【摘要】：研究背景：順鉑(cisplatin, CP)是一種鉑類化合物,是近40年來腫瘤治療藥物的重大發(fā)現(xiàn)之一,主要作用部位在DNA的嘌呤和嘧啶堿基。CP屬于細胞周期非特異性藥物,在其抑制癌細胞DNA復制過程的同時還可損傷其細胞的細胞膜結構,故其除了具有抗癌作用外,還具有很強的細胞毒性。臨床上,CP廣泛應用于各種實體腫瘤,如前列腺癌、卵巢癌等生殖系統(tǒng)腫瘤,肺癌、鼻咽癌等呼吸系統(tǒng)腫瘤,食管癌等消化系統(tǒng)腫瘤,以及內分泌腫瘤、血液系統(tǒng)腫瘤等。CP抗癌譜廣、作用強,且與多種抗腫瘤藥物具有協(xié)同作用而無交叉耐藥,為當前臨床化療中最常用的藥物之一。但是,CP副作用大,其最主要的副作用——腎毒性,發(fā)生于接受CP化療的近三分之一患者,呈現(xiàn)劑量、時間相關性。CP所致腎毒性最常見且最嚴重的后果就是急性腎損傷(acute kidney injury, AKI),在小鼠中主要見于腎近端小管。CP引發(fā)的AKI所涉及的機制包括有氧化應激、炎癥反應和腎小管細胞凋亡,而后者被視為最關鍵的機制。表沒食子兒茶素沒食子酸酯(Epigallocatechin-3-gallate, EGCG),是一種兒茶素類單體,主要從綠茶中提取獲得。EGCG是茶多酚生物活性的主要成份,具有抗氧化、抗炎、抗突變等活性特點。EGCG主要表現(xiàn)為強大的自由基清除能力,其突出的抗氧化活性,是維生素C的100多倍,是維生素E的25倍,具有顯著的細胞保護作用及潛在的抗癌效應。近期多項研究已證實,EGCG可緩解多種腫瘤的進展。CP所致的AKI主要表現(xiàn)為腎小管上皮細胞的凋亡,其中所涉及的機制復雜,諸多研究表明,其機制包括由死亡受體如TNF或Fas介導的細胞外途徑、線粒體途徑和內質網(wǎng)應激等�；贓GCG的抗氧化、抗炎、抗腫瘤等作用,本研究旨在探索EGCG能否減輕CP所致的腎毒性及其所涉及的機制。研究目的：建立CP誘導的AKI模型,用EGCG進行干預,探索EGCG能否減輕CP所致的腎毒性及其所涉及的機制。研究方法：成年雄性的C57/BL6小鼠被隨機分為以下四組：1)對照組(NC組)：腹腔注射生理鹽水10ml/kg; 2) EGCG組：腹腔注射EGCG 100mg/kg(以生理鹽水配備,藥物濃度為20mg/ml);3)CP組：腹腔注射CP 20mg/kg(以生理鹽水配備,藥物濃度為2mg/ml); 4)CP+EGCG組：EGCG 100mg/kg腹腔注射30min后給予CP 20mg/kg腹腔注射,48h后再次補充EGCG 100mg/kg腹腔注射。5天后,稱體重,處死小鼠。動物模型順利建成后,以檢測血清生化指標變化、組織切片病理染色、[TUNEI凋亡檢測、Western blot、免疫組化等實驗技術從分子水平探討EGCG的干擾作用及相關機制。結果：實驗結果表明,EGCG能明顯減輕CP所致的腎組織損傷及血肌酐和尿素氮水平的增高；相比于CP組,CP+EGCG組的TUNEL陽性細胞數(shù)也明顯減少；同時,EGCG還能下調Fas-L、Bax和p53的表達,并上調Bcl-2的表達。結論：這些實驗結果均證明,EGCG可以通過調控死亡受體Fas-L介導的細胞外途徑及干預Bax和Bcl-2凋亡蛋白分子的表達來抑制凋亡,減輕CP所致的腎毒性,具有潛在的臨床應用價值。
【圖文】：

圖１．在小鼠中，ＥＧＣＧ減輕ＣＰ誘發(fā)的腎組織形態(tài)學改變。小鼠分組，兇生理逡逑鹽水（Ａ）、ＥＧＣＧ巧）、ＣＰ邋（Ｑ和ＣＰ邋＋邋ＥＧＣＧ邋（Ｄ）分別處理。在ＣＰ組中可明顯觀察逡逑到腎小管萎縮和擴張、腎小管上皮細胞壞死和脫落、腎近端小管管型形成，而腎逡逑小管損傷在ＣＰ＋ＥＧＣＧ組可見明顯改善。Ｅ圖為腎小管損傷指數(shù)。數(shù)據(jù)平均數(shù)逡逑±ＳＤ表示。＊［］＜０．０５為與ＮＣ組相比；＃日＜０．０５為與ＣＰ組相比。４０0ｘ顯微鏡逡逑下觀察。逡逑

圖２．邋ＥＧＣＧ抑制ＣＰ誘導的腎小管上皮細胞調亡。小鼠分組，，Ｗ生理鹽水（Ａ）、逡逑ＥＧＣＧ巧）、ＣＰ（Ｃ）和ＣＰ邋＋邋ＥＧＣＧ（Ｄ份別處理。紅染細胞為ＴＵＮ化陽性細胞，逡逑４００Ｘ共聚焦顯微鏡下觀察。Ｅ圖為ＴＵＮＥＬ陽性細胞百分比柱狀圖。數(shù)據(jù)Ｗ平逡逑均數(shù)＋ＳＤ表示。＊口＜化０５為與ＮＣ組相比；＃□＜化０５為與ＣＰ組巧比。逡逑
【學位授予單位】：山東大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R730.5

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本文編號：2559078