【摘要】：胰腺癌是目前死亡率位居第四的消化系統(tǒng)腫瘤,惡性程度高,預(yù)后極差。胰腺癌化療的一線藥物是吉西他濱,但大部分胰腺癌患者對吉西他濱存在內(nèi)在性及獲得性耐藥,治療效果不理想,因此胰腺癌耐藥機(jī)制的研究對于改善胰腺癌的治療現(xiàn)狀具有十分重要的意義。胰腺癌干細(xì)胞具有無限的自我更新能力和分化潛能,能夠在體內(nèi)外形成新的腫瘤,對放療和化療具有高度的抵抗性,因此胰腺癌干細(xì)胞的存在,可能導(dǎo)致了胰腺癌化療耐藥現(xiàn)象的產(chǎn)生。我們前期研究結(jié)果表明,CD147能夠調(diào)節(jié)胰腺癌細(xì)胞對吉西他濱和順鉑的藥物敏感性,還可以上調(diào)胰腺癌干細(xì)胞的比例和體內(nèi)外的成瘤能力。因此,CD147可能通過影響胰腺癌干細(xì)胞進(jìn)而促進(jìn)胰腺癌細(xì)胞的耐藥性。在第一部分實(shí)驗(yàn)中,我們的研究結(jié)果表明,吉西他濱處理胰腺癌細(xì)胞后,ALDH+胰腺癌干細(xì)胞比例、CD44+CD133+胰腺癌干細(xì)胞比例、CD44+CD24+細(xì)胞和CD44+ESA+細(xì)胞比例都明顯升高。我們使用較高濃度的吉西他濱連續(xù)處理胰腺癌細(xì)胞,篩選出胰腺癌細(xì)胞中的內(nèi)在耐藥細(xì)胞,內(nèi)在耐藥細(xì)胞中CD44+CD133+胰腺癌干細(xì)胞的比例較親本非耐藥細(xì)胞明顯升高,表明胰腺癌干細(xì)胞在胰腺癌耐藥性中發(fā)揮重要作用。此外,吉西他濱處理胰腺癌細(xì)胞后,胰腺癌細(xì)胞中線粒體的含量和活性氧的含量均明顯升高,提示胰腺癌細(xì)胞線粒體的功能增強(qiáng)。與活性氧含量較高的胰腺癌細(xì)胞相比,活性氧含量較低的胰腺癌細(xì)胞對吉西他濱較不敏感,因此胰腺癌細(xì)胞能否清除細(xì)胞中過量的活性氧,可能是胰腺癌細(xì)胞耐藥的關(guān)鍵;活性氧含量較低的癌干細(xì)胞亞群可能導(dǎo)致了胰腺癌細(xì)胞的化療耐藥。在第二部分實(shí)驗(yàn)中,我們的研究結(jié)果表明,吉西他濱處理胰腺癌細(xì)胞后,CD147表達(dá)顯著升高;同時,在胰腺癌內(nèi)在耐藥細(xì)胞中,CD147表達(dá)同樣顯著升高。與CD147低表達(dá)胰腺癌細(xì)胞相比,CD147高表達(dá)胰腺癌細(xì)胞對吉西他濱敏感性下降,表明CD147能夠促進(jìn)胰腺癌細(xì)胞對吉西他濱的耐藥性。此外,細(xì)胞表面CD147表達(dá)與胰腺癌干細(xì)胞比例正相關(guān),提示CD147分子在胰腺癌干細(xì)胞介導(dǎo)的耐藥性中發(fā)揮重要作用。上述結(jié)果表明,CD147分子在胰腺癌細(xì)胞的內(nèi)在耐藥中發(fā)揮重要作用。在穩(wěn)定干涉和誘導(dǎo)干涉CD147表達(dá)的胰腺癌細(xì)胞中,CD147表達(dá)水平的下降顯著抑制了胰腺癌細(xì)胞的成瘤能力和體內(nèi)胰腺癌細(xì)胞移植瘤的生長。進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,CD147分子表達(dá)于胰腺癌細(xì)胞線粒體中;干涉CD147分子后,胰腺癌細(xì)胞線粒體中CD147表達(dá)下降,體內(nèi)胰腺癌細(xì)胞移植瘤細(xì)胞中線粒體顯著含量下降。這些結(jié)果表明,CD147分子可能通過上調(diào)胰腺癌細(xì)胞線粒體的數(shù)量與功能,調(diào)節(jié)胰腺癌干細(xì)胞對吉西他濱的藥物敏感性。綜上所述,本研究結(jié)果表明,胰腺癌干細(xì)胞可能通過清除細(xì)胞中過量的活性氧導(dǎo)致了胰腺癌細(xì)胞的化療耐藥,而CD147分子可能通過影響胰腺癌細(xì)胞線粒體的功能,調(diào)節(jié)胰腺癌干細(xì)胞對吉西他濱的藥物敏感性。
【圖文】：

