【摘要】：第一部分肺癌A549裸大鼠移植瘤模型的建立及應用目的::探討裸大鼠肺癌A549高效移植瘤模型的建立方法,為進行腫瘤的體內相關介入研究提供實驗基礎。方法::肺癌A549細胞接種于裸小鼠右腋皮下,出瘤后制備單細胞懸液和組織塊分別接種和塞入裸大鼠耳后皮下,共分初次培養(yǎng)細胞成瘤組(A組)、二次單細胞懸液成瘤組(B組)和二次組織塊成瘤組(C組)三種方法成瘤,每組6只裸大鼠,觀察3組各裸大鼠的一般情況、成瘤情況、移植瘤的生長情況及病理表現,并用流式細胞儀檢測細胞周期的變化。結果::在移植后4-5天后,在注射或移植處觸及結節(jié),7天后呈直徑4-5mm,14天后腫塊直徑10-12mm,呈分葉狀、質實、邊界清、活動度可、無液化,28天后腫塊增大伴中央液化。A、B、C組的出瘤率分別為:52.3%、63.4%和100%,A組與C組之間差異有顯著性(P0.01),3組中C組的出瘤率顯著高于另外兩組,細胞增殖塊,移植瘤的變異小。移植瘤病理學鏡下觀:腫瘤細胞排列紊亂,細胞核異形明顯,核質比例增大,染色質深且粗,核大深染,異常核分裂相易見。細胞周期分析顯示A、B、C組的細胞增殖指數分別為:(32.31±8.72)%、(47.68±4.72)%和(48.61±5.06)%,顯示A組的增殖指數與B組和C組之間差異有顯著性(P0.05),而B組與C組之間差異無顯著性(P0.05)。C組的細胞S和G2/M期比例增高,細胞增殖指數顯著高于另外兩組。結論::二次組織塊成瘤(C組)可顯著提高A549的成瘤率,是一種高效的裸大鼠移植瘤模型建立方法。第二部分吉西他濱聯(lián)合順鉑介入化療對肺癌A549裸大鼠移植瘤的實驗研究目的:觀察吉西他濱聯(lián)合順鉑動脈化療與靜脈化療對人肺腺癌A549裸大鼠移植瘤生長的抑制作用,探索最佳給藥途徑。方法::人源肺腺癌(A549)細胞系經傳代培養(yǎng)后,用二次組織塊成瘤法,與y|大鼠進行腫瘤移植,建立裸大鼠肺癌移植瘤模型。分為正常對照組、假手術對照組、靜脈化療組與動脈化療組各10只,動態(tài)觀察裸大鼠一般情況、腫瘤體積的變化、對荷瘤裸大鼠的抑瘤率、Bcl-2和Caspase-3蛋白的表達水平、HE染色及免疫組化Ki67的檢測,比較吉西他濱聯(lián)合順鉑兩種給藥途徑對肺癌A549移植瘤的抑制效應。結果::動脈化療組與靜脈化療組移植瘤生長均受到不同程度的抑制,動脈化療組抑制尤為明顯,與其他組比較差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。4組腫瘤的體質量(g)為動脈化療組(1.91±0.19)、靜脈化療組(2.61±0.21)低于荷瘤對照組(4.58±0.46)及假手術對照組(4.71±0.53),差異有統(tǒng)計學意義(P0.05),動脈化療組、靜脈化療組的抑瘤率分別為57.6%、42.4%,兩者差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。移植瘤HE染色提示動脈與靜脈給藥組均存在凋亡現象,但動脈化療組凋亡較靜脈化療組明顯。Bcl-2與Caspase3蛋白水平表達均顯示,動脈與靜脈給藥皆可有效促進腫瘤凋亡,尤其以動脈給藥效果更明顯。免疫組化顯示各組Ki-67均為陽性,其中動脈化療組顯示Ki-67增殖指數最低。結論:吉西他濱聯(lián)合順鉑經動脈灌注更能有效控制人肺癌細胞移植瘤的生長,且動脈注射吉西他濱和順鉑較靜脈注射有不同程度的優(yōu)勢,經動脈化療途徑在肺癌移植瘤治療中具有更加明顯的優(yōu)勢。第三部分吉西他濱及順鉑經動脈、靜脈注射后血漿、組織藥物濃度的變化目的:分析吉西他濱及順鉑通過動脈及靜脈途徑注射后血漿及組織內藥物濃度的變化情況。方法::40只帶瘤裸大鼠,隨機分為動脈注射組、靜脈注射組兩大組,帶瘤裸大鼠分別經動脈及靜脈注射吉西他濱及順鉑。于注射后5、10、20、40、80、120、360、720 min采血液標本,注射后10、40、120、720 min各組分別處死5只裸大鼠,取瘤體組織標本,以高效液相色譜法測定血漿及腫瘤組織中吉西他濱濃度,ICP-MS法測定血漿及腫瘤組織中的鉑含量,計算藥代動力學參數。結果::經動脈及靜脈注射兩種藥物后,血漿及腫瘤組織中的藥物濃度出現規(guī)律性變化,其變化過程均可用兩室模型來描述。動脈注射組藥物的藥代動力學參數與靜脈注射組的藥代動力學參數不同,動脈組注射藥物后,血漿藥物峰濃度[吉西他濱:(20.84±10.11)μg/m L,順鉑:(15.13±7.12)μg/m L]均低于靜脈組[吉西他濱:(28.96±7.02)μg/m L,順鉑:(21.64±9.72)μg/m L],靶組織內藥物峰濃度[吉西他濱:(20.18±9.43)μg/m L,順鉑:(6.98±0.31)μg/m L]均高于靜脈組[吉西他濱:(18.19±10.30)μg/m L,順鉑:(3.04±0.11)μg/m L],靶組織內藥物曲線下面積[吉西他濱:(2641±411)μg/(min m L),順鉑:(6025±870)μg/(min m L)]均明顯高于靜脈組[吉西他濱:(1663±568)μg/(min m L),順鉑:(1780±883)μg/(min m L)],差異均有統(tǒng)計學意義(P0.05或0.01)。結論:動脈注射組吉西他濱和順鉑較靜脈注射組有不同程度的優(yōu)勢,這種優(yōu)勢與藥物的藥理特性有關。
【圖文】：

1裸大鼠（復旦大學公共衛(wèi)生中心實驗動物所飼2復旦大學公共衛(wèi)生中心實驗動物所SPF級動物小鼠：BALB/C裸小鼠（圖3），4-5周齡，體重為22.1SPF

飼養(yǎng)于復旦大學公共衛(wèi)生中心實驗動物所SPF級動物房（圖2），飼以高壓滅菌水和飼料，各組鼠均同等自由飲水、攝食，飼養(yǎng)室相對濕度(40%-50%)，，溫度(22-25℃)，光照12h明暗交替。
【學位授予單位】：蘇州大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R734.2

【參考文獻】

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本文編號：2569402