【摘要】：作為全球范圍內最常見的惡性腫瘤的原發(fā)性肝癌(primary hepatic carcinoma,PHC),其在我國的發(fā)病率及死亡率都居于惡性腫瘤的第二位。臨床研究發(fā)現(xiàn),大約77~90%原發(fā)性肝癌患者血清中甲胎蛋白(alpha-fetoprotein,AFP)的含量都發(fā)生異常升高,因此AFP被作為早期發(fā)現(xiàn)和診斷PHC的重要指標之一。目前在臨床檢驗方面建立了多種測定血清中AFP指標的方法。比如化學發(fā)光免疫分析(CLIA)、時間分辨熒光免疫分析法(TRFIA)、放射免疫分析(RIA)、酶聯(lián)免疫檢測方法(ELISA)以及膠體金免疫層析檢測等。但是,多采用了國外的大型檢測設備和系統(tǒng),實驗操作復雜,儀器昂貴,檢測成本較高,不利于開展對大范圍人群血清中AFP指標進行現(xiàn)場篩查。因此,研制腫瘤標志物AFP的現(xiàn)場快速定量檢測系統(tǒng)具有重要社會效益和臨床應用前景。本文基于圖像特征的識別原理,選用波長540nm的綠色LED作為光源,以面陣CMOS芯片構建光電傳感器的微控系統(tǒng),完成金標試紙檢測儀的光路和電路設計。樣機的C8051F340微控芯片能對AFP金標試紙條檢測線(T線和C線)進行自動定位和智能識別,實現(xiàn)對血清樣本中AFP的定量檢測。儀器穩(wěn)定性測試結果顯示,在四種不同檢測頻率(5 KHz、30 KHz、50 KHz和70 KHz)條件下,該樣機對AFP空白試紙條檢測數(shù)據(jù)的變異系數(shù)均小于0.36%;在甲胎蛋白在25~800 ng/mL濃度范圍內,加標液含量與試紙條檢測線顯色度具有良好的二次擬合特性(R2=0.994)。對AFP加標回收率為92.2%~105.5%,其相對標準偏差(RSD)為1.49%~2.25%,表明方法的精密度和準確度較好。其檢測成本降至ELISA試劑盒檢測的10~20%以下。可見,該檢測儀樣機非常適合對大量疑似癌癥患者血樣進行快速定量篩查檢測。所建立的AFP膠體金試紙定量分析新技術,采用了CMOS線陣圖像傳感器技術,并引入RFID射頻模塊。有效簡化了硬件設備,便于實現(xiàn)儀器的小型化和便攜式。同時,能實現(xiàn)對試紙條進行智能身份識別和檢測結果數(shù)據(jù)智能化管理,該方法對于血清樣本中AFP的快速定量篩查提供了一種新的思路。
【圖文】：

圖1-2AFP 膠體金免疫層析試紙結構示意圖Fig 1-2 Schematic and structure description of the colloidal gold stripAFP 膠體金試紙制備的關鍵控制點：AFP 膠體金試紙的制備主要包括 作工序：膠體金的燒制，膠體金的標記及纖維素膜的抗體包被，AFP 膠體金的組裝[12]。（1）還原劑的種類制備膠體金的反應原理是利用氯金酸和檸檬酸鈉溶液的還原反應，在高溫下氯金酸水溶液中加入還原劑（如檸檬酸三鈉等），使氯化金被還原為單質成納米級的膠體金顆粒。可用于制備膠體金的還原劑主要包括以下三種：檸三納、白磷及鞣酸。實驗步驟注意事項：① 專用玻璃儀器潔凈化處理：由于使用被污染的玻璃器皿或者有灰塵時會影響膠體金顆粒的生成，嚴重時會導致所制備的納米金顆粒徑不均勻。因

裝袋（自封袋、塑料袋）包好，減少水分和灰塵的污染。③ 特殊金標墊和樣品墊以及全血濾血膜室溫存儲。最好用鋁箔袋加，減少水分和灰塵的污染。④ 抗原抗體等生物活性原料 需靜止半小時然后搖勻，取用時勿忘瓶蓋上的原料。切勿反復凍融。膠體金和氯金酸 4℃密封存儲。.2.1 不同濃度的 AFP 金標試紙顯色圖像實驗選取了天津中新科炬生物有限公司生產(chǎn)甲胎蛋白（AFP）膠體，準確配置 AFP 標準溶液，濃度依次為 0，25，50，100 ng/ml，：① 用移液器依次吸取 10μL 以上所配置的標準樣品，② 慢慢加入在 B 孔中加入 80μL 樣本稀釋液；③ 開始計時，，15~20min 內 AFP 層析結果如圖 1-3 所示，由左至右依次是 AFP 標準溶液為 0， 25，ml 的 AFP 金標試紙條顯色的結果。其可以作為 AFP 定性檢測的對試紙條顯色超過 20min 后，判定其顯色結果無效。
【學位授予單位】：浙江工業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R735.7;R730.43

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8 健康時報特約記者 yび板

本文編號：2556637