【摘要】：研究背景和目的：針對(duì)VEGF和其他上游靶點(diǎn)的抗血管生成療法面臨耐藥,副作用大等挑戰(zhàn),無(wú)法使大部分病人在臨床獲益。血管生成上下游靶點(diǎn)眾多,作用機(jī)制復(fù)雜,迫切需要尋求一個(gè)可以避開(kāi)VEGF上游信號(hào)通路的下游共同靶點(diǎn)。前期研究發(fā)現(xiàn)DSCR1-1L是VEGF的下游靶點(diǎn),但DSCR1-1L在HUVEC如何介導(dǎo)其他因子的功能及其作用機(jī)制尚不明確。研究方法：通過(guò)Western blot檢測(cè)不同時(shí)間點(diǎn)各刺激物對(duì)DSCR1-1L蛋白表達(dá)水平：通過(guò)重組腺病毒構(gòu)建制備DSCR1-1L, TEF3和YAP1特異性的cDNA和shRNA進(jìn)行"knockin”和"knock down"實(shí)驗(yàn)；采用CCK-8細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)和單層細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)分別檢測(cè)HUVEC細(xì)胞增殖和遷移并用EVOS細(xì)胞成像系統(tǒng)觀察細(xì)胞形態(tài)改變；Western blot檢測(cè)HUVEC內(nèi)細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核蛋白內(nèi)TEF3和YAP1在不同刺激條件下的表達(dá)情況；通過(guò)免疫共沉淀和蛋白免疫印跡實(shí)驗(yàn)檢測(cè)TEF3和YAP1蛋白與蛋白之間的關(guān)系。實(shí)驗(yàn)結(jié)果：VEGFE,VEGF121, Histamine,ASPC-1 CM,Panc-1 CM,B16F10 CM,DMEM medium,RPMI1640 medium以及EBM/kit均可以促進(jìn)HUVEC細(xì)胞內(nèi)DSCR1-1L蛋白表達(dá)升高；EBM/Kit促進(jìn)HUVEC細(xì)胞增殖的效率遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于VEGF-A165, Histamine以及二者聯(lián)用；過(guò)表達(dá)DSCR1-1L可以顯著促進(jìn)HUVEC細(xì)胞增殖,遷移和細(xì)胞形態(tài)改變；抑制DSCR1-1L蛋白表達(dá)可以顯著抑制VEGF-A165,Histamine, EBM/kit誘導(dǎo)的HUVEC細(xì)胞增殖,遷移和細(xì)胞形態(tài)改變；抑制TEF3蛋白表達(dá)可以顯著抑制Histamine, EBM/kit誘導(dǎo)的HUVEC細(xì)胞增殖,遷移和細(xì)胞形態(tài)改變； 過(guò)表達(dá)YAP1可以促進(jìn)HUVEC細(xì)胞增殖,遷移和細(xì)胞形態(tài)改變；抑制YAP1蛋白表達(dá)可以顯著抑制VEGF-A 165,Histamine誘導(dǎo)的HUVEC細(xì)胞增殖,遷移和細(xì)胞形態(tài)改變：過(guò)表達(dá)YAP1可以促進(jìn)DSCR1-1L蛋白表達(dá),抑制YAP1可以抑制DSCR1-1L蛋白表達(dá)：抑制YAP1的表達(dá)可以顯著抑制EBM/kit誘導(dǎo)的HUEC細(xì)胞增殖但不能抑制]HUVEC細(xì)胞遷移和細(xì)胞形態(tài)改變；VEGF-A165,Histamine,EBM/kit可以通過(guò)TEF3/YAP1蛋白-蛋白之間相互作用促進(jìn)TEF3,YAP1/TAZ從細(xì)胞漿移位到細(xì)胞核。結(jié)論：當(dāng)VEGF-A165,Histamine,EBM/kit刺激HUVEC后,YAP1去磷酸化激活并和TEF3以蛋白-蛋白之間相互作用的方式從細(xì)胞漿進(jìn)入細(xì)胞核移位聚集,TEF3結(jié)合到DSCR1-1L基因啟動(dòng)子的M-CAT位點(diǎn)上,啟動(dòng)DSCR1-1L的基因轉(zhuǎn)錄,翻譯成DSCR1-1L蛋白,進(jìn)而發(fā)揮調(diào)節(jié)]HUVEC細(xì)胞增殖,遷移和細(xì)胞形態(tài)改變。因此DSCR1-1L是促血管生成因子下游的一個(gè)共同靶點(diǎn),給抗血管生成療法提供了一個(gè)新視角。
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R730.5

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本文編號(hào)：2520557