【摘要】：第一部分 EGCG通過活化p38αMAPK-Bax途徑誘導NB4細胞凋亡目的:本實驗主要探討EGCG是否能夠誘導NB4細胞凋亡及其可能的分子機制。方法:分別用不同濃度的EGCG處理NB4細胞,或預先用p38αMAPK的抑制劑PD169316處理NB4細胞半小時,再用相應濃度的EGCG處理NB4細胞。用CCK-8方法測定NB4細胞增殖狀況,用FITC-Annexin V/PI雙染色法測定NB4細胞凋亡狀況,用Western-Blot檢測p38αMAPK、p-p38αMAPK、Bcl-2和Bax蛋白質的表達水平。結果:隨著EGCG濃度的增加,CCK-8結果顯示EGCG依賴濃度梯度抑制NB4細胞增殖;流式細胞術發(fā)現(xiàn)EGCG能夠明顯促進NB4細胞凋亡;同時Western-Blot檢測發(fā)現(xiàn)p-p38αMAPK和Bax蛋白質表達水平升高,與EGCG濃度呈正相關,然而Bcl-2蛋白質表達水平隨EGCG濃度升高而降低。在用p38αMAPK抑制劑處理后,CCK-8結果表明EGCG抑制細胞增殖的能力明顯減弱,同時流式細胞術顯示EGCG促進細胞凋亡的能力也減弱;Western-Blot結果顯示Bax蛋白質表達程度降低,但Bcl-2蛋白質表達程度無明顯變化。結論:EGCG可能通過活化p38αMAPK-Bax途徑誘導NB4細胞凋亡。第二部分 EGCG通過SHP-1調節(jié)的p38αMAPK-Bax途徑誘導NB4細胞凋亡目的:本實驗主要觀察EGCG是否通過SHP-1調節(jié)的p38αMAPK-Bax途徑誘導NB4細胞凋亡。方法:分別用不同濃度的EGCG處理NB4細胞,或預先用SHP-1的抑制劑NSC87877處理NB4細胞半小時,再用相應濃度的EGCG處理NB4細胞。用CCK-8方法測定NB4細胞增殖狀況,用FITC-Annexin V/PI雙染色法檢測NB4細胞凋亡狀況,用Western-Blot檢測SHP-1、p38αMAPK、p-p38αMAPK和Bax蛋白質的表達水平。結果:Western-Blot檢測結果顯示EGCG能夠促進SHP-1蛋白質表達。預先用SHP-1抑制劑NSC87877處理后,SHP-1蛋白質的表達水平明顯降低;同時CCK-8結果顯示EGCG抑制細胞增殖的能力減弱,流式細胞術結果表明EGCG促進細胞凋亡的能力也減弱,Western-Blot檢測結果顯示p-p38αMAPK和Bax蛋白質表達水平隨之減少,但p38αMAPK蛋白質表達水平無明顯變化。結論:EGCG通過SHP-1調節(jié)的p38αMAPK-Bax途徑誘導NB4細胞凋亡。
【圖文】：

重慶醫(yī)科大學碩士研究生學位論文，，NB4 細胞凋亡率與對照組相比無顯著差異，但在濃度為 30μmol/L 時，細胞率為 51.21%±0.01，與對照組相比有極顯著差異 (p<0.01) (圖 1.2)，說明 EG夠誘導 NB4 細胞凋亡。3 EGCG 對相關凋亡蛋白質表達的影響分別以0、10、20和30μmol/L的EGCG 處理NB4 細胞 24小時，用 Western 測相關凋亡蛋白情況。結果顯示，在 30μmol/L EGCG 終濃度時，Bax 蛋白質水平明顯升高(p<0.05)，然而 Bcl-2 蛋白質表達水平明顯減低(p<0.05) (圖 1.3

圖 1.2 EGCG 對 NB4 細胞凋亡的影響Fig 1.2 Effect of EGCG on the apoptosis of NB4 cells
【學位授予單位】：重慶醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R733.7

【參考文獻】

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1 王衛(wèi)東;陳正堂;;Bcl-2/Bax比率與細胞“命運”[J];中國腫瘤生物治療雜志;2007年04期

2 方建晨;蘇祖蘭;邱耕;何丹;馮智英;朱明芬;李莉;何向蕾;;淋巴瘤Daudi細胞SHP-1甲基化及5-雜氮脫氧胞苷抑制性效應的研究[J];中華血液學雜志;2006年10期

本文編號：2572928