圖 1 胰腺癌的進(jìn)展模型[22]胰腺癌有四個主要的驅(qū)動基因，其中一個是致癌基因，三個是抑癌基因。KRAS基因編碼一個小 GTP 酶，介導(dǎo)生長因子受體下游的信號，KRAS 基因是最常見的突變致癌基因，超過 90%的腫瘤中出現(xiàn)了 KRAS 基因的體細(xì)胞突變[24]。CDKN2A 基因編碼一個重要細(xì)胞周期調(diào)控蛋白，CDKN2A 基因是最常見的突變抑癌基因，在超過90%的導(dǎo)管腺癌中喪失功能。TP53 基因編碼的蛋白在細(xì)胞應(yīng)激反應(yīng)中有重要作用，在多種腫瘤中發(fā)生突變，TP53 抑癌基因的體細(xì)胞突變在胰腺癌中也很常見。SMAD4抑癌基因介導(dǎo)轉(zhuǎn)化生長因子 β（transforming growth factor β，TGFβ）受體下游的信號，在大約 50%的腫瘤中失活。近年來，胰腺癌患者的全外顯子測序和全基因組測序?yàn)槲覀兲峁┝诵碌难芯渴侄巍３顺Ｒ姷乃膫�驅(qū)動基因，研究人員又發(fā)現(xiàn)了幾百個其他的基因突變[25]，但是區(qū)分驅(qū)動基因（促進(jìn)腫瘤發(fā)生的突變）和乘客基因（細(xì)胞重復(fù)分裂中積累的隨機(jī)突變）仍然是一大難題。盡管基因在腫瘤發(fā)生中的作用最終要取決于功能實(shí)驗(yàn)的驗(yàn)證，

圖 2 胰腺癌治療的示意圖[23]與其他治療方式相比，手術(shù)切除是目前唯一能夠顯著延長病人生存期的治療方式。沒有發(fā)生遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移的胰腺癌，根據(jù)局部擴(kuò)張的程度不同可以分成三類：可以切除的、臨界可切除的和局部晚期的。這三類的胰腺癌之間的界限并不是絕對的，因?yàn)槟懿荒苓M(jìn)行切除取決于外科技術(shù)。為了獲得更好地局部控制并最終提高患者的生存率，美國、歐洲和日本很多臨床研究中采用了新輔助放化療。手術(shù)切除對早期復(fù)發(fā)的患者無能為力，對于沒有侵襲性并發(fā)癥或者潛在轉(zhuǎn)移的患者，新輔助治療是一個更好的選擇。在手術(shù)前進(jìn)行化療，足量化療藥物的輸送能得到更好的保障。切除后的腫瘤床難以進(jìn)行藥物輸送，，對放療不敏感，因此術(shù)前治療可能比術(shù)后治療更有效[28]。對于臨界可切除的胰腺癌患者，有效的新輔助治療后 R0 切除的可能性更高，手術(shù)切除后患者的生存率更高。對于臨界可切除或者局部晚期的胰腺癌患者是否應(yīng)該推薦新輔助治療，目前仍然缺少隨機(jī)對照試驗(yàn)或者薈萃分析的有力證據(jù)�？赡苡捎趽�(dān)心失去手術(shù)切除的機(jī)會，過去大部分的臨床試驗(yàn)都沒有招募到足夠人數(shù)的患者
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R735.9


本文編號：2547023