【摘要】：惡性血液系統(tǒng)疾病發(fā)生機制不明，考慮是多因素共同作用的結(jié)果，基因突變和染色體核型異常是重要的作用因素。因大多數(shù)的惡性血液病都有染色體的異常改變，因此染色體核型的檢查為血液病診斷分型、治療、預(yù)后評估、發(fā)病機制的探尋提供了必不可少的根據(jù)。Y染色體作為男性特有的近端著絲粒染色體，在性別分化及男性生殖功能起決定性作用。大量研究發(fā)現(xiàn)，Y染色體和腫瘤的關(guān)系也是密不可分，至今已經(jīng)報道有20余種惡性腫瘤細胞中發(fā)現(xiàn)Y染色體缺失獨立存在或合并其他染色體的異常。在惡性的血液系統(tǒng)疾病中，Y染色體也是腫瘤細胞核型異常時最容易缺失的染色體之一。但是因為Y染色體可隨著年齡的增長而逐漸丟失，在正常老年男性的骨髓細胞中也可出現(xiàn)Y染色體缺失的情況。因此，在老年男性患者因血液系統(tǒng)異常而就診時，在其骨髓中發(fā)現(xiàn)Y染色體缺失，這個現(xiàn)象是來自正常細胞衰老的生理性丟失，還是惡性腫瘤細胞的克隆標(biāo)記，是多年一直爭議不休的話題。本研究旨在明確Y染色體缺失在血液病中是獨立存在還是伴隨其他癌癥相關(guān)基因的復(fù)制和缺失，及其和血液病的相關(guān)性。 研究目的：研究骨髓Y染色體缺失與男性惡性血液病的相關(guān)性。Y染色體缺失是因年齡增加出現(xiàn)的生理性現(xiàn)象，不和疾病相關(guān)，還是獨立存在的導(dǎo)致血液病或腫瘤易感的染色體不穩(wěn)定性因素。以明確在今后血液病的診斷、治療及追蹤隨訪中，是否把Y染色體缺失的追蹤作為血液病緩解或復(fù)發(fā)的評價指標(biāo)。 研究方法：本研究采用美國俄克拉荷馬大學(xué)附屬集團醫(yī)院的男性血液病患者送檢至健康科學(xué)中心遺傳研究室的骨髓或白血病血標(biāo)本作為樣本，采用常規(guī)的細胞遺傳學(xué)技術(shù)篩選出以Y染色體缺失為唯一異常，不伴有其他染色體數(shù)目改變或結(jié)構(gòu)異常的標(biāo)本，使用微陣列比較基因組雜交（arrayCGH）檢測標(biāo)本DNA中是否含有傳統(tǒng)染色體分析技術(shù)難以發(fā)現(xiàn)的基因拷貝數(shù)的變化，以明確在這些血液病標(biāo)本中，Y染色體缺失是獨立存在，還是伴隨著其他染色體上癌基因或抑癌基因的復(fù)制和缺失？Y染色體是全部缺失，還是只有小片段或重要基因的復(fù)制和缺失？同時，通過對比同一患者治療前后的染色體核型演變，比較骨髓中原始細胞和45，X，-Y細胞比例的增減變化，明確Y染色體缺失細胞核型的出現(xiàn)和消失與血液病治療的關(guān)系。 結(jié)果： 1.2007年至2014年3月，俄克拉荷馬大學(xué)遺傳研究室共收到1770名男性患者的組織標(biāo)本，經(jīng)染色體核型分析檢測后，共有108患者具有Y染色體缺失的異常核型，比例為6%，接近于文獻報道的8%-15%。其中共有86名患者以45，X，-Y為唯一異常，不伴隨其他染色體數(shù)目及結(jié)構(gòu)異常，這些患者的中位年齡為72歲，最小年齡為5歲，最大年齡88歲。另有22名患者除Y染色體缺失外，還伴隨其他染色體數(shù)目和結(jié)構(gòu)的異常。 2.采用熒光原位雜交技術(shù)（FISH）檢測以上86名患者的間期細胞Y染色體缺失比例。共有37名患者的45，X，-Y細胞比例大于30%。通過比較患病人數(shù)較多的AML、MDS、NHL和MM四個病種發(fā)現(xiàn)，染色體核型分析和熒光原位雜交準(zhǔn)確度類似，但FISH敏感性更高。 3.采用比較基因組雜交技術(shù)，在37名45，X，-Y細胞比例大于30%的患者中，有33例檢測到Y(jié)染色體全部缺失獨立存在，未見伴隨其他染色體基因拷貝數(shù)的異常。只有2名患者伴有其他染色體的腫瘤相關(guān)基因獲得和缺失。有2名患者為Y染色體長臂缺失，短臂正常存在。 4.綜合同一患者的多次染色體檢測及骨髓象的病理檢查，發(fā)現(xiàn)Y染色體細胞缺失的比例可隨著AML臨床血液學(xué)的緩解而下降甚至消失，在復(fù)發(fā)時再度出現(xiàn)。 結(jié)論： 1．Y染色體缺失在男性血液病骨髓中較為常見的異常核型，比例約在6%-8%左右。 2．Y染色體全部缺失在血液病中獨立存在，不伴隨癌基因的復(fù)制和抑癌基因的缺失，是獨立存在的染色體不穩(wěn)定性因素，一方面，可能代表了異常腫瘤克隆的遺傳學(xué)標(biāo)記；另一方面，可能來自正常體細胞的生理性缺失，但和其他實體腫瘤一樣，Y染色體的生理性缺失使血液病腫瘤的發(fā)生具有高度的易感性。 3．在血液病中以Y染色體長臂缺失比短臂缺失更為常見。 4．檢測異常染色體核型時，F(xiàn)ISH技術(shù)可同時檢測分裂中期和間期細胞，分析細胞數(shù)量大，可獲得更為精確的細胞比例，不受細胞分裂周期的影響。 5．對于AML患者，Y染色體缺失細胞的比例可隨著臨床血液學(xué)的緩解而下降甚至消失，在復(fù)發(fā)時再度出現(xiàn)。 主要創(chuàng)新： 1.采用細胞遺傳學(xué)和分子遺傳學(xué)技術(shù)相結(jié)合精確檢測血液病中異常染色體核型。 2.采用arrayCGH明確有Y染色體缺失的血液病中，是否存在癌基因的復(fù)制或抑癌基因的缺失，探索Y染色體缺失是否是獨立存在的因素。 3.結(jié)合治療前后染色體核型和Y染色體缺失細胞比例的變化，明確Y染色體和血液病的關(guān)系，將其作為惡性腫瘤克隆標(biāo)志的檢測，診斷、治療及愈后隨訪帶來重要的臨床意義。
【圖文】：

