發(fā)布時(shí)間：2019-09-23 18:10

【摘要】：研究背景:全球癌癥發(fā)病形勢嚴(yán)峻,癌癥發(fā)病率與死亡率呈持續(xù)上升趨勢,其中,約一半的新增肝癌病例發(fā)生在中國,嚴(yán)重危害人類的生命健康。臨床上對肝癌尚缺乏有效的早期診斷及治療手段,預(yù)后很差。前列腺素E2(Prostaglandin E2,PGE2)是一種炎性介質(zhì),對腫瘤細(xì)胞的生長與侵襲能力有顯著的促進(jìn)作用。在肝細(xì)胞癌細(xì)胞中,PGE2與細(xì)胞膜上的四種EPR(E prostanoid receptor)結(jié)合,分別為EP1R、EP2R、EP3R和EP4R,從不同的層面影響著肝細(xì)胞癌細(xì)胞的生物學(xué)性狀。本實(shí)驗(yàn)室前期研究工作發(fā)現(xiàn)肝細(xì)胞肝癌Huh-7細(xì)胞中EP3受體剪接體亞型的類型為EP3-4、EP3-5、EP3-6和EP3-7四種,但對于這四種受體亞型對肝細(xì)胞癌細(xì)胞增殖和侵襲能力的作用還不清楚。本課題在此工作基礎(chǔ)上,進(jìn)一步分析EP3-4、EP3-5、EP3-6和EP3-7四種受體對肝細(xì)胞肝癌細(xì)胞Huh-7增殖和侵襲的作用。研究目的:探討在肝細(xì)胞肝癌Huh-7細(xì)胞中前列腺素E2 EP3各受體亞型對腫瘤細(xì)胞生長與侵襲的作用。研究方法:1、常規(guī)培養(yǎng)人肝細(xì)胞肝癌Huh-7細(xì)胞。2、Huh-7細(xì)胞EP3受體亞型質(zhì)粒瞬時(shí)轉(zhuǎn)染。3、應(yīng)用RT-PCR及western blot實(shí)驗(yàn)檢測轉(zhuǎn)染細(xì)胞EP3受體各亞型的mRNA及蛋白水平。4、運(yùn)用WST-8細(xì)胞增殖測定試劑檢測轉(zhuǎn)染后Huh-7細(xì)胞的增殖情況。5、應(yīng)用劃痕實(shí)驗(yàn)檢測轉(zhuǎn)染后Huh-7細(xì)胞的侵襲能力。6、應(yīng)用western blot實(shí)驗(yàn)檢測轉(zhuǎn)染細(xì)胞內(nèi)Erk蛋白磷酸化水平的變化。研究結(jié)果:1、轉(zhuǎn)染后Huh-7細(xì)胞EP3受體表達(dá)水平明顯增高。2、經(jīng)10μmol/L EP3受體激動(dòng)劑sulprostone處理24h后,過表達(dá)EP3-4、EP3-5和EP3-7受體亞型的細(xì)胞增殖率分別達(dá)到:126.7%、124.0%和123.8%。EP3-6受體亞型過表達(dá)細(xì)胞的增殖率與pc-DNA轉(zhuǎn)染對照組相比差異無顯著性。3、經(jīng)10μmol/L sulprostone處理24h后,過表達(dá)EP3-4、EP3-5和EP3-7受體亞型細(xì)胞的侵襲性分別增加至:135.8%、123.5%和128.7%。EP3-6受體亞型高表達(dá)細(xì)胞的侵襲率與pc-DNA轉(zhuǎn)染對照組相比無顯著性差異。4、與pc-DNA轉(zhuǎn)染對照組相比,EP3-4、EP3-5和EP3-7受體轉(zhuǎn)染細(xì)胞內(nèi)Erk磷酸化水平分別上調(diào)了:54.8%、33.4%、44.3%。EP3-6受體過表達(dá)細(xì)胞胞內(nèi)Erk磷酸化水平改變不明顯。結(jié)論:Huh-7肝癌細(xì)胞中,EP3-4、EP3-5及EP3-7這三種受體亞型對細(xì)胞的生長及侵襲有顯著地促進(jìn)作用,而EP3-6亞型則無明顯的促進(jìn)作用,表明EP受體間可能存在負(fù)反饋調(diào)控性的平衡機(jī)制。EP3受體促進(jìn)肝癌細(xì)胞生長和侵襲的作用與Erk激活的現(xiàn)象一致。
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R735.7

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本文編號：2540403