【摘要】：目的:探討NF-κB特異性抑制劑PDTC對(duì)多發(fā)性骨髓瘤U266細(xì)胞增殖和凋亡的影響及可能的作用機(jī)制。方法:采用不同濃度PDTC(25、50、100和200μmol/L)處理U266細(xì)胞,CCK-8法和活細(xì)胞計(jì)數(shù)檢測(cè)U266細(xì)胞的增殖活性;流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡率及細(xì)胞周期;RT-qPCR及Western blot檢測(cè)PDTC處理前后DNA甲基轉(zhuǎn)移酶1(DNMT1)mRNA和蛋白的表達(dá);Western blot檢測(cè)NF-κB(P65)、DNMT1、Bcl-2、cyclin D1、cleaved caspase-3和cleaved caspase-8的蛋白水平。結(jié)果:PDTC處理U266細(xì)胞48 h后,NF-κB(P65)的蛋白水平被抑制;PDTC抑制U266細(xì)胞增殖,作用呈濃度及時(shí)間依賴性;PDTC作用48 h后,與對(duì)照組比較,細(xì)胞凋亡率呈濃度依賴性增高(P0.05),細(xì)胞被阻滯在G2期;DNMT1的mRNA及蛋白水平均降低;Western blot結(jié)果顯示PDTC可通過(guò)抑制NF-κB下調(diào)Bcl-2的表達(dá),使cyclin D1、cleaved caspase-3和cleaved caspase-8蛋白水平增加。結(jié)論:PDTC抑制NF-κB信號(hào)通路,通過(guò)誘導(dǎo)U266細(xì)胞凋亡從而抑制細(xì)胞增殖,其機(jī)制可能與抑制DNMT1的表達(dá)、阻滯細(xì)胞周期和啟動(dòng)凋亡途徑有關(guān)。
【圖文】：

Figure3．InfluenceofPDTConthecellcycleofU266cells．圖3流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)PDTC對(duì)U266細(xì)胞周期的影響表1流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)不同濃度PDTC對(duì)U266細(xì)胞周期的影響Table1．InfluenceofPDTConthecellcycleofU266cells(%．Mean±SD．n=3)PDTC(μmol/L)G1SG2033．10±2．4361．80±3．155．10±1．075030．85±1．8455．65±2．3913．49±2．82＊＊10023．05±4．0652．98±1．6323．97±2．25＊＊＊＊P＜0.01vs0μmol/Lgroup．Figure4．TheapoptoticrateofU266cellsincreasedwiththeincreasingconcentrationsofPDTCfor48h．Mean±SD．n=3．＊＊P＜0.01vs0μmol/Lgroup．圖4流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)PDTC作用于U266細(xì)胞48h的細(xì)胞凋亡率組相比，PDTC組DNMT1的mＲNA表達(dá)降低(P＜0.01)。Westernblot實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，PDTC處理后DNMT1蛋白水平明顯下降，與對(duì)照組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。且隨著PDTC濃度的增加，DNMT1蛋白水平呈逐漸降低趨勢(shì)，在100μmol/L時(shí)差異較顯著(P＜0.01)，，見(jiàn)圖6。·1180·

Figure3．InfluenceofPDTConthecellcycleofU266cells．圖3流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)PDTC對(duì)U266細(xì)胞周期的影響表1流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)不同濃度PDTC對(duì)U266細(xì)胞周期的影響Table1．InfluenceofPDTConthecellcycleofU266cells(%．Mean±SD．n=3)PDTC(μmol/L)G1SG2033．10±2．4361．80±3．155．10±1．075030．85±1．8455．65±2．3913．49±2．82＊＊10023．05±4．0652．98±1．6323．97±2．25＊＊＊＊P＜0.01vs0μmol/Lgroup．Figure4．TheapoptoticrateofU266cellsincreasedwiththeincreasingconcentrationsofPDTCfor48h．Mean±SD．n=3．＊＊P＜0.01vs0μmol/Lgroup．圖4流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)PDTC作用于U266細(xì)胞48h的細(xì)胞凋亡率組相比，PDTC組DNMT1的mＲNA表達(dá)降低(P＜0.01)。Westernblot實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，PDTC處理后DNMT1蛋白水平明顯下降，與對(duì)照組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。且隨著PDTC濃度的增加，DNMT1蛋白水平呈逐漸降低趨勢(shì)，在100μmol/L時(shí)差異較顯著(P＜0.01)，見(jiàn)圖6。·1180·

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