【摘要】：目的:乳腺癌的發(fā)病率在近十年呈現(xiàn)明顯上升趨勢(shì),其早期診斷在乳腺癌的治療中至關(guān)重要。本研究采用SYBR實(shí)時(shí)熒光定量PCR法定量檢測(cè)乳腺癌患者血清中micro RNA-21含量,旨在建立檢測(cè)micro RNA-21的方法及確定其醫(yī)學(xué)參考區(qū)間,用于乳腺癌的早期診斷。方法:研究采用的標(biāo)本來(lái)自湖南省人民醫(yī)院及湘雅三醫(yī)院30例乳腺癌患者及30例良性腫瘤患者,對(duì)照組為100例體檢者血清。采用熒光實(shí)時(shí)定量PCR法建立標(biāo)準(zhǔn)曲線,對(duì)血清樣本中micro RNA-21進(jìn)行定量檢測(cè),比較正常對(duì)照組血清中的micro RNA-21與乳腺癌患者組、乳腺良性腫瘤患者組間的表達(dá)差異,分析了含量與乳腺癌患者臨床病理資料間的關(guān)聯(lián)性。結(jié)果:1、用RT-PCR方法檢測(cè)micro RNA-21的拷貝數(shù)在乳腺癌患者組、乳腺良性腫瘤組及正常對(duì)照組三者間的表達(dá)有顯著差異(F=151.925,P0.000);乳腺良性腫瘤組與正常對(duì)照組之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.239)。2、在30例乳腺癌患者血清中,腫塊直徑2cm組的micro RNA-21濃度顯著高于腫直徑≤2cm組(F=4.803,P=0.016);發(fā)生區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移且淋巴結(jié)固定組中micro RNA-21拷貝數(shù)高于未發(fā)生區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組和發(fā)生區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移且淋巴結(jié)非固定組,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=3.804,P=0.035);未發(fā)生區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組與發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移且淋巴結(jié)不固定組之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05);在發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的乳腺癌患者組micro RNA-21要顯著高于未發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移組,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=20.370,P=0.000)。3、按TNM分類:乳腺癌患者Ⅳ期患者的micro RNA-21的表達(dá)水平顯著高于0+Ⅰ、Ⅱ及Ⅲ期組(F=8.327,P0.000),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;而0+Ⅰ、Ⅱ及Ⅲ期組間兩兩比較,差異不顯著,無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(均P0.05)。4、本法檢測(cè)micro RNA-21的檢測(cè)上限為1010copies/μL,檢測(cè)下限為10copies/μL。5、本法血清中micro RNA-21的醫(yī)學(xué)參考區(qū)間為0-8.75×102 copies/μL,呈偏態(tài)分布。6、用本法檢測(cè)micro RNA-21作為診斷乳腺癌的ROC曲線顯示曲線下面積為0.983,最佳診斷閾值為8.91*102 copies/μL時(shí),其靈敏度96.7%,特異性為91.7%。結(jié)論:1、成功設(shè)計(jì)micro RNA-21逆轉(zhuǎn)錄引物,并建立了實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)方法。2、建立了實(shí)時(shí)熒光定量分析法檢測(cè)micro RNA-21的檢測(cè)上下限;確定了血清中micro RNA-21的醫(yī)學(xué)參考區(qū)間。3、乳腺癌組血清中Micro RNA-21的拷貝數(shù)顯著高于乳腺良性腫瘤患者組和正常對(duì)照組。Micro RNA-21的變量與乳腺癌的TNM分期、腫瘤直徑大小、區(qū)域轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)是否固定及是否發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移有關(guān)。
【圖文】：

實(shí)驗(yàn)步驟解析圖

總RNA瓊脂糖電泳圖
【學(xué)位授予單位】：湖南師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R737.9

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本文編號(hào)：2583809