9圖 2.1 Y 染色體的結(jié)構(gòu)模式圖[45]Figure 2.1 The Ideogram of Y Chromosome Structure[45]Y 染色體的結(jié)構(gòu)具有高度變異性，數(shù)目和結(jié)構(gòu)發(fā)生異常可影響嚴(yán)重男性性

AML、MDS、NHL、MM 居多。最小年齡的病人為 5 歲，診斷為骨髓增生性疾病。另有兩名病人診斷為前列腺癌和再生障礙性貧血，，非血液系統(tǒng)惡性克隆性疾病。另 22 名患者核型除 Y 染色體缺失外伴隨其他復(fù)雜的染色體異常，可見有一個 CML 病人 Y 染色體缺失伴隨 t(9;22)易位，AML 病人 Y 染色體缺失伴隨 t(8;21)易位，有兩個 MDS 病人 Y 染色體缺失伴有-20q。其余均為染色體非整倍體伴復(fù)雜核型，可為一個或多個克隆；對于 7 個多次檢測染色體的 AML 病人，如表 3.4，綜合分析核型變化及臨床信息，病人 1 至病人 4 的 Y 染色體缺失比例隨著骨髓原始細胞的減少而減少，完全緩解后消失，疾病復(fù)發(fā)后-Y 再次出現(xiàn)，提示 Y 染色體的缺失代表著腫瘤負荷。但對于病人 5 至病人 7 在最初確定急性白血病的診斷時均為正常核型，在治療過程中出現(xiàn) Y 染色體的缺失。
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R733.3

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1 王崇新,馬咸成,葉大勛,喬學(xué)萍,王秀英,劉戈力;多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)檢測睪丸女性化綜合征患者的Y染色體[J];中國優(yōu)生與遺傳雜志;1996年05期

2 蘭西;;澳大利亞女科學(xué)家發(fā)出驚人預(yù)測:男性Y染色體正在走向“毀滅之路”——男人將在500萬年后從地球上滅絕?[J];科學(xué)大觀園;2013年09期

3 杜心W

本文編號：2556829