miR-200a對肺癌A549細(xì)胞增殖、遷移及凋亡的影響
【圖文】：
測miＲ-200a潛在靶基因應(yīng)用miＲWalk綜合數(shù)據(jù)庫(http://www．umm．uni-heidelberg．de/apps/zmf/mirwalk/)進(jìn)行預(yù)測，并取其中Targetscan、miＲanda、ＲNAhybrid、miＲWalk和Microt4共5種工具計算基因交集。2結(jié)果2．1miＲ-200a在肺癌細(xì)胞株和正常支氣管上皮細(xì)胞株中的表達(dá)ＲT-PCＲ檢測肺癌細(xì)胞株及永生化人支氣管上皮細(xì)胞株16HBE中miＲ-200a的表達(dá)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)miＲ-200a在3種肺癌細(xì)胞株中的表達(dá)均明顯低于16HBE(P均＜0.05)。其中以A549細(xì)胞中miＲ-200a的表達(dá)水平最低，因此選取A549細(xì)胞株作為進(jìn)一步分析對象(圖1)。圖1miＲ-200a在不同細(xì)胞株中的相對表達(dá)水平2．2miＲ-200a對A549細(xì)胞增殖的影響以吸光度為縱坐標(biāo)、時間點(diǎn)為橫坐標(biāo)，繪制細(xì)胞生長曲線。肉眼觀察并記錄克隆斑數(shù)目，計算克隆形成率，克隆形成率=(克隆形成數(shù)/接種細(xì)胞數(shù))×100%。CCK-8法檢測A549細(xì)胞轉(zhuǎn)染miＲ-200amimics、miＲ-NC后1～5天的OD值，并繪制生長曲線。結(jié)果顯示:與miＲ-NC組細(xì)胞相比，轉(zhuǎn)染miＲ-200amimics細(xì)胞的OD值在4、5天時均降低(圖2)，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P均＜0.05)。平板克隆形成實(shí)驗(yàn)顯示miＲ-200amimics轉(zhuǎn)染組細(xì)胞克隆形成率為臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志JClinExpPathol2017Sep;33(9)·993·
(33.13±0.74)%，，明顯少于miＲ-NC組［(45.57±1.27)%］，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05，圖3)。圖2轉(zhuǎn)染miＲ-200amimics后A549細(xì)胞生長曲線圖3平板克隆形成實(shí)驗(yàn)結(jié)果A．miＲ-NC組;B．miＲ-200amimics組;C．克隆形成率2．3miＲ-200amimics對A549細(xì)胞遷移能力的影響Transwell細(xì)胞體外遷移能力檢測結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)染miＲ-200amimics穿膜細(xì)胞數(shù)為(71.60±17.90)個/孔，少于miＲ-NC組［(140.20±17.88)個/孔］，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05，圖4)。2．4miＲ-200amimics對A549細(xì)胞凋亡率的影響流式細(xì)胞術(shù)檢測轉(zhuǎn)染48h后兩組細(xì)胞的凋亡率，結(jié)果顯示，miＲ-200amimics和miＲ-NC組的細(xì)胞凋亡率分別為(17.80±1.90)%和(11.33±1.96)%，miＲ-200amimics組的細(xì)胞凋亡率明顯高于miＲ-NC組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05，圖5)。圖4Transwell遷移實(shí)驗(yàn)結(jié)果圖5流式細(xì)胞術(shù)檢測檢測細(xì)胞凋亡結(jié)果A．miＲ-NC組;B．miＲ-200amimics組;C．細(xì)胞凋亡率2．5miＲ-200a靶基因的預(yù)測利用miＲWalk綜合數(shù)據(jù)庫，并取其中Targetscan、miＲanda、ＲNAhy-brid、miＲWalk和Microt4共5種數(shù)據(jù)庫的計算結(jié)果取其交集，所得部分靶基因詳見表1。選擇其中1個潛在靶基因Tiam1利用TargetScan、DIANA-microT表1利用miＲWalk預(yù)測所得miＲ-200a的部分靶基因GeneIDGenesymbolGeneIDGenesymbol4884NPTX155356SLC22A157074TIAM1135295SＲSF1251762ＲAB8B2334AFF291445ＲNF1857803PTP4A1688KLF523211ZC3H46782HSPA1379699ZYG11B60468BACH283989FAM172A541565C8orf586401SELE5594MAPK157464STＲIP210513APPBP2200081TXLNA·994·臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志JClinExpPathol2017Sep;33(9)
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