發(fā)布時間：2019-09-19 08:25

【摘要】：目的：本實驗旨在研究G蛋白偶聯(lián)雌激素受體1(G protein-coupled estrogen receptor1, GPER1)在雌激素促進(jìn)甲狀腺乳頭狀癌(Papillary thyroid carcinoma, PTC)增生和侵襲轉(zhuǎn)移中的作用及其下游信號通路,探討雌激素通過GPER1介導(dǎo)促進(jìn)PTC增殖和侵襲轉(zhuǎn)移的分子機制。方法：采用免疫組織化學(xué)SP法檢測68例PTC患者組織中GPER1的表達(dá)及其與臨床病理指針的關(guān)系,同時檢測PTC組織中EGFR及CXCR1的表達(dá),研究其三者表達(dá)的相關(guān)性。Western blot和RT-PCR方法檢測PTC細(xì)胞株BCPAP和K-1細(xì)胞中GPERl的表達(dá)；分別用E2、ER抑制劑ICI182780處理甲狀腺乳頭狀癌細(xì)胞,MTT檢測其對細(xì)胞增殖的影響；流式細(xì)胞術(shù)檢測各組細(xì)胞周期相分布；Transwell侵襲轉(zhuǎn)移實驗檢測細(xì)胞侵襲遷移能力。分別用E2、GPER1激動劑G1及E2+GPER1抑制劑G15處理K-1細(xì)胞,Western blot檢測ERK1/2、AKT磷酸化水平以及NF-κB的核轉(zhuǎn)位ELISA方法檢測IL-8的分泌水平。結(jié)果：在68例PTC組織中,GPER1及EGFR、CXCR1的表達(dá)陽性率分別為76.5%、66.2%、64.7%,明顯高于結(jié)節(jié)性甲狀腺腫組(P0.01)；三者在PTC中的表達(dá)與患者頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)(P0.05),與其他臨床病理特征(年齡、性別、腫瘤大小及TNM分期)則無相關(guān)性(P0.05)。在PTC及PTC淋巴轉(zhuǎn)移癌組織中,GPER1與EGFR的表達(dá)呈顯著正相關(guān)(rs=0.262, P=0.031; rs=0.542, P=0.002)、GPER1與CXCR1的表達(dá)也呈顯著正相關(guān)(rs=0.276, P=0.025; rs=0.483,P=0.006)。PTC細(xì)胞株BCPAP同時表達(dá)ERa和GPER1,而K-1幾乎不表達(dá)ERa,僅表達(dá)GPER1。設(shè)不同濃度E2(0、10-7mol/L、10-8mol/L、10-9mol/L)處理BCPAP細(xì)胞24h, MTT法檢測各組細(xì)胞增殖率分別為0、(13.5±1.5)%、(20.6±1.9)%、(11.3±1.2)%(P0.05)；用10-8mol/L的E2分別處理不同時間(0、12h、24h),各組細(xì)胞增殖率分別為0、(12.0±1.4)%、(20.6±1.9)%(P0.05)。E2和E2+ICI182780(10μmol/L)處理K-1細(xì)胞24h,與對照組相比,細(xì)胞增殖率分別為(19.7±0.9)%、(18.4±1.6)%(P0.05)；G1期細(xì)胞比例減少,S/G2期細(xì)胞比例增加；侵襲與遷移細(xì)胞數(shù)均增加(P0.05)。用E2處理K-1不同時間(0、5min、10min、15min、 30min), ERK1/2、AKT磷酸化水平在5min開始增高,10-15min最高；10-8 mol/L的E2處理K-1不同時間(0、1h、2h、4h、8h),1h時發(fā)生NF-κB核轉(zhuǎn)位,4h最為明顯；用E2、G1(10 nmol/L)及E2+G15(100nmol/L)分別處理K-1細(xì)胞不同時間,結(jié)果顯示G15可以抑制E2促進(jìn)K-1細(xì)胞激活ERK1/2、Akt磷酸化、NF-κB的核轉(zhuǎn)位以及分泌IL-8。結(jié)論：在PTC組織中GPER1及EGFR、CXCR1的過表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān),且呈正相關(guān)性。K-1細(xì)胞為ERa陰性、GPER1陽性的PTC細(xì)胞株,E2可誘導(dǎo)其增殖及侵襲轉(zhuǎn)移,并通過GPER1激活ERK1/2、AKT磷酸化及NF-κB的核轉(zhuǎn)位,表明GPER1能夠介導(dǎo)E2促進(jìn)PTC細(xì)胞增殖和侵襲轉(zhuǎn)移。
【圖文】：

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本文編號：2537996