食管鱗狀細胞癌USP22和Ku80表達的基礎研究及相關臨床意義

發(fā)布時間：2019-10-23 08:29

【摘要】：研究目的:食管癌(Esophageal Carcinoma)是全世界最常見的惡性腫瘤之一。食管癌高發(fā)區(qū)集中在亞洲、非洲和拉丁美洲等發(fā)展中國家。我國是食管鱗癌(Esophageal Squamous Cell Carcinoma,ESCC)高發(fā)地區(qū),國外以食管腺癌為主。近年來,隨著食管癌多學科治療廣泛開展及應用,出現(xiàn)了基于食管鱗癌方面的免疫治療如PD-L1的隨機、平行、多中心3期臨床研究,食管癌診療水平逐步提高,但食管癌高復發(fā)及高轉(zhuǎn)移率,目前5年總生存率僅20%-30%。由于ESCC的腫瘤異質(zhì)性,淋巴結(jié)狀態(tài)、腫瘤分化、病理分期等傳統(tǒng)預后因素不能很好預測食管癌復發(fā)、轉(zhuǎn)移風險,探索腫瘤預后有效預測標志物亟待解決,以確定高復發(fā)和高轉(zhuǎn)移食管癌的不同亞組,指導個體化治療策略和優(yōu)化食管癌治療,以利提高食管癌患者的生存期。泛素特異性蛋白酶22(ubiquitin specific peptidase 22,USP22)在多種惡性腫瘤中高表達,與腫瘤復發(fā)及轉(zhuǎn)移密切相關。Ku80為DNA結(jié)合蛋白,與DNA末端及與DNA損傷雙鏈DNA斷裂(DSBs)相結(jié)合。Ku80與DSBs非同源末端結(jié)合(NHEJ)修復途徑密切相關,參與維持染色體端粒穩(wěn)定、細胞增殖、凋亡及信號轉(zhuǎn)導機制。本研究通過分析食管癌細胞株及癌組織USP22和Ku80蛋白表達狀態(tài),探討USP22與Ku80表達相關性并分析二者間相互調(diào)控對食管鱗癌發(fā)生發(fā)展的作用,評價USP22-Ku80表達模型作為ESCC患者診斷、預后及治療分子表型意義,為ESCC診療提供新思路。研究方法:1.USP22和Ku80在食管鱗癌細胞株中表達免疫熒光檢測ECA109食管癌細胞和Ku80(病毒轉(zhuǎn)染后)過表達ECA109細胞中USP22和Ku80蛋白表達狀態(tài)。Western blotting檢測食管鱗癌細胞系ECA109細胞和Ku80過表達ECA109細胞中USP22和Ku80蛋白表達水平。2.USP22和Ku80在食管鱗癌患者腫瘤組織中的表達回顧性研究2010年1月到2010年12月山東大學附屬省立醫(yī)院胸外科食管癌切除術有完整隨訪資料80例食管鱗癌患者。男性58例,女性22例。ESCC病理標本采用免疫組織化學染色方法(immunohistochemistry,IHC)檢測腫瘤組織USP22和Ku80蛋白表達。3.統(tǒng)計分析研究結(jié)果腫瘤患者蛋白表達水平與臨床病理學特征的關系用χ2檢驗、Western blotting所測兩組蛋白表達定量比較應用t檢驗,術后生存分析采用Kaplan-Meier和Log-rank檢驗分析,連續(xù)型變量采用均值±標準差描述,二分類變量采用率和百分比描述,采用卡方檢驗比較組間是否有統(tǒng)計學差異,單因素及多因素的變量分析采用COX回歸分析。研究結(jié)果:1.USP22和Ku80在食管癌細胞株中表達USP22和Ku80免疫陽性反應均呈紅色熒光,且定位于細胞核,overlap發(fā)現(xiàn)ECA109 Ku80過表達細胞中USP22蛋白表達高于食管癌細胞系ECA109細胞系中表達水平。ECA109 Ku80過表達細胞株中,Western blotting蛋白定量其Ku80過表達同時USP22蛋白表達明顯高于ECA109細胞USP22表達水平(P0.05)。2.USP22和Ku80在食管鱗癌患者癌組織中表達USP22蛋白和Ku80蛋白陽性表達產(chǎn)物表現(xiàn)為腫瘤細胞核內(nèi)棕黃色顆粒。80例ESCC患者分USP22陽性51例和陰性29例,Ku80陽性55例和陰性25例。Ku80與USP22均陽性表達為44例,兩者表達呈正相關(r=0.501,P0.001)。USP22高表達狀態(tài)與腫瘤分化、T分期(P=0.008,P=0.005)顯著相關,Ku80表達與腫瘤的分化、T分期顯著相關(P=0.010,P=0.008)。單因素分析ESCC患者預后因素,與腫瘤分化、T分期、N分期、臨床分期、USP22及Ku80陽性表達水平顯著相關(P=0.001,P=0.023,P=0.005,P=0.009,P0.001,P0.001)。COX多因素回歸分析:腫瘤分化、USP22陽性表達和Ku80陽性表達為患者總生存期(OS)獨立危險因素。ESCC 患者 1,3,5 年生存率為 88.75%,45.00%,20.65%;USP22 和 Ku80兩者同時表達1,3,5年生存率為72.71%,18.22%,0;Ku80陽性組生存率低于陰性組(Log-rank χ2=21.50,P0.001);USP22陽性組生存率低于陰性組(Log-rank χ2=18.65,P0.001);高分化組生存率高于中分化組和低分化組(Log-rank χ2=14.94,P0.001)。實驗結(jié)論:1.USP22和Ku80免疫陽性熒光反應均定位于細胞核,呈紅色熒光,熒光overlap結(jié)果和Western blotting蛋白定量發(fā)現(xiàn)ECA109 Ku80過表達食管癌細胞株USP22蛋白表達高于食管癌ECA109細胞株中表達水平,USP22和Ku80蛋白表達水平顯著相關。2.USP22和Ku80在人ESCC中高表達,且兩者表達水平均與腫瘤組織分化和T分期相關,二者高表達呈現(xiàn)相關性,表達存在相互調(diào)控。3.腫瘤分化程度,USP22和Ku80的表達水平均為ESCC患者術總生存期獨立危險因素,且兩者表達具有顯著相關性。4.USP22-Ku80表達模型有望成為ESCC診斷、預后的分子分型及新治療靶點。創(chuàng)新性及意義:1.ESCC細胞中首次USP22-Ku80表達的基礎研究,并發(fā)現(xiàn)其表達的相關性。2.ESCC患者檢測USP22-Ku80分子表達模型有重要臨床意義。
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