【摘要】：目的:建立肝癌對(duì)索拉非尼(Sorafenib)耐藥細(xì)胞株Bel-7402/Sora并初步探討青蒿琥酯(ART)逆轉(zhuǎn)其耐藥性的作用及其相關(guān)機(jī)制。方法:1.通過MTT法測(cè)定Sorafenib對(duì)肝癌細(xì)胞Bel-7402生長(zhǎng)抑制的影響,計(jì)算其半抑制濃度(IC50)。通過大劑量沖擊聯(lián)合持續(xù)低劑量濃度遞增的方法建立肝癌細(xì)胞Bel-7402耐藥株Bel-7402/Sora。顯微鏡下觀察肝癌細(xì)胞及耐藥株形態(tài)差異。MTT法測(cè)定肝癌耐藥細(xì)胞株IC50及其耐藥倍數(shù)。Western-blot法檢測(cè)兩種細(xì)胞在給予不同濃度Sorafenib及蛋白GRP78和Beclin1的表達(dá)差異。2.采用MTT法觀察不同濃度ART對(duì)肝癌耐藥細(xì)胞株與親本細(xì)胞株的抑制作用,并計(jì)算出ART的無細(xì)胞毒性濃度。通過不同濃度的Sorafenib聯(lián)合無毒性濃度ART前后對(duì)肝癌耐藥細(xì)胞株增殖的影響,計(jì)算其逆轉(zhuǎn)倍數(shù)及相對(duì)逆轉(zhuǎn)效率。Western-blot法檢測(cè)在給予不同濃度Sorafenib聯(lián)合無細(xì)胞毒性濃度ART前后蛋白GRP78和Beclin1的表達(dá)差異。結(jié)果:1.光鏡下見Bel-7402細(xì)胞和Bel-7402/Sora細(xì)胞貼壁生長(zhǎng),單層上皮樣分散排列。Bel-7402細(xì)胞形態(tài)規(guī)則,大小均衡,胞質(zhì)內(nèi)無空泡樣物質(zhì),邊界整齊且呈梭形生長(zhǎng)。Bel-7402/Sora細(xì)胞形態(tài)不規(guī)則,大小不一,胞質(zhì)內(nèi)可見大量空泡樣物質(zhì)及顆粒,邊界不齊,聚集生長(zhǎng),生長(zhǎng)速度較正常細(xì)胞緩慢。2.Sorafenib 對(duì)于 Bel-7402/Sora 細(xì)胞的 24h IC50=37.7μmol/L,48h IC50=8.133μmol/L。綜合24h與48h耐藥及親本細(xì)胞IC50值變化,因細(xì)胞性狀等因素影響導(dǎo)致48h組無明顯意義,故本實(shí)驗(yàn)選取24h組為標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)組。Bel-7402/Sora相對(duì)于Bel-7402對(duì)Sora的耐藥指數(shù)為2.42。Bel-7402/Sora細(xì)胞中GRP78和Beclin1表達(dá)均上升。3.無細(xì)胞毒性青蒿琥酯聯(lián)合索拉非尼對(duì)肝癌耐藥細(xì)胞Bel-7402/Sora的24h IC50=11.93μmol/L。經(jīng)計(jì)算ART聯(lián)合索拉非尼作用于Bel-7402/Sora細(xì)胞的逆轉(zhuǎn)指數(shù)為3.16,相對(duì)逆轉(zhuǎn)效率為116%。青蒿琥酯聯(lián)合索拉非尼用于耐藥細(xì)胞Bel-7402/Sora中時(shí)GRP78和Beclin1表達(dá)均明顯降低。結(jié)論:1.建立肝癌對(duì)索拉非尼耐藥細(xì)胞株Bel-7402/Sora,證明GRP78和Beclin1參與了細(xì)胞耐藥性的形成。2.ART可通過降低蛋白GRP78和Beclin1的表達(dá)來逆轉(zhuǎn)索拉非尼作用于肝癌細(xì)胞產(chǎn)生的耐藥。
【學(xué)位授予單位】：延邊大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R735.7

【參考文獻(xiàn)】

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1 王雪;張?jiān)u滸;;Ras/Raf/MEK/ERK信號(hào)通路參與自噬調(diào)控作用的研究進(jìn)展[J];中國藥科大學(xué)學(xué)報(bào);2017年01期

2 張朝亞;趙相軒;盧再鳴;郭啟勇;;索拉非尼誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞凋亡信號(hào)通路的研究進(jìn)展[J];臨床肝膽病雜志;2016年04期

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4 鄒金桃;周紅;蔡永青;李小麗;;ATG8族蛋白與含LIR motif受體相互作用在選擇性自噬中的作用[J];四川生理科學(xué)雜志;2015年02期

5 遲寅秀;高福蓮;;青蒿琥酯對(duì)胃癌耐藥細(xì)胞SGC7901/mdr1阿霉素耐藥性的影響[J];新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2014年08期

6 宋洋;袁宜勤;郁潔;;內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激PERK凋亡通路研究進(jìn)展[J];中華中醫(yī)藥學(xué)刊;2013年05期

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8 劉志龍;曹明溶;李強(qiáng);高明;蔣建偉;;青蒿琥酯對(duì)人肝癌HepG2細(xì)胞增殖和凋亡的影響及聯(lián)合化療藥物的抗肝癌效應(yīng)[J];中國病理生理雜志;2012年02期

9 雷佳紅;凡瞿明;蔣紅;程吉賓;楊明輝;;青蒿琥酯誘導(dǎo)人肝癌細(xì)胞株HepG2凋亡及其機(jī)制[J];中華臨床醫(yī)師雜志(電子版);2011年12期

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2 朱鴻武;ATF4轉(zhuǎn)錄活化SIRT1的分子機(jī)制及其在介導(dǎo)胃癌多藥耐藥中的作用[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2012年

3 洪毅;自噬體形成和UPR信號(hào)通路激活在心肌慢性缺氧適應(yīng)中意義的研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2009年

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本文編號(hào)：2561638