【摘要】：乳腺癌是危害全球女性健康的最嚴(yán)重的惡性腫瘤疾病,對早期乳腺癌的診斷和治療,可以使患者達(dá)到良好的預(yù)后效果。但是,早期乳腺癌的癥狀不易被察覺,所以許多患者在確診時(shí),乳腺癌的惡性程度已經(jīng)加重,癌細(xì)胞已經(jīng)發(fā)生轉(zhuǎn)移。目前,針對癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移的治療效果不明顯,發(fā)生癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移的患者,其生存率很低。因此,對于抑制癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移治療方法的研究成為了熱點(diǎn)。TCGA數(shù)據(jù)庫是利用基因組測序的方法和生物信息學(xué)等手段對癌癥的基因表達(dá)數(shù)據(jù)、基因突變數(shù)據(jù)及臨床數(shù)據(jù)進(jìn)行分類、匯總和綜合,從而有利于提高對癌癥的診斷、治療和預(yù)防癌癥的能力,使研究者能夠更好地理解癌癥的遺傳基礎(chǔ),為癌癥的研究及治療提供依據(jù)。PI3K-Akt信號通路在細(xì)胞的存活及增殖等生命過程中起到了重要的作用,而在乳腺癌等癌癥中,由于PI3K的表達(dá)量異常升高,使其下游的信號分子Akt發(fā)生過度活化,導(dǎo)致PI3K-Akt信號通路發(fā)生失調(diào),這與乳腺癌等癌癥的發(fā)生與發(fā)展有著密切的聯(lián)系。骨橋蛋白(Osteopontin,OPN)是一種磷酸化糖蛋白,既能夠在細(xì)胞內(nèi)發(fā)揮作用,也能夠分泌到細(xì)胞外發(fā)揮其生理功能。在乳腺癌等癌癥中,OPN通過促使多種激酶發(fā)生活化,從而促進(jìn)了癌細(xì)胞的侵襲與轉(zhuǎn)移等過程。有研究表明,PI3K-Akt信號通路與OPN的表達(dá)之間存在著聯(lián)系,因此本研究選取乳腺癌作為研究對象,去探究PI3K-Akt信號通路是否對OPN的表達(dá)起到了調(diào)控作用進(jìn)而對乳腺癌細(xì)胞的侵襲與轉(zhuǎn)移過程產(chǎn)生了影響,這對于防治乳腺癌細(xì)胞的侵襲與轉(zhuǎn)移具有重要的意義首先,我們從TCGA數(shù)據(jù)庫中獲取了乳腺癌患者的基因表達(dá)數(shù)據(jù)和臨床數(shù)據(jù),分析了在癌組織與癌旁正常組織、不同類型和不同臨床階段的乳腺癌中,PI3K的基因PIK3CA和OPN的基因SPP1的表達(dá)圖示,并對上述基因的表達(dá)量對患者生存期的影響和上述基因之間的表達(dá)相關(guān)性進(jìn)行了分析。根據(jù)分析結(jié)果,我們認(rèn)為在乳腺癌中,PI3K的過量表達(dá),促使PI3K-Akt信號通路過度激活,從而進(jìn)一步使OPN的基因發(fā)生過度的表達(dá)并促進(jìn)了乳腺癌細(xì)胞的侵襲與轉(zhuǎn)移等過程,PI3K-Akt信號通路對OPN的基因表達(dá)起到了調(diào)控作用。為了證明上述觀點(diǎn),我們選取了人正常乳腺細(xì)胞株、低轉(zhuǎn)移性人乳腺癌細(xì)胞株和高轉(zhuǎn)移性人乳腺癌細(xì)胞株,并從醫(yī)院獲取了相關(guān)臨床樣本作為實(shí)驗(yàn)材料進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。我們先通過實(shí)時(shí)熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)、蛋白印跡實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞爬片免疫組化實(shí)驗(yàn)和石蠟切片免疫組化實(shí)驗(yàn),檢測了在不同類型的乳腺癌細(xì)胞和組織及正常乳腺細(xì)胞和癌旁正常組織中,PI3K、Akt和OPN在基因及蛋白水平上的表達(dá)差異。然后,我們選用了針對PI3K的催化亞基p110α的特異性抑制劑A66對MCF-7和MDA-MB-231細(xì)胞進(jìn)行處理,通過實(shí)時(shí)熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)、酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)、蛋白印跡實(shí)驗(yàn)和細(xì)胞爬片免疫組化實(shí)驗(yàn),檢測了兩種類型的細(xì)胞在處理后,OPN在基因及蛋白水平上的表達(dá)變化;利用MTT實(shí)驗(yàn)和細(xì)胞創(chuàng)口愈合實(shí)驗(yàn)檢測了處理后的兩種類型細(xì)胞的增殖和遷移能力的變化;利用Transwell細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)和軟瓊脂克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測了處理后的MDA-MB-231細(xì)胞的侵襲和非錨定生長能力的變化。根據(jù)上述實(shí)驗(yàn)的結(jié)果,證明了在乳腺癌中,PI3K發(fā)生了過表達(dá),促進(jìn)了Akt的活化,促使PI3K-Akt信號通路過度激活,從而進(jìn)一步使OPN的表達(dá)量升高,并且PI3K和OPN的表達(dá)量及Akt的活化水平會(huì)隨著乳腺癌惡性程度的增加而升高。表明了在乳腺癌中,PI3K-Akt信號通路對OPN的表達(dá)起到了調(diào)控作用并對乳腺癌的侵襲與轉(zhuǎn)移過程產(chǎn)生了影響。本實(shí)驗(yàn)為乳腺癌細(xì)胞侵襲與轉(zhuǎn)移機(jī)制的研究提供了新的思路,為乳腺癌患者的治療提供了新的基礎(chǔ)資料。
【圖文】：

