【摘要】：第一部分肺癌A549裸大鼠移植瘤模型的建立及應(yīng)用目的::探討裸大鼠肺癌A549高效移植瘤模型的建立方法,為進(jìn)行腫瘤的體內(nèi)相關(guān)介入研究提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。方法::肺癌A549細(xì)胞接種于裸小鼠右腋皮下,出瘤后制備單細(xì)胞懸液和組織塊分別接種和塞入裸大鼠耳后皮下,共分初次培養(yǎng)細(xì)胞成瘤組(A組)、二次單細(xì)胞懸液成瘤組(B組)和二次組織塊成瘤組(C組)三種方法成瘤,每組6只裸大鼠,觀察3組各裸大鼠的一般情況、成瘤情況、移植瘤的生長(zhǎng)情況及病理表現(xiàn),并用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期的變化。結(jié)果::在移植后4-5天后,在注射或移植處觸及結(jié)節(jié),7天后呈直徑4-5mm,14天后腫塊直徑10-12mm,呈分葉狀、質(zhì)實(shí)、邊界清、活動(dòng)度可、無(wú)液化,28天后腫塊增大伴中央液化。A、B、C組的出瘤率分別為:52.3%、63.4%和100%,A組與C組之間差異有顯著性(P0.01),3組中C組的出瘤率顯著高于另外兩組,細(xì)胞增殖塊,移植瘤的變異小。移植瘤病理學(xué)鏡下觀:腫瘤細(xì)胞排列紊亂,細(xì)胞核異形明顯,核質(zhì)比例增大,染色質(zhì)深且粗,核大深染,異常核分裂相易見(jiàn)。細(xì)胞周期分析顯示A、B、C組的細(xì)胞增殖指數(shù)分別為:(32.31±8.72)%、(47.68±4.72)%和(48.61±5.06)%,顯示A組的增殖指數(shù)與B組和C組之間差異有顯著性(P0.05),而B(niǎo)組與C組之間差異無(wú)顯著性(P0.05)。C組的細(xì)胞S和G2/M期比例增高,細(xì)胞增殖指數(shù)顯著高于另外兩組。結(jié)論::二次組織塊成瘤(C組)可顯著提高A549的成瘤率,是一種高效的裸大鼠移植瘤模型建立方法。第二部分吉西他濱聯(lián)合順鉑介入化療對(duì)肺癌A549裸大鼠移植瘤的實(shí)驗(yàn)研究目的:觀察吉西他濱聯(lián)合順鉑動(dòng)脈化療與靜脈化療對(duì)人肺腺癌A549裸大鼠移植瘤生長(zhǎng)的抑制作用,探索最佳給藥途徑。方法::人源肺腺癌(A549)細(xì)胞系經(jīng)傳代培養(yǎng)后,用二次組織塊成瘤法,與y|大鼠進(jìn)行腫瘤移植,建立裸大鼠肺癌移植瘤模型。分為正常對(duì)照組、假手術(shù)對(duì)照組、靜脈化療組與動(dòng)脈化療組各10只,動(dòng)態(tài)觀察裸大鼠一般情況、腫瘤體積的變化、對(duì)荷瘤裸大鼠的抑瘤率、Bcl-2和Caspase-3蛋白的表達(dá)水平、HE染色及免疫組化Ki67的檢測(cè),比較吉西他濱聯(lián)合順鉑兩種給藥途徑對(duì)肺癌A549移植瘤的抑制效應(yīng)。結(jié)果::動(dòng)脈化療組與靜脈化療組移植瘤生長(zhǎng)均受到不同程度的抑制,動(dòng)脈化療組抑制尤為明顯,與其他組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。4組腫瘤的體質(zhì)量(g)為動(dòng)脈化療組(1.91±0.19)、靜脈化療組(2.61±0.21)低于荷瘤對(duì)照組(4.58±0.46)及假手術(shù)對(duì)照組(4.71±0.53),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),動(dòng)脈化療組、靜脈化療組的抑瘤率分別為57.6%、42.4%,兩者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。移植瘤HE染色提示動(dòng)脈與靜脈給藥組均存在凋亡現(xiàn)象,但動(dòng)脈化療組凋亡較靜脈化療組明顯。