【摘要】：目的1.研究上游元件結(jié)合蛋白-1(far upstream element binding protein 1,FBP1)在我國B細(xì)胞非霍奇金淋巴瘤(Non-Hodgkin’s lymphomas,NHL)中的表達(dá)情況,在整體水平明確FBP1異常表達(dá)與B細(xì)胞NHL發(fā)生發(fā)展的關(guān)系。2.研究FBP1表達(dá)在B細(xì)胞來源的NHL細(xì)胞株Daudi和OCI-LY8細(xì)胞增殖、細(xì)胞周期調(diào)控以及細(xì)胞粘附介導(dǎo)的耐藥(cell adhesion mediated drug resistance,CAM-DR)過程中作用,在分子水平探討FBP1表達(dá)參與調(diào)控NHL細(xì)胞生物學(xué)行為的分子機(jī)制。方法1.在組織學(xué)水平,采用免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測(cè)80例不同病理分型的B細(xì)胞NHL組織和19例反應(yīng)性增生(recative lymphadenopathy,RL)淋巴組織石蠟切片中FBP1的表達(dá)情況,并結(jié)合B細(xì)胞NHL臨床病理資料分析FBP1表達(dá)水平與B細(xì)胞NHL患者的年齡、性別、淋巴結(jié)結(jié)外受累情況和乳酸脫氫酶(lactic dehydrogenase,LDH)等因素之間的關(guān)系,采用單因素和Cox危險(xiǎn)比例模型多因素分析FBP1表達(dá)與B細(xì)胞NHL患者預(yù)后的關(guān)系。2.在細(xì)胞水平,采用Western blot方法檢測(cè)B細(xì)胞NHL細(xì)胞系中FBP1的表達(dá)情況;并利用FBP1小干擾片段(si RNAs)轉(zhuǎn)染B細(xì)胞來源的NHL細(xì)胞株Daudi和OCI-LY8細(xì)胞,流式細(xì)胞儀、Western blot、細(xì)胞活力試驗(yàn)等技術(shù)檢測(cè)FBP1表達(dá)對(duì)NHL細(xì)胞周期、細(xì)胞活力的影響;構(gòu)建NHL細(xì)胞粘附模型,并使用化療藥物多柔比星(Doxorubicin,Dox)刺激細(xì)胞,鈣黃綠素實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞活力實(shí)驗(yàn)等檢測(cè)并探討FBP1表達(dá)對(duì)NHL細(xì)胞粘附介導(dǎo)的耐藥過程的影響及分子機(jī)制。結(jié)果1.免疫組化結(jié)果顯示,FBP1表達(dá)水平在不同病理類型的B細(xì)胞NHL組織中存在明顯差異,侵襲性NHL組織中FBP1的表達(dá)水平明顯高于惰性NHL組織。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示,FBP1的表達(dá)強(qiáng)度與患者年齡(P0.001)淋巴結(jié)結(jié)外受累情況(P=0.025)、細(xì)胞增殖指數(shù)Ki-67的表達(dá)水平(P0.001)有顯著差異。單因素分析結(jié)果顯示FBP1的表達(dá)水平與B細(xì)胞NHL患者的不良預(yù)后有關(guān),FBP1表達(dá)越高,患者五年生存率越低(P0.001)。Cox危險(xiǎn)比例模型分析顯示FBP1可做為NHL預(yù)后的獨(dú)立指標(biāo)(P0.001)。2.FBP1在NHL細(xì)胞株Daudi和OCI-LY8中有顯著表達(dá),在上述兩種細(xì)胞中轉(zhuǎn)染FBP1小干擾質(zhì)粒,腫瘤增殖標(biāo)記蛋白PCNA表達(dá)下降,細(xì)胞存活能力下降。流式細(xì)胞儀結(jié)果顯示,FBP1低表達(dá)可以誘導(dǎo)NHL細(xì)胞周期阻滯在G1期,細(xì)胞周期調(diào)節(jié)蛋白CDK2、CyclinA、CyclinD1表達(dá)均降低。鈣黃綠素實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,在粘附培養(yǎng)的NHL細(xì)胞中FBP1的蛋白表達(dá)水平高于懸浮培養(yǎng)的NHL細(xì)胞;干擾FBP1的表達(dá)后,NHL細(xì)胞的粘附能力下降,同時(shí)NHL細(xì)胞對(duì)化療藥物Dox的敏感性增加。結(jié)論1.FBP1在B細(xì)胞NHL組織中高表達(dá),其表達(dá)水平與患者的不良預(yù)后正相關(guān),提示FBP1可能與B細(xì)胞NHL的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān),可作為B細(xì)胞NHL預(yù)后的指標(biāo)之一。2.FBP1的表達(dá)水平影響NHL細(xì)胞周期進(jìn)程及細(xì)胞活力,并且參與調(diào)控NHL細(xì)胞粘附介導(dǎo)的耐藥過程。該項(xiàng)目的研究將為臨床治療NHL尋找新的藥物靶點(diǎn)提供理論參考依據(jù)。
【圖文】：

18圖 1 FBP1 在人 B 細(xì)胞非霍奇金淋巴瘤組織的表達(dá)免疫組織化學(xué)方法檢測(cè) FBP1 的核表達(dá)在 HCC 及不同類型淋巴組織中的表在惰性淋巴瘤組織中呈弱陽性或陽性（E-H）而在侵襲性淋巴瘤組織中呈強(qiáng)J）。放大倍數(shù)（A.C.E.G.I）200×，（B.D.F.H.J）400×。

圖 2 FBP1 在 B 細(xì)胞 NHL 中的表達(dá)與干擾Western blot 檢測(cè) FBP1 在 HCC、正常肝細(xì)胞及淋巴細(xì)胞株 OCI-LY8 中A）。在 OCI-LY8 細(xì)胞干擾 FBP1 表達(dá)（B）�；叶冉y(tǒng)計(jì) FBP1 siRNA 干擾（C）。*與對(duì)照組相比， P < 0.05。.2 干擾 FBP1 對(duì) B 細(xì)胞 NHL 細(xì)胞增殖的影響在OCI-LY8細(xì)胞株中siRNA干擾FBP1表達(dá)后，腫瘤形成促進(jìn)因表達(dá)和增殖標(biāo)記蛋白PCNA的表達(dá)都呈現(xiàn)下調(diào)趨勢(shì)（圖3A）。同P1的表達(dá)后，選取不同時(shí)間點(diǎn)收集細(xì)胞、利用CCK-8實(shí)驗(yàn)縱向觀殖情況。結(jié)果顯示，發(fā)現(xiàn)干擾FBP1表達(dá)后，與對(duì)照組相比，細(xì)胞明顯抑制（圖3B）。結(jié)果提示FBP1的高表達(dá)可能與B細(xì)胞NHL細(xì)正相關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：南通大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R733.1

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本文編號(hào)：2535136