山東師范大學(xué)碩士學(xué)位論文發(fā)揮作用是通過兩種蛋白-脂質(zhì)結(jié)構(gòu)域來實(shí)現(xiàn)的，分別稱為FYVE結(jié)構(gòu)域和PH并且包含這些結(jié)構(gòu)域的蛋白對于PI3K介導(dǎo)的信號通路具有重要的調(diào)節(jié)作用。P由100多個(gè)氨基酸組成的球狀蛋白結(jié)構(gòu)域，包括磷酸肌醇依賴性激酶1(PDK1)和許多種蛋白中都存在這種結(jié)構(gòu)域。PH結(jié)構(gòu)域的一個(gè)亞基優(yōu)先的結(jié)合到PI(3, 4)P23上[25-27]。Akt通過PH結(jié)構(gòu)域結(jié)合到PI(3, 4, 5)P3上后，在PDK1、PDK2以及整酶的作用下發(fā)生磷酸化而激活，進(jìn)而對細(xì)胞周期、細(xì)胞增殖以及細(xì)胞存活等生影響。

與Akt1相比，在氨基酸序列上分別具有81%和83%的相似度[29]。如圖1-2所示，每一種Akt基因都編碼一類包含N端PH結(jié)構(gòu)域、中間激酶結(jié)構(gòu)域以及C端調(diào)節(jié)結(jié)構(gòu)域的蛋白質(zhì)。其中，Akt的PH結(jié)構(gòu)域優(yōu)先與細(xì)胞膜內(nèi)表面的PI(3, 4, 5)P3結(jié)合；中間激酶結(jié)構(gòu)域具有兩種類型，在Akt1和Akt2中為Thr308，而在Akt3中為Thr309；C端調(diào)節(jié)結(jié)構(gòu)域具有三種類型，在Akt1中為Ser473，在Akt2中為Ser474，，在Akt3中為Ser472。哺乳動(dòng)物中三種類型的Akt基因在多種組織中廣泛的表達(dá)
【學(xué)位授予單位】：山東師范大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R737.9

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前3條

1 魏芳;劉浩;張配;蔣國君;馬琳艷;陳超;;EGCG對三陰乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231的增殖抑制作用及機(jī)制[J];中國藥理學(xué)通報(bào);2013年05期

2 薛衛(wèi)成;;介紹乳腺癌TNM分期系統(tǒng)(第7版)[J];診斷病理學(xué)雜志;2010年04期

3 ;Inducing effects of hepatocyte growth factor on the expression of vascular endothelial growth factor in human colorectal carcinoma cells through MEK and PI3K signaling pathways[J];Chinese Medical Journal;2007年09期

本文編號：2572942