發(fā)布時間：2019-09-12 12:58

【摘要】：目的1.研究上游元件結(jié)合蛋白-1(far upstream element binding protein 1,FBP1)在我國B細胞非霍奇金淋巴瘤(Non-Hodgkin’s lymphomas,NHL)中的表達情況,在整體水平明確FBP1異常表達與B細胞NHL發(fā)生發(fā)展的關(guān)系。2.研究FBP1表達在B細胞來源的NHL細胞株Daudi和OCI-LY8細胞增殖、細胞周期調(diào)控以及細胞粘附介導(dǎo)的耐藥(cell adhesion mediated drug resistance,CAM-DR)過程中作用,在分子水平探討FBP1表達參與調(diào)控NHL細胞生物學行為的分子機制。方法1.在組織學水平,采用免疫組織化學技術(shù)檢測80例不同病理分型的B細胞NHL組織和19例反應(yīng)性增生(recative lymphadenopathy,RL)淋巴組織石蠟切片中FBP1的表達情況,并結(jié)合B細胞NHL臨床病理資料分析FBP1表達水平與B細胞NHL患者的年齡、性別、淋巴結(jié)結(jié)外受累情況和乳酸脫氫酶(lactic dehydrogenase,LDH)等因素之間的關(guān)系,采用單因素和Cox危險比例模型多因素分析FBP1表達與B細胞NHL患者預(yù)后的關(guān)系。2.在細胞水平,采用Western blot方法檢測B細胞NHL細胞系中FBP1的表達情況;并利用FBP1小干擾片段(si RNAs)轉(zhuǎn)染B細胞來源的NHL細胞株Daudi和OCI-LY8細胞,流式細胞儀、Western blot、細胞活力試驗等技術(shù)檢測FBP1表達對NHL細胞周期、細胞活力的影響;構(gòu)建NHL細胞粘附模型,并使用化療藥物多柔比星(Doxorubicin,Dox)刺激細胞,鈣黃綠素實驗、細胞活力實驗等檢測并探討FBP1表達對NHL細胞粘附介導(dǎo)的耐藥過程的影響及分子機制。結(jié)果1.免疫組化結(jié)果顯示,FBP1表達水平在不同病理類型的B細胞NHL組織中存在明顯差異,侵襲性NHL組織中FBP1的表達水平明顯高于惰性NHL組織。統(tǒng)計學分析顯示,FBP1的表達強度與患者年齡(P0.001)淋巴結(jié)結(jié)外受累情況(P=0.025)、細胞增殖指數(shù)Ki-67的表達水平(P0.001)有顯著差異。單因素分析結(jié)果顯示FBP1的表達水平與B細胞NHL患者的不良預(yù)后有關(guān),FBP1表達越高,患者五年生存率越低(P0.001)。Cox危險比例模型分析顯示FBP1可做為NHL預(yù)后的獨立指標(P0.001)。2.FBP1在NHL細胞株Daudi和OCI-LY8中有顯著表達,在上述兩種細胞中轉(zhuǎn)染FBP1小干擾質(zhì)粒,腫瘤增殖標記蛋白PCNA表達下降,細胞存活能力下降。流式細胞儀結(jié)果顯示,FBP1低表達可以誘導(dǎo)NHL細胞周期阻滯在G1期,細胞周期調(diào)節(jié)蛋白CDK2、CyclinA、CyclinD1表達均降低。鈣黃綠素實驗結(jié)果顯示,在粘附培養(yǎng)的NHL細胞中FBP1的蛋白表達水平高于懸浮培養(yǎng)的NHL細胞;干擾FBP1的表達后,NHL細胞的粘附能力下降,同時NHL細胞對化療藥物Dox的敏感性增加。結(jié)論1.FBP1在B細胞NHL組織中高表達,其表達水平與患者的不良預(yù)后正相關(guān),提示FBP1可能與B細胞NHL的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān),可作為B細胞NHL預(yù)后的指標之一。2.FBP1的表達水平影響NHL細胞周期進程及細胞活力,并且參與調(diào)控NHL細胞粘附介導(dǎo)的耐藥過程。該項目的研究將為臨床治療NHL尋找新的藥物靶點提供理論參考依據(jù)。
【圖文】：

18圖 1 FBP1 在人 B 細胞非霍奇金淋巴瘤組織的表達免疫組織化學方法檢測 FBP1 的核表達在 HCC 及不同類型淋巴組織中的表在惰性淋巴瘤組織中呈弱陽性或陽性（E-H）而在侵襲性淋巴瘤組織中呈強J）。放大倍數(shù)（A.C.E.G.I）200×，（B.D.F.H.J）400×。

圖 2 FBP1 在 B 細胞 NHL 中的表達與干擾Western blot 檢測 FBP1 在 HCC、正常肝細胞及淋巴細胞株 OCI-LY8 中A）。在 OCI-LY8 細胞干擾 FBP1 表達（B）�；叶冉y(tǒng)計 FBP1 siRNA 干擾（C）。*與對照組相比， P < 0.05。.2 干擾 FBP1 對 B 細胞 NHL 細胞增殖的影響在OCI-LY8細胞株中siRNA干擾FBP1表達后，腫瘤形成促進因表達和增殖標記蛋白PCNA的表達都呈現(xiàn)下調(diào)趨勢（圖3A）。同P1的表達后，選取不同時間點收集細胞、利用CCK-8實驗縱向觀殖情況。結(jié)果顯示，發(fā)現(xiàn)干擾FBP1表達后，與對照組相比，細胞明顯抑制（圖3B）。結(jié)果提示FBP1的高表達可能與B細胞NHL細正相關(guān)。
【學位授予單位】：南通大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R733.1

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本文編號：2535136