【摘要】：目的:建立肝癌對索拉非尼(Sorafenib)耐藥細胞株Bel-7402/Sora并初步探討青蒿琥酯(ART)逆轉其耐藥性的作用及其相關機制。方法:1.通過MTT法測定Sorafenib對肝癌細胞Bel-7402生長抑制的影響,計算其半抑制濃度(IC50)。通過大劑量沖擊聯合持續(xù)低劑量濃度遞增的方法建立肝癌細胞Bel-7402耐藥株Bel-7402/Sora。顯微鏡下觀察肝癌細胞及耐藥株形態(tài)差異。MTT法測定肝癌耐藥細胞株IC50及其耐藥倍數。Western-blot法檢測兩種細胞在給予不同濃度Sorafenib及蛋白GRP78和Beclin1的表達差異。2.采用MTT法觀察不同濃度ART對肝癌耐藥細胞株與親本細胞株的抑制作用,并計算出ART的無細胞毒性濃度。通過不同濃度的Sorafenib聯合無毒性濃度ART前后對肝癌耐藥細胞株增殖的影響,計算其逆轉倍數及相對逆轉效率。Western-blot法檢測在給予不同濃度Sorafenib聯合無細胞毒性濃度ART前后蛋白GRP78和Beclin1的表達差異。結果:1.光鏡下見Bel-7402細胞和Bel-7402/Sora細胞貼壁生長,單層上皮樣分散排列。Bel-7402細胞形態(tài)規(guī)則,大小均衡,胞質內無空泡樣物質,邊界整齊且呈梭形生長。Bel-7402/Sora細胞形態(tài)不規(guī)則,大小不一,胞質內可見大量空泡樣物質及顆粒,邊界不齊,聚集生長,生長速度較正常細胞緩慢。2.Sorafenib 對于 Bel-7402/Sora 細胞的 24h IC50=37.7μmol/L,48h IC50=8.133μmol/L。綜合24h與48h耐藥及親本細胞IC50值變化,因細胞性狀等因素影響導致48h組無明顯意義,故本實驗選取24h組為標準實驗組。Bel-7402/Sora相對于Bel-7402對Sora的耐藥指數為2.42。Bel-7402/Sora細胞中GRP78和Beclin1表達均上升。3.無細胞毒性青蒿琥酯聯合索拉非尼對肝癌耐藥細胞Bel-7402/Sora的24h IC50=11.93μmol/L。經計算ART聯合索拉非尼作用于Bel-7402/Sora細胞的逆轉指數為3.16,相對逆轉效率為116%。青蒿琥酯聯合索拉非尼用于耐藥細胞Bel-7402/Sora中時GRP78和Beclin1表達均明顯降低。結論:1.建立肝癌對索拉非尼耐藥細胞株Bel-7402/Sora,證明GRP78和Beclin1參與了細胞耐藥性的形成。2.ART可通過降低蛋白GRP78和Beclin1的表達來逆轉索拉非尼作用于肝癌細胞產生的耐藥。
【學位授予單位】：延邊大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R735.7

【參考文獻】

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本文編號：2561638