【摘要】：一、研究目的骨腫瘤是嚴(yán)重威脅人類生命與健康的疾病,包括原發(fā)性骨腫瘤和轉(zhuǎn)移性骨腫瘤,其中后者更為常見。骨是惡性腫瘤最常見轉(zhuǎn)移部位之一,約60-80%的惡性腫瘤患者后期會出現(xiàn)骨轉(zhuǎn)移。骨腫瘤患者常常忍受持續(xù)性疼痛,面臨著病理性骨折、脊髓壓迫所致癱瘓等嚴(yán)重的骨相關(guān)并發(fā)癥,大大降低了生存質(zhì)量,縮短了生存時間。然而,當(dāng)今針對于骨腫瘤的主要治療方式尚存在各自的不足:手術(shù)治療創(chuàng)傷大、風(fēng)險高、術(shù)后并發(fā)癥多,亦不適用于多發(fā)性轉(zhuǎn)移患者。同時,骨髓“肥沃的”微環(huán)境不僅有利于癌細胞的生長,而且對癌細胞產(chǎn)生保護性的屏障作用,大大降低了常規(guī)放、化療的效率。因此,針對這樣一類常見且嚴(yán)重的疾病,我們迫切需要探索并發(fā)現(xiàn)更加新型而有效的治療方式�；诩{米材料的光熱治療因具有針對腫瘤病灶的特異性殺傷和時空上的可控性,而被認為是一種具有前景的骨腫瘤的治療手段。目前,光熱治療已經(jīng)在動物水平上證實了對多種腫瘤的可靠療效。但是,其距離臨床應(yīng)用還有些距離。部分原因在于納米材料的尺寸太大且難以簡單有效地實現(xiàn)材料的多功能化。研究表明,長徑超過40nm的材料難以穿透、到達深部腫瘤組織,且難以在治療后及時地被體內(nèi)清除,從而產(chǎn)生毒副作用。另外,如果缺少多功能修飾賦予光熱材料的輔助成像、靶向遞送、協(xié)同化療藥物遞送等功能帶來的協(xié)同治療作用,光熱治療的療效也顯著降低。而實現(xiàn)多功能化往往意味著額外的、復(fù)雜的合成步驟,以及材料合成成本的大大提高。再者,由于骨組織滲透性差,通過傳統(tǒng)的給藥方式,藥物很難抵達并積聚于骨腫瘤部位,從而降低了治療效率。骨靶向性材料的應(yīng)用可有效地解決治療效率低這一難題。Yadav等研究發(fā)現(xiàn)帶負電荷的材料具有一定的主動靶向骨缺損部位的能力,這為設(shè)計更加理想的具有自身骨靶向性能的材料提供了新的思路。因此,本課題利用具有可控尺寸及大量的表面功能基團的樹形高分子為模板及穩(wěn)定劑合成具有光熱性能與生物相容性的樹形高分子-鉑納米顆粒,探索樹形高分子末端官能團種類對骨靶向能力的影響,并利用該材料對骨腫瘤進行光熱治療。二、研究方法本課題以末端基團不同的樹形高分子作為單分散模板和穩(wěn)定劑,加入適量K2PtCl6,充分反應(yīng)后用NaHB4對Pt離子進行還原,合成末端基團分別為羧基(帶負電荷)、氨基(帶正電荷)和乙�；被�(不帶電荷)的樹形高分子-鉑光熱納米材料:g4.5-cooh-pt、g5-nh2-pt和g5-nh2-ac-pt,分別作為實驗組和兩組對照組。并通過透射電鏡(tem)、動態(tài)光散射(dls)等方式對三種光熱納米材料進行表征。接下來,本課題通過體外納米人工骨吸附實驗和體內(nèi)分布實驗驗證材料的骨靶向性能;體外光照升溫實驗驗證材料的光熱性能;細胞毒性實驗和血清穩(wěn)定性實驗驗證材料的生物相容性。最后,建立裸鼠脛骨腫瘤的動物模型,并分別應(yīng)用三種光熱材料對裸鼠進行光熱治療。整個療程包括三次光熱納米材料的尾靜脈注射,每次注射后于12小時和24小時進行兩次10分鐘的近紅外光照射治療。通過比對脛骨腫瘤最大周長、治療前后腫瘤熒光量的變化以及治療后micro-ct三維重建計算骨體積、骨表面積、骨小梁數(shù)及骨小梁間距等相關(guān)骨結(jié)構(gòu)參數(shù)從而準(zhǔn)確比較三種光熱納米材料在骨腫瘤中治療的療效差異。三、研究結(jié)果(一)具有自身骨靶向能力及多功能潛能的超小光熱納米材料合成及表征我們成功合成末端基團分別為羧基(帶負電荷)、氨基(帶正電荷)和乙�；被�(不帶電荷)的樹形高分子-鉑光熱納米材料:g4.5-cooh-pt、g5-nh2-pt和g5-nh2-ac-pt。