【摘要】：研究背景：順鉑(cisplatin, CP)是一種鉑類化合物,是近40年來腫瘤治療藥物的重大發(fā)現(xiàn)之一,主要作用部位在DNA的嘌呤和嘧啶堿基。CP屬于細(xì)胞周期非特異性藥物,在其抑制癌細(xì)胞DNA復(fù)制過程的同時(shí)還可損傷其細(xì)胞的細(xì)胞膜結(jié)構(gòu),故其除了具有抗癌作用外,還具有很強(qiáng)的細(xì)胞毒性。臨床上,CP廣泛應(yīng)用于各種實(shí)體腫瘤,如前列腺癌、卵巢癌等生殖系統(tǒng)腫瘤,肺癌、鼻咽癌等呼吸系統(tǒng)腫瘤,食管癌等消化系統(tǒng)腫瘤,以及內(nèi)分泌腫瘤、血液系統(tǒng)腫瘤等。CP抗癌譜廣、作用強(qiáng),且與多種抗腫瘤藥物具有協(xié)同作用而無交叉耐藥,為當(dāng)前臨床化療中最常用的藥物之一。但是,CP副作用大,其最主要的副作用——腎毒性,發(fā)生于接受CP化療的近三分之一患者,呈現(xiàn)劑量、時(shí)間相關(guān)性。CP所致腎毒性最常見且最嚴(yán)重的后果就是急性腎損傷(acute kidney injury, AKI),在小鼠中主要見于腎近端小管。CP引發(fā)的AKI所涉及的機(jī)制包括有氧化應(yīng)激、炎癥反應(yīng)和腎小管細(xì)胞凋亡,而后者被視為最關(guān)鍵的機(jī)制。表沒食子兒茶素沒食子酸酯(Epigallocatechin-3-gallate, EGCG),是一種兒茶素類單體,主要從綠茶中提取獲得。EGCG是茶多酚生物活性的主要成份,具有抗氧化、抗炎、抗突變等活性特點(diǎn)。EGCG主要表現(xiàn)為強(qiáng)大的自由基清除能力,其突出的抗氧化活性,是維生素C的100多倍,是維生素E的25倍,具有顯著的細(xì)胞保護(hù)作用及潛在的抗癌效應(yīng)。近期多項(xiàng)研究已證實(shí),EGCG可緩解多種腫瘤的進(jìn)展。CP所致的AKI主要表現(xiàn)為腎小管上皮細(xì)胞的凋亡,其中所涉及的機(jī)制復(fù)雜,諸多研究表明,其機(jī)制包括由死亡受體如TNF或Fas介導(dǎo)的細(xì)胞外途徑、線粒體途徑和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激等�；贓GCG的抗氧化、抗炎、抗腫瘤等作用,本研究旨在探索EGCG能否減輕CP所致的腎毒性及其所涉及的機(jī)制。研究目的：建立CP誘導(dǎo)的AKI模型,用EGCG進(jìn)行干預(yù),探索EGCG能否減輕CP所致的腎毒性及其所涉及的機(jī)制。研究方法：成年雄性的C57/BL6小鼠被隨機(jī)分為以下四組：1)對照組(NC組)：腹腔注射生理鹽水10ml/kg; 2) EGCG組：腹腔注射EGCG 100mg/kg(以生理鹽水配備,藥物濃度為20mg/ml);3)CP組：腹腔注射CP 20mg/kg(以生理鹽水配備,藥物濃度為2mg/ml); 4)CP+EGCG組：EGCG 100mg/kg腹腔注射30min后給予CP 20mg/kg腹腔注射,48h后再次補(bǔ)充EGCG 100mg/kg腹腔注射。5天后,稱體重,處死小鼠。動物模型順利建成后,以檢測血清生化指標(biāo)變化、組織切片病理染色、[TUNEI凋亡檢測、Western blot、免疫組化等實(shí)驗(yàn)技術(shù)從分子水平探討EGCG的干擾作用及相關(guān)機(jī)制。結(jié)果：實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,EGCG能明顯減輕CP所致的腎組織損傷及血肌酐和尿素氮水平的增高；相比于CP組,CP+EGCG組的TUNEL陽性細(xì)胞數(shù)也明顯減少；同時(shí),EGCG還能下調(diào)Fas-L、Bax和p53的表達(dá),并上調(diào)Bcl-2的表達(dá)。結(jié)論：這些實(shí)驗(yàn)結(jié)果均證明,EGCG可以通過調(diào)控死亡受體Fas-L介導(dǎo)的細(xì)胞外途徑及干預(yù)Bax和Bcl-2凋亡蛋白分子的表達(dá)來抑制凋亡,減輕CP所致的腎毒性,具有潛在的臨床應(yīng)用價(jià)值。
【圖文】：

圖１．在小鼠中，ＥＧＣＧ減輕ＣＰ誘發(fā)的腎組織形態(tài)學(xué)改變。小鼠分組，兇生理逡逑鹽水（Ａ）、ＥＧＣＧ巧）、ＣＰ邋（Ｑ和ＣＰ邋＋邋ＥＧＣＧ邋（Ｄ）分別處理。在ＣＰ組中可明顯觀察逡逑到腎小管萎縮和擴(kuò)張、腎小管上皮細(xì)胞壞死和脫落、腎近端小管管型形成，而腎逡逑小管損傷在ＣＰ＋ＥＧＣＧ組可見明顯改善。Ｅ圖為腎小管損傷指數(shù)。數(shù)據(jù)平均數(shù)逡逑±ＳＤ表示。＊［］＜０．０５為與ＮＣ組相比；＃日＜０．０５為與ＣＰ組相比。４０0ｘ顯微鏡逡逑下觀察。逡逑

圖２．邋ＥＧＣＧ抑制ＣＰ誘導(dǎo)的腎小管上皮細(xì)胞調(diào)亡。小鼠分組，，Ｗ生理鹽水（Ａ）、逡逑ＥＧＣＧ巧）、ＣＰ（Ｃ）和ＣＰ邋＋邋ＥＧＣＧ（Ｄ份別處理。紅染細(xì)胞為ＴＵＮ化陽性細(xì)胞，逡逑４００Ｘ共聚焦顯微鏡下觀察。Ｅ圖為ＴＵＮＥＬ陽性細(xì)胞百分比柱狀圖。數(shù)據(jù)Ｗ平逡逑均數(shù)＋ＳＤ表示。＊口＜化０５為與ＮＣ組相比；�！酰蓟埃禐榕cＣＰ組巧比。逡逑
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R730.5

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本文編號：2559078