【摘要】：目的探討miR-200a在肺癌細胞中的表達及其對A549細胞增殖、遷移及凋亡等生物學功能的影響。方法采用RTPCR檢測肺癌細胞株A549、H23、H460和永生化人支氣管上皮細胞株16HBE的表達水平。采用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法將miR-200a mimics和陰性對照序列(miR-negtive control,miR-NC)分別轉(zhuǎn)染A549細胞,運用CCK-8實驗和平板克隆形成實驗檢測細胞增殖能力的改變情況;Transwell實驗檢測細胞遷移能力;流式細胞術(shù)檢測細胞凋亡情況。利用生物信息學方法預(yù)測miR-200a的靶基因。結(jié)果 miR-200a在肺癌細胞株A549、H23和H460相對表達水平均低于16HBE組,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。miR-200a mimics和miR-NC組分別轉(zhuǎn)染A549細胞,CCK-8實驗顯示miR-200a mimics組在第4、5天時的OD值明顯低于miRNC組,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05);平板克隆形成實驗顯示miR-200a mimics組細胞克隆形成率為(33.13±0.74)%,明顯少于miR-NC組(45.57±1.27)%,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。Transwell實驗顯示,miR-200a mimics穿膜細胞數(shù)為(71.60±17.90)個,少于miR-NC組[(140.20±17.88)個],差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。流式細胞術(shù)檢測顯示,miR-200a mimics凋亡率為(17.80±1.90)%,明顯高于miR-NC組[(11.33±1.96)%],差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。生物信息學方法預(yù)測Tiam1等可能是miR-200a的靶基因。結(jié)論 miR-200a能夠抑制肺癌細胞A549的增殖、遷移并促進其凋亡,為肺癌的治療提供潛在靶點。miR-200a可能通過靶基因Tiam1發(fā)揮其對腫瘤的調(diào)控作用。
【圖文】：

測miＲ-200a潛在靶基因應(yīng)用miＲWalk綜合數(shù)據(jù)庫(http://www．umm．uni-heidelberg．de/apps/zmf/mirwalk/)進行預(yù)測，并取其中Targetscan、miＲanda、ＲNAhybrid、miＲWalk和Microt4共5種工具計算基因交集。2結(jié)果2．1miＲ-200a在肺癌細胞株和正常支氣管上皮細胞株中的表達ＲT-PCＲ檢測肺癌細胞株及永生化人支氣管上皮細胞株16HBE中miＲ-200a的表達，結(jié)果發(fā)現(xiàn)miＲ-200a在3種肺癌細胞株中的表達均明顯低于16HBE(P均＜0.05)。其中以A549細胞中miＲ-200a的表達水平最低，因此選取A549細胞株作為進一步分析對象(圖1)。圖1miＲ-200a在不同細胞株中的相對表達水平2．2miＲ-200a對A549細胞增殖的影響以吸光度為縱坐標、時間點為橫坐標，繪制細胞生長曲線。肉眼觀察并記錄克隆斑數(shù)目，計算克隆形成率，克隆形成率=(克隆形成數(shù)/接種細胞數(shù))×100%。CCK-8法檢測A549細胞轉(zhuǎn)染miＲ-200amimics、miＲ-NC后1～5天的OD值，并繪制生長曲線。結(jié)果顯示:與miＲ-NC組細胞相比，轉(zhuǎn)染miＲ-200amimics細胞的OD值在4、5天時均降低(圖2)，差異具有統(tǒng)計學意義(P均＜0.05)。平板克隆形成實驗顯示miＲ-200amimics轉(zhuǎn)染組細胞克隆形成率為臨床與實驗病理學雜志JClinExpPathol2017Sep;33(9)·993·

(33.13±0.74)%，，明顯少于miＲ-NC組［(45.57±1.27)%］，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05，圖3)。圖2轉(zhuǎn)染miＲ-200amimics后A549細胞生長曲線圖3平板克隆形成實驗結(jié)果A．miＲ-NC組;B．miＲ-200amimics組;C．克隆形成率2．3miＲ-200amimics對A549細胞遷移能力的影響Transwell細胞體外遷移能力檢測結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)染miＲ-200amimics穿膜細胞數(shù)為(71.60±17.90)個/孔，少于miＲ-NC組［(140.20±17.88)個/孔］，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05，圖4)。2．4miＲ-200amimics對A549細胞凋亡率的影響流式細胞術(shù)檢測轉(zhuǎn)染48h后兩組細胞的凋亡率，結(jié)果顯示，miＲ-200amimics和miＲ-NC組的細胞凋亡率分別為(17.80±1.90)%和(11.33±1.96)%，miＲ-200amimics組的細胞凋亡率明顯高于miＲ-NC組，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05，圖5)。圖4Transwell遷移實驗結(jié)果圖5流式細胞術(shù)檢測檢測細胞凋亡結(jié)果A．miＲ-NC組;B．miＲ-200amimics組;C．細胞凋亡率2．5miＲ-200a靶基因的預(yù)測利用miＲWalk綜合數(shù)據(jù)庫，并取其中Targetscan、miＲanda、ＲNAhy-brid、miＲWalk和Microt4共5種數(shù)據(jù)庫的計算結(jié)果取其交集，所得部分靶基因詳見表1。選擇其中1個潛在靶基因Tiam1利用TargetScan、DIANA-microT表1利用miＲWalk預(yù)測所得miＲ-200a的部分靶基因GeneIDGenesymbolGeneIDGenesymbol4884NPTX155356SLC22A157074TIAM1135295SＲSF1251762ＲAB8B2334AFF291445ＲNF1857803PTP4A1688KLF523211ZC3H46782HSPA1379699ZYG11B60468BACH283989FAM172A541565C8orf586401SELE5594MAPK157464STＲIP210513APPBP2200081TXLNA·994·臨床與實驗病理學雜志JClinExpPathol2017Sep;33(9)

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本文編號：2565025