【摘要】：目的探討細(xì)胞周期蛋白依賴性蛋白激酶7(CDK7)特異性抑制劑THZ1對(duì)人乳腺癌細(xì)胞系MCF7、Sk Br3及Hs578T增殖及凋亡的作用及其分子機(jī)制。方法采用MTT、流式細(xì)胞術(shù)、Western blot等方法檢測(cè)細(xì)胞活力、細(xì)胞周期和凋亡的變化情況。結(jié)果 500 nmol/L THZ1處理細(xì)胞,顯微鏡觀察細(xì)胞數(shù)明顯減少;MTT實(shí)驗(yàn)表明THZ1呈劑量及時(shí)間依賴性抑制細(xì)胞的增殖;細(xì)胞饑餓培養(yǎng)24 h以同步化在G1/S期,THZ1繼續(xù)處理24 h,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)G2/M期細(xì)胞數(shù)增多。THZ1引起細(xì)胞G2/M期阻滯;THZ1呈劑量及時(shí)間依賴性誘導(dǎo)細(xì)胞早期凋亡與晚期凋亡;Western blot結(jié)果表明,THZ1可導(dǎo)致Cleaved-PARP上調(diào),Bcl-2的顯著下調(diào)和p65、GSK3蛋白磷酸化水平的明顯上調(diào)。結(jié)論 THZ1能抑制MCF7、Sk Br3及Hs578T細(xì)胞增殖,誘導(dǎo)其細(xì)胞周期阻滯及細(xì)胞早、晚期凋亡,可作為乳腺癌治療潛在的候選藥物。
【圖文】：

細(xì)胞經(jīng)THZ1處理不同時(shí)間，THZ1的促凋亡作用呈現(xiàn)出時(shí)間依賴性，并且在12h上調(diào)蛋白的作用即達(dá)到最大，見(jiàn)圖4B~4C。A:bright-fieldofMCF7andSkBr3cellswhichweretreatedwithDMSO(left)or200nmol/LTHZ1(middle)and500nmol/LTHZ1(right)for5days;B:CellsweretreatedwithincreasingconcentrationsofTHZ1(0~10000nmol/L)for24,48and72h,thenthecellviabilitywasassessedbyMTTmethod.WiththeincreasingdoseofTHZ1,theproliferationofcellswasobviouslyinhibited.Thedatarepresentedtheaverageofthreeindependentexperimentsresults圖1MTT法檢測(cè)不同濃度THZ1對(duì)乳腺癌細(xì)胞增殖的影響Figure1CellproliferationassessedbyMTTaftervariousconcentrationsofTHZ1treatment

·374·腫瘤防治研究2017年第44卷第6期CancerResPrevTreat,2017,Vol.44,No.6A:MCF7cellsweresynchronizedattheG1/Stransitionbystarved24h,andthentreatedwithindicatedTHZ1for24h.ThecellcycleswereanalyzedbyFCM;datawerepresentedasmeans±SDofthreeindependentexperiments;B,C:thehistogramofcorrespondingcellcycledistribution圖2流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)不同濃度THZ1處理后對(duì)細(xì)胞周期的影響Figurea2CellcycleassessedbyFCMaftervariousconcentrationsofTHZ1treatmentA:SkBr3andMCF7cellsweretreatedwithincreasingconcentrationsofTHZ1for48h,stainedwithannexinV-FITCandPI,andthenanalyzedbyflowcytometryforcellapoptosis;B:thehistogramofcorrespondingcelldistribution圖3流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)不同濃度THZ1處理后對(duì)細(xì)胞凋亡的影響Figure3CellapoptosisassessedbyFCMaftervariousconcentrationsofTHZ1treatment
【作者單位】： 中山大學(xué)藥學(xué)院微生物與生化藥學(xué)實(shí)驗(yàn)室;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(81472470) 廣東省自然科學(xué)基金(c140500000043)
【分類號(hào)】：R737.9

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本文編號(hào)：2549325