發(fā)布時間：2019-10-04 03:23

【摘要】：肝癌是目前臨床上最常見的惡性腫瘤之一,其發(fā)病率逐年增高,與之而來的是肝癌的死亡率也在不斷升高。2012年全球因肝癌導致的死亡人數(shù)達到745000人,是惡性腫瘤致死的重要原因。我國的肝癌死亡率高居各種腫瘤的第二位。這主要是由于肝癌起病隱匿,發(fā)現(xiàn)時已至中晚期,且治療肝癌的主要方法仍為手術治療、局部消融、肝動脈栓塞化療、放療、系統(tǒng)化療以及傳統(tǒng)中藥治療等,療效不盡如人意。因此迫切需要闡明肝癌的發(fā)病機制,挖掘有價值的早期診斷以及治療的生物靶標。CDHR2屬于鈣粘蛋白超家族中原鈣粘蛋白超家族中的一員,由于其主要表達于人的肝、腎、以及結直腸等組織器官中,最初被命名為PCDH LKC(原鈣粘蛋白LKC)。CDHR2蛋白由1310個氨基酸組成,在結構上包括7個鈣粘蛋白重復結構域,1個跨膜區(qū)和PDZ結合域。原鈣粘蛋白是一種帶有親同種抗原結合活性的跨膜蛋白,它們主要由幾個到110個胞外段鈣粘蛋白重復序列組成的。以往的研究表明原鈣粘蛋白的表達水平與細胞增殖緊密相關。由基因突變引起的原鈣粘蛋白表達水平的下調或者其功能的改變可導致腫瘤的發(fā)生,促進腫瘤的侵襲和轉移,表明原鈣粘蛋白與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關。CDHR2作為原鈣粘蛋白超家族中的一員,也具有相似的特性。研究發(fā)現(xiàn),在結直腸癌細胞中CDHR2通過改變β-catenin的分布來介導細胞接觸抑制的發(fā)生,從而抑制腫瘤細胞生長和增殖,表明CDHR2在結直腸癌的發(fā)生發(fā)展中具有重要作用。而CDHR2在肝癌中表達及作用還未見相關報道。我們在前期研究中,通過基因芯片技術篩選發(fā)現(xiàn),與癌旁組織相比,CDHR2在肝癌組織中的表達顯著下調。本課題中我們分析了CDHR2在肝癌中的表達和調控機制,探討CDHR2在肝癌細胞中的生物學功能及其作用的分子機制。首先通過半定量PCR的方法和Western-blot的方法檢測CDHR2在多種肝癌細胞中的mRNA和蛋白的表達水平。構建攜帶CDHR2的慢病毒表達系統(tǒng),感染CDHR2低表達或缺失的肝癌細胞,通過細胞倍增、EDU的摻入、平板克隆、以及平板軟瓊脂克隆形成等實驗,分析CDHR2的過表達對肝癌細胞的增殖能力、克隆形成能力和非錨著依賴性生長能力的影響。通過裸鼠體內移植瘤模型檢測CDHR2對肝癌細胞體內成瘤能力的影響。通過高通量蛋白芯片檢測技術探討肝癌細胞中CDHR2的表達對細胞信號通路的改變情況,并進行了初步的驗證。通過甲基化水平的檢測分析肝癌細胞中CDHR2的低表達是否與表觀遺傳學調控有關。設計CDHR2特異性多肽制備了兔多克隆抗體用于Western blot和免疫組化實驗。收集臨床肝癌組織標本,進行半定量PCR和免疫組化實驗,檢測肝癌組織標本中CDHR2的表達情況。我們的研究結果發(fā)現(xiàn)CDHR2在多種肝癌細胞中表達下調或者缺失。在低表達CDHR2的肝癌細胞系smmc-7721和PLC/PRF/5中,過表達CDHR2可以抑制肝癌細胞的增殖、克隆形成和非錨著依賴性生長的能力;且具有抑制肝癌細胞體內成瘤能力的作用。在機制研究中我們發(fā)現(xiàn)CDHR2可抑制Akt的磷酸化,下調COX-2的表達,從而發(fā)揮其抑制肝癌細胞增殖的作用;通過轉染激活型Akt,可逆轉CDHR2下調COX-2的表達及其抑制肝癌細胞增殖的作用。表觀遺傳學研究發(fā)現(xiàn)肝癌細胞中CDHR2的低表達部分與其啟動子區(qū)CpG島的甲基化有關。在臨床肝癌組織標本檢測中發(fā)現(xiàn)CDHR2的mRNA和蛋白水平在肝癌組織中均呈現(xiàn)一個普遍表達下調或缺失的狀態(tài)。我們的結果首次闡明了CDHR2在肝癌中呈表達下調或缺失,過表達CDHR2可通過Akt信號通路介導肝癌細胞的增殖抑制,從而抑制了肝癌細胞的生長,揭示了一種新的肝癌發(fā)生發(fā)展的調控機制。
【圖文】：

