高表達(dá)組細(xì)胞Snail與Vimentin陽性表達(dá)較對(duì)照組明顯減弱，而E-cadherin陽性表達(dá)顯著增強(qiáng)，與Westernblot檢測(cè)結(jié)果一致(圖5)。2.4DADS與RORα高表達(dá)
【圖文】：
362降低。RORα高表達(dá)細(xì)胞大小較一致，呈圓形或橢圓形，細(xì)胞膜突起少見，核質(zhì)比例減少，異型性顯著降低。RORα高表達(dá)加DADS后，上述改變更為明顯。表明DADS與RORα高表達(dá)可從形態(tài)上抑制MGC803細(xì)胞EMT，RORα高表達(dá)可增強(qiáng)DADS的抑制作用(圖1)。(Phase-contrastmicroscopy,×40)圖1RORα高表達(dá)對(duì)MGC803細(xì)胞形態(tài)的影響Fig.1ThemorphologicaleffectofoverexpressionofRORαinMGC803cellsA:MGC803;B:DADS;C:RORα/MGC803;D:RORα/MGC803+DADS圖2DADS與RORα高表達(dá)對(duì)Snail蛋白表達(dá)的影響Fig.2TheeffectofSnailexpressionbyDADSandoverexpressionofRORα1:MGC803;2:vector/MGC803;3:RORα/MGC803;4:MGC803+DADS;5:vector/MGC803+DADS;6:RORα/MGC803+DADS;*:P<0.05,comparedwithMGC803andvector/MGC803;#:P<0.05,comparedwithMGC803+DADS,vector/MGC803+DADSandRORα/MGC8032.2DADS與RORα高表達(dá)抑制MGC803細(xì)胞EMTWesternblot檢測(cè)結(jié)果顯示，DADS與RORα高表達(dá)可明顯下調(diào)MGC803細(xì)胞Snail蛋白表達(dá)(P<0.05)。并且，RT-PCR與Westernblot檢測(cè)結(jié)果顯示，DADS與RORα高表達(dá)可下調(diào)Vimentin和上調(diào)E-cadherinmRNA與蛋白表達(dá)(P<0.05)。上述改變RORα/MGC803+DADS作用更為明顯(P<0.05)。表明DADS與RORα高表達(dá)可通過下調(diào)Snail與Vimentin和上調(diào)E-cadherin抑制MGC803細(xì)胞EMT，RORα高表達(dá)可增強(qiáng)DADS的抑制作用(圖2~4)。2.3細(xì)胞免疫熒光檢測(cè)DADS與RORα高表達(dá)對(duì)EMT相關(guān)蛋白表達(dá)的影響免疫熒光檢測(cè)結(jié)果顯示，Snail蛋白定位細(xì)胞核，Vimentin與E-cadherin蛋白主要定位于細(xì)胞質(zhì)。DADS與RORα高表達(dá)組細(xì)胞Snail與Vimentin陽性表達(dá)較對(duì)照組明顯減弱，而E-cadherin陽性表達(dá)顯著增強(qiáng)，與Westernblot檢測(cè)結(jié)果一致(圖5)。2.4DADS與RORα高表達(dá)
362降低。RORα高表達(dá)細(xì)胞大小較一致，呈圓形或橢圓形，細(xì)胞膜突起少見，核質(zhì)比例減少，，異型性顯著降低。RORα高表達(dá)加DADS后，上述改變更為明顯。表明DADS與RORα高表達(dá)可從形態(tài)上抑制MGC803細(xì)胞EMT，RORα高表達(dá)可增強(qiáng)DADS的抑制作用(圖1)。(Phase-contrastmicroscopy,×40)圖1RORα高表達(dá)對(duì)MGC803細(xì)胞形態(tài)的影響Fig.1ThemorphologicaleffectofoverexpressionofRORαinMGC803cellsA:MGC803;B:DADS;C:RORα/MGC803;D:RORα/MGC803+DADS圖2DADS與RORα高表達(dá)對(duì)Snail蛋白表達(dá)的影響Fig.2TheeffectofSnailexpressionbyDADSandoverexpressionofRORα1:MGC803;2:vector/MGC803;3:RORα/MGC803;4:MGC803+DADS;5:vector/MGC803+DADS;6:RORα/MGC803+DADS;*:P<0.05,comparedwithMGC803andvector/MGC803;#:P<0.05,comparedwithMGC803+DADS,vector/MGC803+DADSandRORα/MGC8032.2DADS與RORα高表達(dá)抑制MGC803細(xì)胞EMTWesternblot檢測(cè)結(jié)果顯示，DADS與RORα高表達(dá)可明顯下調(diào)MGC803細(xì)胞Snail蛋白表達(dá)(P<0.05)。并且，RT-PCR與Westernblot檢測(cè)結(jié)果顯示，DADS與RORα高表達(dá)可下調(diào)Vimentin和上調(diào)E-cadherinmRNA與蛋白表達(dá)(P<0.05)。上述改變RORα/MGC803+DADS作用更為明顯(P<0.05)。表明DADS與RORα高表達(dá)可通過下調(diào)Snail與Vimentin和上調(diào)E-cadherin抑制MGC803細(xì)胞EMT，RORα高表達(dá)可增強(qiáng)DADS的抑制作用(圖2~4)。2.3細(xì)胞免疫熒光檢測(cè)DADS與RORα高表達(dá)對(duì)EMT相關(guān)蛋白表達(dá)的影響免疫熒光檢測(cè)結(jié)果顯示，Snail蛋白定位細(xì)胞核，Vimentin與E-cadherin蛋白主要定位于細(xì)胞質(zhì)。DADS與RORα高表達(dá)組細(xì)胞Snail與Vimentin陽性表達(dá)較對(duì)照組明顯減弱，而E-cadherin陽性表達(dá)顯著增強(qiáng)，與Westernblot檢測(cè)結(jié)果一致(圖5)。2.4DADS與RORα高表達(dá)
【參考文獻(xiàn)】
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2 蘇堅(jiān);趙曉紅;劉芳;夏紅;蘇波;曾希;凌暉;蘇琦;;RORα高表達(dá)抑制人胃癌MGC803細(xì)胞Wnt/β-catenin信號(hào)通路靶基因表達(dá)[J];中國細(xì)胞生物學(xué)學(xué)報(bào);2016年11期
3 Michele Orditura;Gennaro Galizia;Vincenzo Sforza;Valentina Gambardella;Alessio Fabozzi;Maria Maddalena Laterza;Francesca Andreozzi;Jole Ventriglia;Beatrice Savastano;Andrea Mabilia;Eva Lieto;Fortunato Ciardiello;Ferdinando De Vita;;Treatment of gastric cancer[J];World Journal of Gastroenterology;2014年07期
4 石鶯;黃建軍;蘇堅(jiān);唐海林;廖前進(jìn);曾希;凌暉;蘇琦;;胃癌中RORα蛋白的表達(dá)及臨床病理意義[J];臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志;2012年03期
5 趙曉紅;蘇琦;;維甲酸相關(guān)孤核受體α與Wnt信號(hào)途徑及腫瘤的關(guān)系[J];國際病理科學(xué)與臨床雜志;2011年03期
【共引文獻(xiàn)】
相關(guān)期刊論文 前2條
1 羅國培;金凱舟;程合;劉辰;倪泉興;虞先o
本文編號(hào)：2591991
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