【摘要】：第一章MLL3突變AML家系的異常表觀(guān)遺傳學(xué)研究第一節(jié)MLL3突變AML家系的異常DNA甲基化研究背景和目的:眾多研究表明異常的表觀(guān)遺傳學(xué)改變?cè)谀[瘤的發(fā)病中扮演重要角色。其中DNA甲基化是一種重要的表觀(guān)遺傳學(xué)改變,與多種腫瘤相關(guān),包括急性髓細(xì)胞白血病(acute myeloid leukemia, AML)和結(jié)直腸癌(colorectal carcinoma,CRC)。在前期針對(duì)一個(gè)腫瘤家系的研究中,我們發(fā)現(xiàn)此家系的AML患者和CRC患者都存在MLL3基因(mixed lineage leukemia family gene 3,混合系白血病家族基因3 )突變。MLL3基因突變有可能導(dǎo)致DNA異常甲基化。本研究進(jìn)一步對(duì)該腫瘤家系進(jìn)行研究,探索DNA甲基化在該腫瘤家系發(fā)病中的作用。材料和方法:我們選擇了一個(gè)中國(guó)人腫瘤家系,采集家系中2例AML患者和2例CRC患者的骨髓和外周血標(biāo)本,以及該家系無(wú)MLL3基因突變的1例正常對(duì)照的外周血標(biāo)本,檢測(cè)全基因組的DNA甲基化水平,并探索了甲基化在疾病發(fā)生發(fā)展中的作用。全基因組DNA甲基化水平檢測(cè)采用的是Illumina公司Infinium人類(lèi)甲基化檢測(cè)芯片(450K)。結(jié)果:研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)4例MLL3基因突變的腫瘤患者的DNA甲基化狀態(tài)與正常對(duì)照存在顯著差異,且呈現(xiàn)普遍的高甲基化狀態(tài)。此外,處于急性期的AML患者相比緩解期的AML患者,存在更多的高甲基化CpG島。在4例腫瘤患者中存在59個(gè)相同的甲基化異�；�(高甲基化或者低甲基化)。全基因組DNA甲基化分析結(jié)果證實(shí)所有異常甲基化位點(diǎn)不僅存在于普遍認(rèn)同的啟動(dòng)子區(qū)域,許多異常甲基化位點(diǎn)也存在于基因主體區(qū)域。結(jié)論:研究結(jié)果表明該家系中腫瘤的發(fā)生可能與異常DNA甲基化密切相關(guān),DNA高甲基化可能在該組腫瘤發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮了重要作用。第二節(jié)MLL3突變AML家系的H3K4me3異常機(jī)制研究背景和目的:研究表明異常的組蛋白表觀(guān)遺傳學(xué)改變?cè)谀[瘤的發(fā)病中扮演重要角色。其中H3K4me3 (histone3lysine4trimethylation,組蛋白3賴(lài)氨酸4三甲基化)是最常見(jiàn)的一種組蛋白修飾,多出現(xiàn)在活化基因的啟動(dòng)子區(qū)域,促進(jìn)下游基因表達(dá)。H3K4(histone 3 lysine 4,組蛋白3賴(lài)氨酸4)異常甲基化與腫瘤的發(fā)生密切相關(guān)。前期在針對(duì)一個(gè)腫瘤家系的研究中,我們發(fā)現(xiàn)此家系的AML患者和CRC患者都存在MLL3基因突變。MLL3基因編碼的蛋白作為甲基化轉(zhuǎn)移酶,可以調(diào)控H3K4的甲基化。本研究通過(guò)探索MLL3基因突變家系中H3K4me3在基因組中的不同的結(jié)合位點(diǎn),進(jìn)一步明確該腫瘤家系發(fā)病的H3K4me3異常相關(guān)機(jī)制。材料和方法:選取了腫瘤家系中存在MLL3基因突變的3例腫瘤患者(1例AML患者,2例CRC患者)以及1例無(wú)MLL3基因突變的正常對(duì)照作為研究對(duì)象,采用Chip-chip的方法,通過(guò)研究與H3K4me3抗體發(fā)生免疫共沉淀的啟動(dòng)子區(qū)域,將捕獲的啟動(dòng)子涉及的下游基因定位到KEGG (Kyoto Encyclopedia Of Genes And Genomes,京都基因和基因組百科全書(shū))通路中。結(jié)果:研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)H3K4me3結(jié)合的啟動(dòng)子的數(shù)目在MLL3基因突變的腫瘤組與正常對(duì)照之間沒(méi)有顯著差異,而在腫瘤患者中捕獲了特殊的H3K4me3結(jié)合譜,涉及到的相關(guān)基因集中在與腫瘤發(fā)生密切相關(guān)的通路上。