Bcl-2與Caspase3蛋白水平表達(dá)均顯示,動(dòng)脈與靜脈給藥皆可有效促進(jìn)腫瘤凋亡,尤其以動(dòng)脈給藥效果更明顯。免疫組化顯示各組Ki-67均為陽(yáng)性,其中動(dòng)脈化療組顯示Ki-67增殖指數(shù)最低。結(jié)論:吉西他濱聯(lián)合順鉑經(jīng)動(dòng)脈灌注更能有效控制人肺癌細(xì)胞移植瘤的生長(zhǎng),且動(dòng)脈注射吉西他濱和順鉑較靜脈注射有不同程度的優(yōu)勢(shì),經(jīng)動(dòng)脈化療途徑在肺癌移植瘤治療中具有更加明顯的優(yōu)勢(shì)。第三部分吉西他濱及順鉑經(jīng)動(dòng)脈、靜脈注射后血漿、組織藥物濃度的變化目的:分析吉西他濱及順鉑通過(guò)動(dòng)脈及靜脈途徑注射后血漿及組織內(nèi)藥物濃度的變化情況。方法::40只帶瘤裸大鼠,隨機(jī)分為動(dòng)脈注射組、靜脈注射組兩大組,帶瘤裸大鼠分別經(jīng)動(dòng)脈及靜脈注射吉西他濱及順鉑。于注射后5、10、20、40、80、120、360、720 min采血液標(biāo)本,注射后10、40、120、720 min各組分別處死5只裸大鼠,取瘤體組織標(biāo)本,以高效液相色譜法測(cè)定血漿及腫瘤組織中吉西他濱濃度,ICP-MS法測(cè)定血漿及腫瘤組織中的鉑含量,計(jì)算藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)。結(jié)果::經(jīng)動(dòng)脈及靜脈注射兩種藥物后,血漿及腫瘤組織中的藥物濃度出現(xiàn)規(guī)律性變化,其變化過(guò)程均可用兩室模型來(lái)描述。動(dòng)脈注射組藥物的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)與靜脈注射組的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)不同,動(dòng)脈組注射藥物后,血漿藥物峰濃度[吉西他濱:(20.84±10.11)μg/m L,順鉑:(15.13±7.12)μg/m L]均低于靜脈組[吉西他濱:(28.96±7.02)μg/m L,順鉑:(21.64±9.72)μg/m L],靶組織內(nèi)藥物峰濃度[吉西他濱:(20.18±9.43)μg/m L,順鉑:(6.98±0.31)μg/m L]均高于靜脈組[吉西他濱:(18.19±10.30)μg/m L,順鉑:(3.04±0.11)μg/m L],靶組織內(nèi)藥物曲線下面積[吉西他濱:(2641±411)μg/(min m L),順鉑:(6025±870)μg/(min m L)]均明顯高于靜脈組[吉西他濱:(1663±568)μg/(min m L),順鉑:(1780±883)μg/(min m L)],差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05或0.01)。結(jié)論:動(dòng)脈注射組吉西他濱和順鉑較靜脈注射組有不同程度的優(yōu)勢(shì),這種優(yōu)勢(shì)與藥物的藥理特性有關(guān)。
【圖文】：

1裸大鼠（復(fù)旦大學(xué)公共衛(wèi)生中心實(shí)驗(yàn)動(dòng)物所飼2復(fù)旦大學(xué)公共衛(wèi)生中心實(shí)驗(yàn)動(dòng)物所SPF級(jí)動(dòng)物小鼠：BALB/C裸小鼠（圖3），4-5周齡，體重為22.1SPF

飼養(yǎng)于復(fù)旦大學(xué)公共衛(wèi)生中心實(shí)驗(yàn)動(dòng)物所SPF級(jí)動(dòng)物房（圖2），飼以高壓滅菌水和飼料，各組鼠均同等自由飲水、攝食，飼養(yǎng)室相對(duì)濕度(40%-50%)，，溫度(22-25℃)，光照12h明暗交替。
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R734.2

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2569402