【摘要】：目的研究飽和脂肪酸和不飽和脂肪酸對肺癌細胞增殖與自噬的影響。方法用0、30、60、120、240μmol/L硬脂酸(飽和脂肪酸)和DHA(不飽和脂肪酸)分別處理肺癌細胞A549,繪制細胞生長曲線并計算克隆形成率以檢測細胞增殖。采用硬脂酸和DHA分別處理A549細胞24h后,采用激光共聚焦顯微鏡從形態(tài)學方面觀察細胞自噬情況。采用硬脂酸和DHA分別處理A549細胞12、24、36h后,用Western blotting檢測細胞自噬相關蛋白的表達。結果30~240μmol/L硬脂酸和DHA均有抑制A549細胞增殖的作用(P0.05),硬脂酸、DHA處理A549細胞24h后均檢測到細胞出現(xiàn)明顯的自噬;Western blotting結果顯示,硬脂酸、DHA分別處理A549細胞12、24、36h后,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值升高(P0.05),哺乳動物雷帕霉素靶蛋白(ser2481)磷酸化水平降低(P0.05)。結論飽和脂肪酸和不飽和脂肪酸均有抑制肺癌細胞增殖、誘導肺癌細胞自噬的作用,其機制可能與p-m TOR(ser2481)信號通路有關。
【圖文】：

670解放軍醫(yī)學雜志2017年8月1日第42卷第8期2結果2.1硬脂酸和DHA對A549細胞增殖的影響克隆平板經掃描后的圖片如圖1A(a)所示，可見隨硬脂酸或DHA濃度的增加，細胞克隆數(shù)逐漸減少；圖1A(b)為細胞克隆數(shù)的統(tǒng)計分析結果，可見30、60、120、240μmol/L硬脂酸處理組和60、120、240μmol/LDHA處理組與各自的空白對照組相比，細胞克隆數(shù)均明顯減少，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。第5天細胞增殖實驗結果見圖1B，120、240μmol/L硬脂酸作用A549細胞的第1、2、3、4、5天細胞增殖與空白對照組相比明顯減少，60μmol/L硬脂酸作用A549細胞后第4、5天與空白對照組相比細胞增殖明顯減少，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，其他處理組與空白對照組相比細胞增殖差異無統(tǒng)計學意義。120、240μmol/LDHA作用于A549細胞第1、2、3、4、5天與空白對照組相比細胞增殖明顯減少，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，60μmol/LDHA作用A549細胞第4、5天與空白對照組相比細胞增殖明顯減少，該變化與硬脂酸處理組一致，30μmol/LDHA作用A549細胞第5天與空白對照組相比細胞增殖明顯減少，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。從總體水平上看，硬脂酸、DHA都有抑制A549細胞增殖的作用。2.2硬脂酸、DHA誘導A549自噬熒光由圖2可見，120μmol/L硬脂酸、DHA分別作用穩(wěn)定感染RFP-GFP-LC3慢病毒的A549細胞24h，用激光掃描共聚焦顯微鏡觀察可見紅色熒光和綠色熒光。在自噬發(fā)生初期，LC3Ⅰ會酶解一段多肽，轉變成LC3Ⅱ，并引導RFP-GFP-LC3慢病毒聚集到自噬體上，在共聚焦顯微鏡下即可觀察到綠色、紅色熒光聚集點。隨著自噬的發(fā)生發(fā)展，，在自噬后期，pH值降低，綠色熒光變暗甚至淬滅，紅色熒光保持穩(wěn)定不變。由圖2所見，用共聚焦顯微鏡放大1890倍后，與空白對照組相比，硬脂酸、DHA處理組綠色?

MedJChinPLA,Vol.42,No.8,August1,20176712.3硬脂酸、DHA誘導A549自噬相關蛋白的表達在細胞發(fā)生自噬時，LC3Ⅰ向LC3Ⅱ轉化，LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的含量在一定程度上能反映細胞自噬的形成。120μmol/L硬脂酸、DHA分別誘導A549細胞12、24、36h后，Westernblotting檢測結果(圖3A)顯示，與空白對照組比較，硬脂酸處理組(圖3A)和DHA處理組(圖3B)在12、24、36h時點LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值均升高，p-mTOR(ser2448)蛋白表達無變化，mTOR(ser2481)磷酸化均受到抑制，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。在相同條件下，硬脂酸和DHA處理A549細胞后，細胞自噬相關蛋白表達變化趨勢一致。3討論目前已有大量文獻報道不飽和脂肪酸DHA有抗腫瘤的作用，攝入DHA能降低乳腺癌[5-7]、結腸癌[8]、前列腺癌和腎癌[9]的發(fā)病風險。但有關飽和脂肪酸及不飽和脂肪酸對肺癌細胞影響的差異報道較少，圖2硬脂酸和DHA作用于A549細胞產生的自噬熒光Fig.2TheautophagyfluorescenceimageofA549exposedtostearicacidandDHArespectivelyControlSolventcontrolStearicacidDHAGFPRFPOverlay圖3硬脂酸、DHA分別誘導A549自噬的相關蛋白變化Fig.3Changesintheexpressionofautophagy-relatedproteininA549cellsinducedbystearicacidandDHATheexpressionsofLC3Ⅰ,LC3Ⅱ,p-mTOR(ser2448)andp-mTOR(ser2481)inA549cellsexposedtostearicacid(A)orDHA(B)ataconcentrationof120μmol/Lfor12,24and36hours.(1)P<0.01comparedwiththecontrolgroup(n=3)LC3ⅠLC3Ⅱp-mTOR(ser2448)p-mTOR(ser2481)GAPDHL3CⅡL/3CⅠ1.51.00.50(1)(1)(1)p-mTRO(se2481)/GrADHP0.80.60.40.20(1)(1)(1)LC3ⅠLC3Ⅱp-mTOR(ser2448)p-mTOR(se
【作者單位】： 廣東醫(yī)科大學生物化學與分子生物學教研室;廣東醫(yī)科大學附屬醫(yī)院呼吸內科;
【基金】：國家自然科學基金(81273549) 廣東省科技計劃項目(2014A020212292)~~
【分類號】：R734.2

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