【摘要】：目的:探討miR-let-7d對肺癌細胞核受體過氧化物酶體增殖物激活受體γ(PPARγ)的調(diào)控及對肺癌細胞增殖和侵襲的影響。方法:用生物信息學分析與PPARγ相關的microRNA,通過質(zhì)粒報告基因驗證miR-let-7d的作用靶點;利用Western blot法篩選出PPARγ表達水平低的肺癌細胞株;通過雙螢光素酶標記和Western blot法驗證miR-let-7d對肺癌細胞中PPARγ表達的調(diào)控作用;通過集落形成實驗檢測miR-let-7d對肺癌細胞增殖能力的調(diào)控作用;通過Transwell侵襲實驗檢測miR-let-7d對肺癌細胞侵襲能力的作用。結(jié)果:生物信息學的分析結(jié)果證明miR-let-7d可以調(diào)控核受體PPARγ的蛋白表達;在核受體PPARγ的3’UTR包含2個功能性的miR-let-7d結(jié)合位點;PPARγ是miR-let-7d的直接靶點,miR-let-7d可在蛋白和mRNA水平直接調(diào)控PPARγ的表達;miR-let-7d inhibitor通過升高PPARγ的表達促進肺癌細胞的增殖和侵襲能力。結(jié)論:miR-let-7d能夠通過靶向增加具有抑癌作用的核受體PPARγ的表達水平,抑制肺癌細胞的增殖和侵襲能力。
【圖文】：

miＲanda［16］)對其進行了分析預測。分析結(jié)果發(fā)現(xiàn)以下的4條mircoＲNA:hsa-miＲ-125b、hsa-miＲ-37、hsa-miＲ-135a和hsa-miＲ-let-7d在3種軟件的評分系統(tǒng)中均獲得了較高分值，極具與PPAＲγ3’-UTＲ發(fā)生功能性結(jié)合的潛力，因而用于后續(xù)研究。運用Westernblot技術檢測4條microＲNA(hsa-miＲ-125b、hsa-miＲ-37、hsa-miＲ-135a和hsa-miＲ-let-7d)對PPAＲγ表達水平的影響。將以上microＲNAmimic轉(zhuǎn)染肺癌細胞株A549，，結(jié)果顯示只有hsa-miＲ-let-7d能夠顯著抑制PPAＲγ蛋白的表達，見圖1。Figure1．TheeffectsofmicroＲNAmimictransfectionontheproteinexpressionofPPAＲγintheA549cells．Mean±SD．n=10．圖1不同micromＲNAmimic轉(zhuǎn)染對A549細胞PPAＲγ蛋白表達的影響2核受體PPAＲγ的3’-UTＲ包含2個功能性miＲ-let-7d結(jié)合位點生物信息學的分析結(jié)果顯示，在PPAＲγ的3’-UTＲ有2個潛在的miＲ-let-7d結(jié)合位點，暫將其命名為位點A和位點B。使用PPAＲγ質(zhì)粒報告基因活性分析進一步鑒定這2個結(jié)合位點的功能，顯示miＲ-let-7d能顯著降低含野生型全長PPAＲγ3’-UTＲ報告基因的轉(zhuǎn)錄活性，而其中任意一個識別位點的缺失都在一定程度上削弱miＲ-let-7d對報告基因活性的抑制作用，結(jié)果如圖2所示。當位點B缺失時，miＲ-let-7d對報告基因的抑制率從57%降低到35%左右;當位點A缺失時，抑制率從57%下降到18%;如果2個位點都缺失，miＲ-let-7d不再對報告基因的活性產(chǎn)生任何影響。這提示3’-UTＲ同時擁有2個功能性的miＲ-let-7d識別位點，雖然兩者與miＲ-let-7d的親和力具有差別(位點A在miＲ-let-7d介導的報告基因活性抑制中起著主要作用)，但兩者能以效應疊加的方式共同介導miＲ-let-7d對含PPAＲγ3’-UTＲ的報告基因活性的抑制。Figure2．Ｒ

Figure3．TheexpressionofPPAＲγindifferentlungcancercelllines．Mean±SD．n=10．圖3不同肺癌細胞株中PPAＲγ的表達情況Figure4．TheregulatoryeffectsofmiＲ-let-7donPPAＲγexpressioninthelungcancercells．A:miＲ-let-7dmimicdown-regulatedthemＲNAandproteinexpressionofPPAＲγ;B:miＲ-let-7dinhibitorup-regulatedthemＲNAandproteinexpressionofPPAＲγ;C:dualluciferase-labeledPPAＲγwasadirecttargetofmiＲ-let-7d;D:miＲ-let-7ddidnotregulatetheexpressionlevelofPPAＲα．Mean±SD．n=10．*P＜0.05vsNC．圖4miＲ-let-7d對肺癌細胞中PPAＲγ表達的調(diào)控作用Figure5．KnockdownofmiＲ-let-7dexpressioninhibitedlungcancercellproliferation(×40)．Mean±SD．n=10．*P＜0.05vsNC．圖5敲減miＲ-let-7d的表達可以抑制肺癌細胞的增殖·702·
【作者單位】： 新鄉(xiāng)醫(yī)學院基礎醫(yī)學院病理學教研室;新鄉(xiāng)醫(yī)學院基礎醫(yī)學院形態(tài)學實驗室;新鄉(xiāng)醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院病理科;
【基金】：新鄉(xiāng)醫(yī)學院博士科研啟動基金資助項目(No.505079) 新鄉(xiāng)醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院博士科研啟動基金資助項目(No.xyyfy2015BS-006)
【分類號】：R734.2

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本文編號：2539900