結(jié)論:研究結(jié)果表明腫瘤家系中的AML及CRC的發(fā)生可能與特殊的H3K4me3結(jié)合譜相關(guān),進(jìn)一步進(jìn)行全基因組的H3K4me3結(jié)合位點(diǎn)測(cè)序可能有助于發(fā)現(xiàn)新的腫瘤標(biāo)志物。第二章大劑量DNR治療AML作用與安全性的Cochrane系統(tǒng)評(píng)價(jià)背景和目的:系統(tǒng)評(píng)價(jià)大劑量柔紅霉素(high-dose of daunorubicin, HD-DNR)與傳統(tǒng)低劑量柔紅霉素(low-dose of daunorubicin,LD-DNR)或者去甲氧柔紅霉素(idarubicin, IDA)相比,在急性髓系白血病誘導(dǎo)治療的效用和安全性。材料和方法:計(jì)算機(jī)檢索Pubmed,Embase, Cochrane library數(shù)據(jù)庫(kù)以及相關(guān)專(zhuān)業(yè)網(wǎng)站和會(huì)議摘要,納入符合標(biāo)準(zhǔn)的隨機(jī)對(duì)照試驗(yàn)。對(duì)納入研究進(jìn)行偏倚風(fēng)險(xiǎn)評(píng)價(jià),數(shù)據(jù)提取。使用Revman 5對(duì)各研究數(shù)據(jù)進(jìn)行meta分析,無(wú)法合并的數(shù)據(jù)采用定性描述方法。主要結(jié)局指標(biāo)是總體生存率(overall survival,OS ),無(wú)病生存率(disease-free survival,DFS ),無(wú)事件生存率(event-free survival,EFS);次要結(jié)局指標(biāo)是完全緩解(complete remission,CR)率,早期死亡率,復(fù)發(fā)率,不良反應(yīng)發(fā)生率。結(jié)果:共檢索出1796篇文獻(xiàn),最終納入6項(xiàng)研究,共計(jì)3824例急性髓系白血病患者。(1)HD與LD-DNR相比,CR(相對(duì)危險(xiǎn)度(relative risk,RR=1.19,95%置信區(qū)間(confidence interval,CI) [1.12,1.18],p0.00001),OS(風(fēng)險(xiǎn)比(hazard ratio,HR) =0.88, 95%CI[0.79,0.99],p=0.002), EFS(HR=0.86, 95%CI[0.74,1.00], p=0.008),差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。對(duì)于DFS,復(fù)發(fā)率,誘導(dǎo)其死亡率和不良反應(yīng),兩者之間尚沒(méi)有足夠證據(jù)說(shuō)明其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(2) HD-DNR與IDA相比,各項(xiàng)結(jié)局指標(biāo)均沒(méi)有足夠證據(jù)說(shuō)明其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論:(1)與LD-DNR相比,HD-DNR可以提高完全緩解率,總體生存率以及無(wú)事件發(fā)生率,在不良反應(yīng)方面沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著的差異。(2) HD-DNR與IDA在效用和安全性上尚沒(méi)有足夠的證據(jù)表明兩組存在差異。
【圖文】：

１．２．１材料逡逑１．２．１．１研究對(duì)象逡逑該家系成員均為中國(guó)漢族人，圖１為家系圖。逡逑ｉｉ－１邋＾邋ｉｉＴ￣邐ｉｉ＾邋ｎ－４＾邐￣逡逑口正常男性邐0正常女性邐１－２．？肺癌逡逑ＩＩ－

１．２．２．４全基因組ＤＮＡ甲基化測(cè)序?qū)嶒?yàn)逡逑采用Ｉｌｌｕｍｉｎａ公司（Ｓａｎ邋Ｄｉｅｇｏ，邋ＣＡ，邋ＵＳＡ）的Ｉｎｆｍｉｕｍ人類(lèi)甲基化檢測(cè)芯片（４５０Ｋ）逡逑進(jìn)行測(cè)序。逡逑（１）測(cè)序?qū)嶒?yàn)流程圖如下：逡逑
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R733.71;R735.34

【參考文獻(xiàn)】

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3 黃玉平;;老年急性白血病臨床特點(diǎn)及個(gè)體化治療分析[J];臨床醫(yī)學(xué)工程;2014年08期

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本文編號(hào)：2556396