【摘要】：目的:探討WISP2基因過表達(dá)對(duì)食管癌細(xì)胞生物學(xué)功能的影響及可能涉及的分子機(jī)制。方法:分別構(gòu)建WISP2基因過表達(dá)質(zhì)粒和含空質(zhì)粒載體的陰性對(duì)照組,使用Lpofectamin2000瞬時(shí)轉(zhuǎn)染低分化食管癌細(xì)胞E109,利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(Quantitative real-time PCR,q PCR)和蛋白印記(Western blot,WB)技術(shù)在基因及蛋白水平檢測WISP2在E109-WISP2組(轉(zhuǎn)染組)、E109-空質(zhì)粒組(轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒組)和E109-空白組(未轉(zhuǎn)染W(wǎng)ISP2質(zhì)粒組)的表達(dá);應(yīng)用CCK8檢測WISP2基因過表達(dá)前后細(xì)胞的增殖能力變化、Transwell小室和Matrigel基質(zhì)膠檢測WISP2基因過表達(dá)前后細(xì)胞侵襲、遷移能力的變化;q PCR、Western blot技術(shù)檢測各組細(xì)胞ERK-1/2、Slug和E-cadherin的RNA和蛋白的表達(dá)水平的變化。結(jié)果:瞬時(shí)轉(zhuǎn)染E109-WISP2組中WISP2基因m RNA表達(dá)(66.07±12.34)與E109-空質(zhì)粒組(1.17±0.09)和E109-空白組相比明顯升高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),而E109-空質(zhì)粒組和E109-空白組WISP2基因表達(dá)無明顯差異(P0.05);E109-WISP2組中WISP2蛋白表達(dá)水平與E109-空質(zhì)粒組及E109-空白組相比明顯升高,和兩對(duì)照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。CCK8法檢測結(jié)果顯示E109-WISP2組(0.225±0.003)與E109-空質(zhì)粒組(0.26±0.003)及E109-空白組(0.26±0.001)相比增殖能力明顯降低,和兩對(duì)照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),而E109-空質(zhì)粒組和E109-空白組無明顯差異(P0.05);Transwell小室侵襲實(shí)驗(yàn)顯示W(wǎng)ISP2過表達(dá)后食管癌細(xì)胞穿透Matrigel基質(zhì)膠的細(xì)胞數(shù)(26.60±4.81),顯著低于E109-空質(zhì)粒組(53.20±4.32)及E109-空白組(56.00±4.90),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);而E109-空質(zhì)粒組和E109-空白組相比無明顯差異(P0.05)。Transwell小室遷移實(shí)驗(yàn)顯示W(wǎng)ISP2過表達(dá)后癌細(xì)胞通過聚碳酸酯微孔濾膜的細(xì)胞數(shù)(55.20±4.52),顯著低于E109-空質(zhì)粒組(95.5±4.79)及E109-空白組(99.60±5.78),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);而E109-空質(zhì)粒組和E109-空白組相比無明顯差異(P0.05)。q PCR及Western blot檢測結(jié)果顯示E109-WISP2組細(xì)胞與E109-空質(zhì)粒組和E109-空白組相比,ERK-1/2、Slug表達(dá)降低,而E-cadherin表達(dá)升高。結(jié)論:WISP2基因的過表達(dá)能明顯降低食管癌細(xì)胞的增殖、侵襲及遷移能力;WISP2基因過表達(dá)能降低ERK-1/2、Slug的表達(dá)及提高E-cadherin的表達(dá);WISP2基因可能通過調(diào)節(jié)ERK1/2的表達(dá)抑制食管癌細(xì)胞的增殖能力;通過調(diào)節(jié)Slug和E-cadherin的表達(dá)抑制食管癌細(xì)胞的侵襲和遷移能力。
【學(xué)位授予單位】：蚌埠醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R735.1

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本文編號(hào)：2539083