【摘要】：現代醫(yī)學與生命科學的很多研究成果顯示很多嚴重疾病的發(fā)生與基因突變密切相關,如癌癥和遺傳病等。由此可見,特定序列DNA的檢測分析在病原基因的測定、遺傳疾病的早期診斷和治療等方面具有非常重大的理論意義和應用價值。近年來,一系列快速可靠的特定序列DNA檢測技術得以迅速發(fā)展,核酸檢測目前廣泛應用于分子生物學、現代醫(yī)學、臨床診斷學等諸多領域。本論文以質譜為檢測手段,利用磁珠的富集分離特性,再結合核酸放大技術等有效方法,發(fā)展了一些列癌癥相關DNA序列的分析檢測方案,主要包括以下幾部分內容:TK1 m RNA與細胞分裂相關,它是腫瘤生長的一種重要的標志物。鑒定其在活體細胞內基因水平的變化對于理解生物學過程和疾病機制有重要的價值,對于癌癥的檢測、預防和治療也越來越不可或缺。在第2章中,我們發(fā)展了一種基于鑭系離子標記的等溫雜交鏈擴增技術檢測TK1 m RNA的新方法,鑒于HCR方法的優(yōu)勢和稀土離子標記DNA的可行性,本課題以HCR信號擴增為基礎、結合稀土標記的DNA之間互補雜交的作用原理以及利用ICP-MS的高靈敏檢測來實現目標DNA的靈敏檢測。該檢測平臺主要包括如下幾個方面的工作:1.參照已有文獻報道的合成方法實現稀土離子標記DNA探針。2.利用磁納米顆粒的富集分離作用和HCR信號擴增方法實施檢測目標DNA的方案。3.用ICP-MS檢測樣品中稀土離子強度,從而實現目標DNA的間接檢測。本方法綜合利用了HCR無酶恒溫信號放大、核酸適體的高特異性及ICP-MS靈敏度高、分辨率高、穩(wěn)定性好和抗干擾性強等優(yōu)勢實現目標DNA序列的特異性檢測。DNA甲基化是參與基因調控的一種重要表觀遺傳機制,它可以通過影響DNA構象、穩(wěn)定性和與蛋白質相互作用等方式實現對基因表達的調節(jié),Cp G島的甲基化可能是最早研究的發(fā)生在多種癌癥中的體細胞基因組改變之一。很多科學家報道了不同癌癥中發(fā)生的甲基化異�，F象,它已成為多種腫瘤診斷的生物標志物之一,因此DNA甲基化的分析對于了解表觀遺傳學的影響至關重要。在第3章中,我們借助于磁珠捕獲富集分離功能,以前列腺組織細胞為檢測對象,直接進樣電噴霧質譜達到檢測DNA甲基化的目的。該方法設計原理簡單、靈敏度高、選擇性好,適用于實際樣品的分析。
【圖文】：

圖1.3.2 表示質譜儀的基本組成圖。根據進樣方式的不同，可分為直接進樣，色譜進樣和加熱進樣等幾種；根據離子源的種類不同，可分為電子電離源(EI)、電噴霧源(ESI)、等離子體源（ICP）和大氣壓化學電離源(APCI)等幾類；根據質量分析器的不同，可分為四極桿分析器(Quadrupole analyzer)、傅里葉變換離子回旋共振

圖1.3.2 表示質譜儀的基本組成圖。根據進樣方式的不同，，可分為直接進樣，色譜進樣和加熱進樣等幾種；根據離子源的種類不同，可分為電子電離源(EI)、電噴霧源(ESI)、等離子體源（ICP）和大氣壓化學電離源(APCI)等幾類；根據質量分析器的不同，可分為四極桿分析器(Quadrupole analyzer)、傅里葉變換離子回旋共振
【學位授予單位】：湖南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R730.4;O657.63

【參考文獻】

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本文編號：2587493