tem顯示合成的三種光熱納米材料均有相似的形貌和均一的尺寸,直徑均介于1-2nm。dls顯示三種材料的水合直徑均約為10nm,且g4.5-cooh-pt帶負電荷,g5-nh2-pt帶正電荷,g5-nh2-ac-pt帶少量正電荷。(二)具有自身骨靶向能力及多功能潛能的超小光熱納米材料骨靶向性能、光熱性能、生物相容性研究體外納米人工骨吸附實驗和體內(nèi)分布實驗均證實g4.5-cooh-pt組吸附骨組織的鉑含量遠遠高于其他兩對照組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(**p0.01或***p0.001)。體外光照升溫實驗證明三種材料均具有光照轉(zhuǎn)化性能,由于g4.5-cooh-pt組吸附于納米人工骨的鉑含量較其他兩組高,因此光照時升溫更快,溫度更高,照射1分鐘后材料溫度即上升至45℃,最高溫度可達近70℃。細胞毒性實驗證實g4.5-cooh-pt和g5-nh2-ac-pt組在在材料濃度為300?m的培養(yǎng)環(huán)境中培養(yǎng),細胞存活率仍高于90%,g5-nh2-pt細胞存活率約80%。血清穩(wěn)定性實驗證明了三種材料溶于50%血清50%pbs溶液中72h后尺寸均無變化。(三)具有自身骨靶向能力及多功能潛能的超小光熱納米材料裸鼠體內(nèi)光熱治療脛骨腫瘤的研究光熱治療過程中,腫瘤部位溫度由高至低依次是G4.5-COOH+NIR組,G5-NH2-AC+NIR組,G5-NH2+NIR組和PBS組。其中G4.5-COOH+NIR組照射后2分鐘即可達到最高溫度,為45℃(12小時)、44℃(24小時)。G5-NH2-AC+NIR組最高溫度為41℃,G5-NH2+NIR組為40℃,PBS組為39℃。治療結(jié)束后,活體熒光成像顯示G4.5-COOH+NIR組治療后的熒光量約為治療前的2.5倍;而其余對照組治療后熒光量為治療前的12.5-15倍(***P0.001)。脛骨腫瘤最大周長測量及重量稱量顯示G4.5-COOH+NIR組腫瘤最大周長和重量均遠小于其余四組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(***P0.001)。Micro-CT三維重建測定骨參數(shù)表明,G4.5-COOH+NIR組裸鼠治療后平均脛骨體積、平均脛骨表面積、平均骨小梁數(shù)量均明顯大于其余四組,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(**P0.01或***P0.001);而平均骨小梁間隔明顯小于其余四組,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(*P0.05或**P0.01)。四、結(jié)論我們應(yīng)用樹形高分子和鉑納米顆粒成功合成了超小光熱納米材料。其中末端基團為羧基(帶負電荷)的材料:G4.5-COOH-Pt具有優(yōu)異的光熱轉(zhuǎn)換性能、自身骨靶向性能和生物相容性,同時在動物水平上也展示出其針對骨腫瘤的突出的治療效果。總之,本課題制備出具有自身骨靶向能力及多功能潛能的超小光熱納米材料,并成功應(yīng)用于骨腫瘤的光熱治療中,為骨腫瘤的治療的提供了新的有效的治療方式。
【圖文】：

圖 1 具有自身骨靶向能力及多功能潛能的超小光熱納米材料合成示意圖二、課題總體設(shè)計本課題首先以 G4.5 代最外層基團為羥基（帶負電荷）PAMAM 樹形高分子

課題總設(shè)計示意圖
【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R738

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本文編號：2561655