體重。根據(jù)公式 V=ab2/2 來計算腫瘤的變化。其中 a 為長的直徑，b 為短的直徑。（五）統(tǒng)計學的分析及檢驗本實驗所有的實驗結果均采用軟件 SPSS19.0 進行統(tǒng)計學分析。對照組和實驗組均采用 t 檢驗對其均數(shù)進行比較。三、實驗結果（一）CDHR2 在肝癌細胞系中的表達本實驗中，我們對 7 種肝癌細胞中的 CDHR2 的表達情況進行半定量 RT-PCR 的檢測。結果顯示（圖 1-1），在所檢測的 7 種肝癌細胞系中，smmc-7721、HepG3B、PLC/PRF/5、Huh7、HCC-LM3 細胞中的 CDHR2 含量缺失或明顯減少，，而 HepG2 細胞呈高表達的狀態(tài)，提示 CDHR2 基因在肝癌細胞中呈普遍下調。

原鈣粘蛋白 CDHR2 在肝癌中的表達及其功能的隨后，我們提取 7 種肝癌細胞的總蛋白進行 Western blot 檢測，發(fā)現(xiàn)與半定-PCR 檢測的結果基本一致，smmc-7721、PLC/PRF/5、Huh7、HCC-LM3HCC-97L 細胞中 CDHR2 的蛋白表達下調，而 Hep3B 表達缺失，HepG2 中呈高（圖 1-2）。
【學位授予單位】：第二軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R735.7

