【摘要】：共軛亞油酸(Conjugated linoleic acid,CLA)是一種功能性油脂,是食物中的天然成分,對人體無毒副作用,主要存在于牛、羊等瘤胃動物的乳脂及肉制品中。近年來大量動物試驗(yàn)表明CLA具有抗癌、抗動脈粥樣硬化、降低脂肪沉積等重要生理功能。異油酸(Vaccenic acid,VA,t11-C18:1)是一種天然反式脂肪酸,目前關(guān)于反式脂肪酸與癌癥的關(guān)系還尚不明確,需進(jìn)一步深入研究。本文應(yīng)用人乳腺癌MCF-7細(xì)胞為體外模型,用MTT法、熒光染色及流式細(xì)胞術(shù)比較了3種CLA異構(gòu)體(c9,t11-CLA,t10,c12-CLA,t9,t11-CLA)及2種反式脂肪酸(反油酸、異油酸)對乳腺癌細(xì)胞MCF-7細(xì)胞生長、凋亡及細(xì)胞周期的影響,以篩選出更有效抗癌的CLA異構(gòu)體,并探討反油酸、異油酸對MCF-7細(xì)胞的影響。另外,運(yùn)用RT-PCR和Western-blot方法研究3種CLA單體激活PPARγ的能力和PPARγ調(diào)控凋亡相關(guān)基因和蛋白表達(dá)之間的相互關(guān)系,從基因和蛋白水平闡明CLA單體及異油酸誘導(dǎo)人乳腺癌細(xì)胞MCF-7凋亡的可能機(jī)制,為盡早將這一天然產(chǎn)物應(yīng)用于乳腺癌的防治提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下:3種CLA異構(gòu)體及反式脂肪酸VA作用MCF-7細(xì)胞48 h后,均可抑制MCF-7細(xì)胞增殖并促進(jìn)細(xì)胞凋亡,且抑制作用呈劑量依賴性,但CLA的抑制作用顯著強(qiáng)于VA。在濃度≤50μmol/L時,t10,c12-CLA的抑制作用強(qiáng)于c9,t11-CLA,而≥100μmol/L時,c9,t11-CLA的抑制作用強(qiáng)于t10,c12-CLA。t9,t11-CLA單體在濃度為50μmol/L時對MCF-7細(xì)胞的增殖抑制率就達(dá)到了34.01%,它在抑制MCF-7細(xì)胞增殖、促進(jìn)細(xì)胞凋亡方面是最有效的CLA單體。EA作用MCF-7細(xì)胞48 h后,則表現(xiàn)出在一定劑量范圍內(nèi)促進(jìn)MCF-7細(xì)胞增殖。與對照組相比,各CLA單體及VA組隨著作用濃度的增加,MCF-7細(xì)胞G0/G1期縮短,S期延長,顯然,CLA及VA可將細(xì)胞阻滯在S期,阻滯了DNA合成,不能繼續(xù)完成下面的細(xì)胞周期活動,從而抑制細(xì)胞增殖。由此可以推測CLA及VA可能通過影響細(xì)胞周期進(jìn)程從而抑制細(xì)胞分裂增殖并誘導(dǎo)凋亡。不同CLA異構(gòu)體能促進(jìn)MCF-7細(xì)胞中PPARγ基因及其蛋白的表達(dá),而且PPARγ的變化與促凋亡基因bcl-xS的變化趨勢相一致。反式脂肪酸VA也能促進(jìn)促凋亡基因bcl-xS mRNA及蛋白Bax的表達(dá)。100μmol/L c9,t11-CLA,50μmol/L t10,c12-CLA,50和100μmol/L t9,t11-CLA組的抑凋亡基因bcl-xL mRNA及其蛋白Bcl-2表達(dá)均下降,其中t9,t11-CLA組,抑凋亡基因bcl-xL mRNA及其蛋白表達(dá)水平明顯降低。從bcl-xS與bcl-xL mRNA及其蛋白Bax與Bcl-2的表達(dá)比例可知,VA和c9,t11-CLA在100μmol/L時表達(dá)最高,而t10,c12-CLA和t9,t11-CLA則在50μmol/L時表達(dá)最高。結(jié)果表明VA和3種CLA異構(gòu)體均能引起凋亡相關(guān)基因bcl-xS與bcl-xL及其蛋白Bax與Bcl-2的表達(dá)變化,只是表現(xiàn)出的最佳濃度不同。CLA單體通過促進(jìn)PPARγ的表達(dá)進(jìn)而調(diào)控相關(guān)凋亡基因及其蛋白的表達(dá),從而誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。
【圖文】：

t11-CLA，t10,c12-CLA，t9,t11-CLA 的化學(xué)結(jié)構(gòu)Fig.1.1 The chemical constitution of c9,t11-CLA，t10,c12-CLA，t9,t11-CLALA 的生理功能年來研究發(fā)現(xiàn)，CLA 具有抗癌、抗動脈粥樣硬化、抗氧化、減肥、促進(jìn)生長、降低脂肪沉積、提高骨質(zhì)密度以及調(diào)節(jié)免疫等重要的生且 CLA 對許多癌細(xì)胞的生長具有較強(qiáng)的抑制和促凋亡作用[32-34]�？拱┳饔脦啄陙�，國內(nèi)外大量試驗(yàn)表明：CLA 的抑癌作用和亞油酸具有明顯LA 可拮抗多種致癌物質(zhì)從而抑制腫瘤發(fā)生。動物試驗(yàn)表明，一定濃結(jié)腸癌、胸腺癌和人類惡性黑素瘤細(xì)胞有抑制或殺死作用，，而且 CL某些細(xì)胞色素的活性，以及抑制癌細(xì)胞中核酸和蛋白質(zhì)的合成[35]。0,c12-CLA 和 c9,t11-CLA 這 2 種異構(gòu)體可直接抑制 MCF-7 細(xì)胞系中

圖 1.2 異油酸的空間結(jié)構(gòu)Fig.1.2 The space constitution of Vaccenic acid與腫瘤明，過氧化物酶體增殖物激活受體（Peroxisome prolepters，PPARγ）通過內(nèi)源性和外源性兩種途徑導(dǎo)致腫瘤中，PPAR 可激活位于腫瘤細(xì)胞表面的死亡抗體，從PPAR 的結(jié)構(gòu)及功能差異，可分為 3 種不同亞型：PPA其中 PPARγ位于機(jī)體眾多信號傳導(dǎo)的交叉部位，具有多機(jī)體對胰島素的敏感性、促進(jìn)脂肪生成和脂肪細(xì)胞分制炎癥因子生成和炎癥形成、保護(hù)心血管、影響腫瘤最為密切。配體激活 PPARγ后，不但可以抑制部分腫細(xì)胞發(fā)生凋亡，因此成為腫瘤治療的新靶點(diǎn)[62]。它通視黃酸 X 受體（Retinoic X receptor，RXR）形成異二
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R737.9

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2572613