【摘要】：目的:檢測micro RNA-154-3p(miR-154-3p)在非小細胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)組織和細胞系中的表達水平,并探討其在NSCLC轉(zhuǎn)移中的功能及機制。方法:實時熒光定量PCR(quantitive Real Time PCR,q RT-PCR)法檢測NSCLC組織和癌旁組織、發(fā)生轉(zhuǎn)移和未轉(zhuǎn)移NSCLC組織、NSCLC細胞系(A549/H292/H1975/95D/SPC-A-1)和人胚肺細胞(WI38)中miR-154-3p的表達水平。轉(zhuǎn)染陰性對照RNA(negative control,NC)或miR-154-3p mimics后,劃痕愈合實驗(wound healing assay)和Transwell侵襲實驗(Transwell invasion assay)檢測miR-154-3p對NSCLC細胞系A(chǔ)549和H292遷移、侵襲能力的影響。蛋白質(zhì)印跡(Western blot)法檢測轉(zhuǎn)染后上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(Epithelial-to-Mesenchymal Transition,EMT)過程標志蛋白E-cadherin/Z0-1和Vimentin/N-cadherin的表達。利用生物信息學軟件Pic Tar,miRBD,miRanda,DIANA-micro T預測miR-154-3p的潛在靶基因,采用雙熒光素酶報告基因法(Dual-Luciferase Reporter Assay)和蛋白質(zhì)印跡法進一步驗證預測結(jié)果。結(jié)果:miR-154-3p在NSCLC組織、轉(zhuǎn)移NSCLC組織、NSCLC細胞系中表達均低于相應(yīng)對照組,差異具有統(tǒng)計學意義。過表達miR-154-3p后,A549和H292細胞遷移侵襲能力減弱、E-cadherin/Z0-1表達上調(diào),A549細胞中Vimentin表達下調(diào),H292細胞中N-cadherin表達下調(diào)。雙熒光素酶報告基因和蛋白質(zhì)印跡結(jié)果顯示miR-154-3p能直接結(jié)合BMI1 3’UTR,負調(diào)控BMI1的表達。mRNA及蛋白水平檢測發(fā)現(xiàn)BMI1在NSCLC細胞系高表達;同樣,免疫組化染色結(jié)果顯示NSCLC組織中BMI1表達水平比正常肺組織中顯著升高,統(tǒng)計31例NSCLC組織中48.4%高表達BMI1。結(jié)論:miR-154-3p在NSCLC中呈低表達,可以抑制NSCLC細胞遷移侵襲,阻礙NSCLC細胞EMT的發(fā)生。BMI1為miR-154-3p靶基因之一,在NSCLC中高表達。
【圖文】：

上海交通大學醫(yī)學院 2012 級碩士學位論文1 緒論癌癥是當今威脅人類健康的最重大的一類疾病，具有發(fā)現(xiàn)晚、治療難、易復發(fā)轉(zhuǎn)移等特點，尤其是癌轉(zhuǎn)移，，其占據(jù)了癌癥致死率的 90%以上[1-5]。國家癌癥中心聯(lián)合衛(wèi)生計生委疾病控制局發(fā)布的我國最新腫瘤統(tǒng)計數(shù)據(jù)結(jié)果表明[6]，與過去一樣肺癌仍是我國發(fā)病率和死亡率最高的惡性腫瘤，2010 年一年肺癌新發(fā)病例約 60 萬，死亡約 49 萬（緒論圖 1）。在國外，美國臨床醫(yī)生癌癥雜志最新統(tǒng)計結(jié)果表明[7]，雖與我國略有不同，前列腺癌和乳腺癌分別為美國男女發(fā)病率最高的惡性腫瘤，肺癌緊跟其后為第二高發(fā)病率；但死亡率上肺癌在美國也同樣高居首位（緒論圖 2）。這些國內(nèi)外數(shù)據(jù)都表明肺癌是威脅人類健康的重要殺手，研究肺癌的發(fā)病機制和治療手段迫在眉睫。

上海交通大學醫(yī)學院 2012 級碩士學位論文1 緒論癌癥是當今威脅人類健康的最重大的一類疾病，具有發(fā)現(xiàn)晚、治療難、易復發(fā)轉(zhuǎn)移等特點，尤其是癌轉(zhuǎn)移，其占據(jù)了癌癥致死率的 90%以上[1-5]。國家癌癥中心聯(lián)合衛(wèi)生計生委疾病控制局發(fā)布的我國最新腫瘤統(tǒng)計數(shù)據(jù)結(jié)果表明[6]，與過去一樣肺癌仍是我國發(fā)病率和死亡率最高的惡性腫瘤，2010 年一年肺癌新發(fā)病例約 60 萬，死亡約 49 萬（緒論圖 1）。在國外，美國臨床醫(yī)生癌癥雜志最新統(tǒng)計結(jié)果表明[7]，雖與我國略有不同，前列腺癌和乳腺癌分別為美國男女發(fā)病率最高的惡性腫瘤，肺癌緊跟其后為第二高發(fā)病率；但死亡率上肺癌在美國也同樣高居首位（緒論圖 2）。這些國內(nèi)外數(shù)據(jù)都表明肺癌是威脅人類健康的重要殺手，研究肺癌的發(fā)病機制和治療手段迫在眉睫。
【學位授予單位】：上海交通大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R734.2

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本文編號：2585605