發(fā)布時(shí)間：2019-11-06 09:08

【摘要】：作為全球范圍內(nèi)最常見(jiàn)的惡性腫瘤的原發(fā)性肝癌(primary hepatic carcinoma,PHC),其在我國(guó)的發(fā)病率及死亡率都居于惡性腫瘤的第二位。臨床研究發(fā)現(xiàn),大約77~90%原發(fā)性肝癌患者血清中甲胎蛋白(alpha-fetoprotein,AFP)的含量都發(fā)生異常升高,因此AFP被作為早期發(fā)現(xiàn)和診斷PHC的重要指標(biāo)之一。目前在臨床檢驗(yàn)方面建立了多種測(cè)定血清中AFP指標(biāo)的方法。比如化學(xué)發(fā)光免疫分析(CLIA)、時(shí)間分辨熒光免疫分析法(TRFIA)、放射免疫分析(RIA)、酶聯(lián)免疫檢測(cè)方法(ELISA)以及膠體金免疫層析檢測(cè)等。但是,多采用了國(guó)外的大型檢測(cè)設(shè)備和系統(tǒng),實(shí)驗(yàn)操作復(fù)雜,儀器昂貴,檢測(cè)成本較高,不利于開(kāi)展對(duì)大范圍人群血清中AFP指標(biāo)進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)篩查。因此,研制腫瘤標(biāo)志物AFP的現(xiàn)場(chǎng)快速定量檢測(cè)系統(tǒng)具有重要社會(huì)效益和臨床應(yīng)用前景。本文基于圖像特征的識(shí)別原理,選用波長(zhǎng)540nm的綠色LED作為光源,以面陣CMOS芯片構(gòu)建光電傳感器的微控系統(tǒng),完成金標(biāo)試紙檢測(cè)儀的光路和電路設(shè)計(jì)。樣機(jī)的C8051F340微控芯片能對(duì)AFP金標(biāo)試紙條檢測(cè)線(xiàn)(T線(xiàn)和C線(xiàn))進(jìn)行自動(dòng)定位和智能識(shí)別,實(shí)現(xiàn)對(duì)血清樣本中AFP的定量檢測(cè)。儀器穩(wěn)定性測(cè)試結(jié)果顯示,在四種不同檢測(cè)頻率(5 KHz、30 KHz、50 KHz和70 KHz)條件下,該樣機(jī)對(duì)AFP空白試紙條檢測(cè)數(shù)據(jù)的變異系數(shù)均小于0.36%;在甲胎蛋白在25~800 ng/mL濃度范圍內(nèi),加標(biāo)液含量與試紙條檢測(cè)線(xiàn)顯色度具有良好的二次擬合特性(R2=0.994)。對(duì)AFP加標(biāo)回收率為92.2%~105.5%,其相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為1.49%~2.25%,表明方法的精密度和準(zhǔn)確度較好。其檢測(cè)成本降至ELISA試劑盒檢測(cè)的10~20%以下。可見(jiàn),該檢測(cè)儀樣機(jī)非常適合對(duì)大量疑似癌癥患者血樣進(jìn)行快速定量篩查檢測(cè)。所建立的AFP膠體金試紙定量分析新技術(shù),采用了CMOS線(xiàn)陣圖像傳感器技術(shù),并引入RFID射頻模塊。有效簡(jiǎn)化了硬件設(shè)備,便于實(shí)現(xiàn)儀器的小型化和便攜式。同時(shí),能實(shí)現(xiàn)對(duì)試紙條進(jìn)行智能身份識(shí)別和檢測(cè)結(jié)果數(shù)據(jù)智能化管理,該方法對(duì)于血清樣本中AFP的快速定量篩查提供了一種新的思路。
【圖文】：

圖1-2AFP 膠體金免疫層析試紙結(jié)構(gòu)示意圖Fig 1-2 Schematic and structure description of the colloidal gold stripAFP 膠體金試紙制備的關(guān)鍵控制點(diǎn)：AFP 膠體金試紙的制備主要包括 作工序：膠體金的燒制，膠體金的標(biāo)記及纖維素膜的抗體包被，AFP 膠體金的組裝[12]。（1）還原劑的種類(lèi)制備膠體金的反應(yīng)原理是利用氯金酸和檸檬酸鈉溶液的還原反應(yīng)，在高溫下氯金酸水溶液中加入還原劑（如檸檬酸三鈉等），使氯化金被還原為單質(zhì)成納米級(jí)的膠體金顆粒�？捎糜谥苽淠z體金的還原劑主要包括以下三種：檸三納、白磷及鞣酸。實(shí)驗(yàn)步驟注意事項(xiàng)：① 專(zhuān)用玻璃儀器潔凈化處理：由于使用被污染的玻璃器皿或者有灰塵時(shí)會(huì)影響膠體金顆粒的生成，嚴(yán)重時(shí)會(huì)導(dǎo)致所制備的納米金顆粒徑不均勻。因

裝袋（自封袋、塑料袋）包好，減少水分和灰塵的污染。③ 特殊金標(biāo)墊和樣品墊以及全血濾血膜室溫存儲(chǔ)。最好用鋁箔袋加，減少水分和灰塵的污染。④ 抗原抗體等生物活性原料 需靜止半小時(shí)然后搖勻，取用時(shí)勿忘瓶蓋上的原料。切勿反復(fù)凍融。膠體金和氯金酸 4℃密封存儲(chǔ)。.2.1 不同濃度的 AFP 金標(biāo)試紙顯色圖像實(shí)驗(yàn)選取了天津中新科炬生物有限公司生產(chǎn)甲胎蛋白（AFP）膠體，準(zhǔn)確配置 AFP 標(biāo)準(zhǔn)溶液，濃度依次為 0，25，50，100 ng/ml，：① 用移液器依次吸取 10μL 以上所配置的標(biāo)準(zhǔn)樣品，② 慢慢加入在 B 孔中加入 80μL 樣本稀釋液；③ 開(kāi)始計(jì)時(shí)，，15~20min 內(nèi) AFP 層析結(jié)果如圖 1-3 所示，由左至右依次是 AFP 標(biāo)準(zhǔn)溶液為 0， 25，ml 的 AFP 金標(biāo)試紙條顯色的結(jié)果。其可以作為 AFP 定性檢測(cè)的對(duì)試紙條顯色超過(guò) 20min 后，判定其顯色結(jié)果無(wú)效。
【學(xué)位授予單位】：浙江工業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R735.7;R730.43

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8 健康時(shí)報(bào)特約記者 yび板

本文編號(hào)：2556637