【相似文獻】

相關期刊論文 前10條

1 遲寧;喝咖啡可降低肝癌的發(fā)病率[J];日本醫(yī)學介紹;2005年05期

2 吳孟超;;肝癌外科治療的近期進展[J];中國普外基礎與臨床雜志;2006年02期

3 張志敏;;肝癌會遺傳嗎?[J];肝博士;2006年03期

4 徐連根;周晶;雷偉;沈志祥;;瘦素及其受體在肝癌組織中的表達及意義[J];胃腸病學和肝病學雜志;2006年05期

5 魏麗珍;李勝棉;張楠;溫登瑰;周燁;王士杰;;688例肝癌患者發(fā)病特點及診療狀況分析[J];肝臟;2010年02期

6 ;我國科研人員發(fā)現(xiàn)促進肝癌生長和轉移的相關基因[J];臨床薈萃;2010年10期

7 吳生;;盤點誘發(fā)肝癌的7大元兇[J];肝博士;2012年01期

8 鄧慶華;一家四例肝癌報道[J];中國廠礦醫(yī)學;1995年06期

9 王定珠;;觥籌交錯 過度疲勞 肝癌乘機而入[J];健康博覽;2005年11期

10 笑山,吳蓉蓉;喝咖啡可以減少肝癌發(fā)生率[J];健康之路;2005年04期

相關會議論文 前10條

1 俞順章;穆麗娜;;飲水中藻類毒素與肝癌關系和控制的研究(摘要)[A];全國腫瘤流行病學和腫瘤病因學學術會議論文集[C];2007年

2 楊秉輝;;肝癌預防的新話題-非酒精性脂肪性肝病與肝癌[A];第十二屆全國肝癌學術會議論文匯編[C];2009年

3 丁光偉;楊玉秀;徐秋霞;徐存拴;;肝癌多基因表達異常初步研究[A];第五屆全國肝臟疾病臨床暨中華肝臟病雜志成立十周年學術會議論文匯編[C];2006年

4 吳孟超;;肝癌外科治療的近期進展[A];第三屆全國重型肝病及人工肝血液凈化學術年會論文集（上冊）[C];2007年

5 劉耕陶;孫華北;方亞南;;肝癌發(fā)生的化學預防[A];第十次中國生物物理學術大會論文摘要集[C];2006年

6 阮秀花;田蔥;張效本;張喜梅;;肝癌患者乙型肝炎病毒感染血清流行病學分析[A];第五屆全國肝臟疾病臨床暨中華肝臟病雜志成立十周年學術會議論文匯編[C];2006年

7 阮秀花;田蔥;張效本;張喜梅;;肝癌患者乙型肝炎病毒感染血清流行病學分析[A];第五屆全國肝臟疾病臨床暨中華肝臟病雜志成立十周年學術會議論文匯編[C];2006年

8 呂巖;韓學鋒;;肝癌患者需求的評估[A];中華醫(yī)學會醫(yī)學工程學分會第八次學術年會暨《醫(yī)療設備信息》創(chuàng)刊20周年慶祝會論文集[C];2006年

9 孫華;魏懷玲;劉耕陶;;雙環(huán)醇對化學毒物促發(fā)肝癌的防治作用及作用機制研究[A];2009醫(yī)學前沿論壇暨第十一屆全國腫瘤藥理與化療學術會議論文集[C];2009年

10 謝靜媛;戴煒;涂愛民;趙文高;符花;胡應龍;;深圳地區(qū)53例肝癌發(fā)生的相關因素探討[A];全國第2屆中西醫(yī)結合傳染病學術會議暨國家中醫(yī)藥管理局第1屆傳染病協(xié)作組會議論文匯編[C];2008年

相關重要報紙文章 前10條

1 湖北宜昌 胡獻國;吸煙與肝癌[N];上海中醫(yī)藥報;2013年

2 四川成都 孫清廉;遠離肝癌 謹防四大危險因素[N];上海中醫(yī)藥報;2013年

3 特約撰稿 北京朝陽醫(yī)院京西院區(qū)肝膽外科主任 孫文兵;警惕肝癌的過度治療[N];醫(yī)藥導報;2007年

4 健康時報特約記者 孫理;三招不得肝癌[N];健康時報;2008年

5 葉建平;專家提醒肝癌患者保護生命 重在“三早”防治[N];中國中醫(yī)藥報;2008年

6 通訊員 韋夏 本報記者 鄧宏鷹 鐘少鴻;不良飲食習慣易誘發(fā)肝癌[N];中國食品報;2009年

7 記者 顧泳;我國肝癌患者占全球55%[N];解放日報;2010年

8 解放軍302醫(yī)院 劉士敬;四成肝癌酒精泡出來的[N];健康時報;2010年

9 記者 顏維琦 曹繼軍;我科學家揭示肝癌發(fā)生早期分子機制[N];光明日報;2012年

10 記者 胡德榮;肝癌發(fā)生早期階段分子機制被揭示[N];健康報;2012年

相關博士學位論文 前10條

1 陳放;TOPK蛋白和肝癌發(fā)生以及相關調控機制的研究[D];復旦大學;2011年

2 張怡安;中樞神經(jīng)特異性RNA結合蛋白NOVA1在肝癌中的表達及其促進腫瘤發(fā)展的潛在分子機制探究[D];復旦大學;2014年

3 殷杰;E3泛素連接酶Prp19對肝癌侵襲的影響及其機制研究[D];復旦大學;2014年

4 周宇紅;分化抑制因子ID1在調控化療誘導的肝癌細胞“干性”改變中的作用研究[D];復旦大學;2014年

5 王盛;FOXA1基因變異和調控異常促

本文編號：2545717