發(fā)布時間：2019-09-17 13:15

【摘要】：目的:細胞角蛋白(Keratin,KRT),是廣泛存在于上皮細胞中間絲中的結構蛋白,參與固定、維護細胞及細胞核形態(tài),分為多種型別。本研究檢測分析KRT8在胃癌組織、癌旁組織及5種胃癌細胞株中的表達差異,探討其對胃癌生物學表型的影響及在胃癌發(fā)展過程中的作用機制。方法:1.運用公共數(shù)據(jù)庫預測KRT8在胃腫瘤患者中的表達量,采用qRT-PCR分別檢測50例胃癌及其癌旁組織中KRT8的mRNA水平的表達豐度。2.收集70例胃癌組織標本,運用免疫組織化學染色技術檢測KRT8蛋白在其中的表達差異,找出KRT8的表達與胃癌臨床病理因素及預后關系。3.應用Western blot技術分析5種胃癌細胞系中KRT8的蛋白表達差異。采用基因過表達和基因干擾技術分別過表達和沉默KRT8并驗證其效率。通過Tanswell遷移實驗分別評估胃癌細胞在過表達組、沉默組中遷移能力的變化。4.采用Western blot檢測細胞遷移、EMT相關蛋白變化及TGF-β通路的變化。結果:1.QRT-PCR結果顯示相對于正常組織中KRT8的mRNA表達量在胃癌組織中表達增高(68%,34/50),與腫瘤公共數(shù)據(jù)庫預測結果一致。2.免疫組化結果顯示KRT8的胃癌組織中的表達與腫瘤的侵襲深度(p=0.002)和臨床分期(p=0.025)相關,與年齡、性別、瘤體直徑、分化程度無關。3.生存曲線分析結果揭示KRT8表達與胃癌患者的預后關聯(lián),Cox’s比例風險模型結果說明胃癌患者中高表達KRT8是其差預后的診斷指標。4.胃癌細胞系AGS中沉默KRT8的表達,能顯著抑制細胞遷移和EMT的產(chǎn)生;在細胞系HGC-27中過表達KRT8促進細胞遷移和EMT的發(fā)生。5.KRT8可能通過TGFβ/smad信號通路調(diào)節(jié)胃癌細胞的EMT和轉移。結論:KRT8在胃癌進展過程中具有重要意義,可能通過誘導胃癌細胞發(fā)生EMT而促進胃癌的轉移,有望成為胃癌轉移以及患者預后評價的一個新的分子標志。
【學位授予單位】：江蘇大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R735.2

【參考文獻】

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本文編號：2536878