【摘要】：現(xiàn)代醫(yī)學(xué)與生命科學(xué)的很多研究成果顯示很多嚴重疾病的發(fā)生與基因突變密切相關(guān),如癌癥和遺傳病等。由此可見,特定序列DNA的檢測分析在病原基因的測定、遺傳疾病的早期診斷和治療等方面具有非常重大的理論意義和應(yīng)用價值。近年來,一系列快速可靠的特定序列DNA檢測技術(shù)得以迅速發(fā)展,核酸檢測目前廣泛應(yīng)用于分子生物學(xué)、現(xiàn)代醫(yī)學(xué)、臨床診斷學(xué)等諸多領(lǐng)域。本論文以質(zhì)譜為檢測手段,利用磁珠的富集分離特性,再結(jié)合核酸放大技術(shù)等有效方法,發(fā)展了一些列癌癥相關(guān)DNA序列的分析檢測方案,主要包括以下幾部分內(nèi)容:TK1 m RNA與細胞分裂相關(guān),它是腫瘤生長的一種重要的標(biāo)志物。鑒定其在活體細胞內(nèi)基因水平的變化對于理解生物學(xué)過程和疾病機制有重要的價值,對于癌癥的檢測、預(yù)防和治療也越來越不可或缺。在第2章中,我們發(fā)展了一種基于鑭系離子標(biāo)記的等溫雜交鏈擴增技術(shù)檢測TK1 m RNA的新方法,鑒于HCR方法的優(yōu)勢和稀土離子標(biāo)記DNA的可行性,本課題以HCR信號擴增為基礎(chǔ)、結(jié)合稀土標(biāo)記的DNA之間互補雜交的作用原理以及利用ICP-MS的高靈敏檢測來實現(xiàn)目標(biāo)DNA的靈敏檢測。該檢測平臺主要包括如下幾個方面的工作:1.參照已有文獻報道的合成方法實現(xiàn)稀土離子標(biāo)記DNA探針。2.利用磁納米顆粒的富集分離作用和HCR信號擴增方法實施檢測目標(biāo)DNA的方案。3.用ICP-MS檢測樣品中稀土離子強度,從而實現(xiàn)目標(biāo)DNA的間接檢測。本方法綜合利用了HCR無酶恒溫信號放大、核酸適體的高特異性及ICP-MS靈敏度高、分辨率高、穩(wěn)定性好和抗干擾性強等優(yōu)勢實現(xiàn)目標(biāo)DNA序列的特異性檢測。DNA甲基化是參與基因調(diào)控的一種重要表觀遺傳機制,它可以通過影響DNA構(gòu)象、穩(wěn)定性和與蛋白質(zhì)相互作用等方式實現(xiàn)對基因表達的調(diào)節(jié),Cp G島的甲基化可能是最早研究的發(fā)生在多種癌癥中的體細胞基因組改變之一。很多科學(xué)家報道了不同癌癥中發(fā)生的甲基化異�，F(xiàn)象,它已成為多種腫瘤診斷的生物標(biāo)志物之一,因此DNA甲基化的分析對于了解表觀遺傳學(xué)的影響至關(guān)重要。在第3章中,我們借助于磁珠捕獲富集分離功能,以前列腺組織細胞為檢測對象,直接進樣電噴霧質(zhì)譜達到檢測DNA甲基化的目的。該方法設(shè)計原理簡單、靈敏度高、選擇性好,適用于實際樣品的分析。
【圖文】：

圖1.3.2 表示質(zhì)譜儀的基本組成圖。根據(jù)進樣方式的不同，可分為直接進樣，色譜進樣和加熱進樣等幾種；根據(jù)離子源的種類不同，可分為電子電離源(EI)、電噴霧源(ESI)、等離子體源（ICP）和大氣壓化學(xué)電離源(APCI)等幾類；根據(jù)質(zhì)量分析器的不同，可分為四極桿分析器(Quadrupole analyzer)、傅里葉變換離子回旋共振

圖1.3.2 表示質(zhì)譜儀的基本組成圖。根據(jù)進樣方式的不同，，可分為直接進樣，色譜進樣和加熱進樣等幾種；根據(jù)離子源的種類不同，可分為電子電離源(EI)、電噴霧源(ESI)、等離子體源（ICP）和大氣壓化學(xué)電離源(APCI)等幾類；根據(jù)質(zhì)量分析器的不同，可分為四極桿分析器(Quadrupole analyzer)、傅里葉變換離子回旋共振
【學(xué)位授予單位】：湖南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R730.4;O657.63

【參考文獻】

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本文編號：2587493