【摘要】：背景與目的腫瘤相關(guān)成纖維細(xì)胞(tumor-associated fibroblasts,TAF)是腫瘤微環(huán)境的重要組成部分,可抑制免疫細(xì)胞的功能。在腫瘤免疫中CD8+T細(xì)胞發(fā)揮重要的作用,T細(xì)胞膜表面程序性死亡因子1(programmed death factor 1,PD-1),與其配體PD-L1(programmed death factor ligand 1,PD-L1)結(jié)合對(duì)T細(xì)胞的激活起負(fù)調(diào)節(jié)作用。本研究旨在探討TAF對(duì)肺癌細(xì)胞PD-L1表達(dá)的影響。方法我們以肺癌細(xì)胞株H1975、H520和TAF細(xì)胞進(jìn)行Transwell非接觸式共培養(yǎng)48 h的H1975、H520細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)組,單獨(dú)培養(yǎng)的H1975、H520細(xì)胞為對(duì)照組,兩組培養(yǎng)條件一致。倒置顯微鏡計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組H1975、H520細(xì)胞數(shù)、流式細(xì)胞儀分別檢測實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組肺癌細(xì)胞PD-L1的蛋白表達(dá)率、RT-PCR分別檢測實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組肺癌細(xì)胞PD-L1 m RNA的表達(dá)。結(jié)果每100μm2細(xì)胞計(jì)數(shù),H1975細(xì)胞實(shí)驗(yàn)組為(46±21)個(gè),對(duì)照組為(16±5)個(gè)(P0.05);H520細(xì)胞實(shí)驗(yàn)組為(38±10)個(gè),對(duì)照組為(12±5)個(gè)(P0.05)。PD-L1蛋白表達(dá)率,H1975細(xì)胞實(shí)驗(yàn)組為(20.93%±3.54%),對(duì)照組為(12.58%±2.52%)(P0.05);H520細(xì)胞實(shí)驗(yàn)組(19.26%±3.04%),對(duì)照組為(11.60%±2.65%)(P0.05)。m RNA表達(dá)水平,H1975細(xì)胞實(shí)驗(yàn)組為(16.45±1.25)pg/m L,對(duì)照組為(7.78±1.27)pg/m L(P0.05);H520細(xì)胞實(shí)驗(yàn)組為(15.38±2.02)pg/m L,對(duì)照組為(7.20±1.58)pg/m L(P0.05)。結(jié)論 TAF促進(jìn)肺癌細(xì)胞株H1975、H520的生長,增強(qiáng)細(xì)胞株P(guān)D-L1表達(dá)。
【圖文】：

驗(yàn)組H1975細(xì)胞（圖3A）、H520細(xì)胞（圖3C）PD-L1表達(dá)水平分別較其單獨(dú)培養(yǎng)對(duì)照組（圖3B、圖3D）高。2.4RT-PCR分析人肺癌腫瘤相關(guān)成纖維細(xì)胞對(duì)H1975、H520細(xì)胞PD-L1mRNA表達(dá)的影響如表1所示，H1975細(xì)胞PD-L1mRNA的表達(dá)量實(shí)驗(yàn)組高于對(duì)照組（P<0.05），H520細(xì)胞PD-L1mRNA的表達(dá)量實(shí)驗(yàn)組高于對(duì)照組（P<0.05）。3討論腫瘤微環(huán)境是腫瘤細(xì)胞與圍繞在腫瘤細(xì)胞周圍的血管、神經(jīng)、淋巴管以及上皮細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、纖維細(xì)胞，以及生長因子、趨化因子、抗體、激酶等多種小分子物質(zhì)，一起構(gòu)成的一個(gè)龐大網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，為圖2共培養(yǎng)肺癌細(xì)胞生長狀態(tài)。共培養(yǎng)48h后肺癌細(xì)胞（200×）：A：實(shí)驗(yàn)組H1975細(xì)胞；B：實(shí)驗(yàn)組H520細(xì)胞；C：對(duì)照組H1975細(xì)胞；D：對(duì)照組H520細(xì)胞。箭頭位置細(xì)胞皺縮不能貼壁而漂浮于培養(yǎng)液中。Fig2Lungcancercellsgrowthafter48h.After48hco-culturedlungcancercells(200×):A:Co-culturedH1975cells;B:Co-culturedH520cells;C:ControlH1975cells;D:ControlH520cells.Arrows:shrunkcellsfloatingintheculturemedium.ABCD圖3肺癌細(xì)胞株H1975、H520PD-L1蛋白表達(dá)率。H1975細(xì)胞PD-L1蛋白表達(dá)率，共培養(yǎng)組19.14%（A），單獨(dú)培養(yǎng)組14.04%（B）；H520細(xì)胞PD-L1蛋白表達(dá)率，，共培養(yǎng)組18.81%（C），單獨(dú)培養(yǎng)組12.27%（D）。Fig3ThePD-L1proteinexpressioninH1975andH520.TheexpressionofPD-L1proteininH1975is19.14%intheexperimentgroup(A)and14.04%inthecontrolgroup(B).TheexpressionofPD-L1proteininH520is18.81%intheexperimentgroup(C)and12.72%inthecontrolgroup(D).ABCD表1H1975,H520細(xì)胞PD-L1mRNA表達(dá)Ta1ThePD-L1mRNAexpressioninH1975,H520GroupH1975(pg/mL)H520(pg/mL)Experimentgroup16.45±1.2515.38?

驗(yàn)組H1975細(xì)胞（圖3A）、H520細(xì)胞（圖3C）PD-L1表達(dá)水平分別較其單獨(dú)培養(yǎng)對(duì)照組（圖3B、圖3D）高。2.4RT-PCR分析人肺癌腫瘤相關(guān)成纖維細(xì)胞對(duì)H1975、H520細(xì)胞PD-L1mRNA表達(dá)的影響如表1所示，H1975細(xì)胞PD-L1mRNA的表達(dá)量實(shí)驗(yàn)組高于對(duì)照組（P<0.05），H520細(xì)胞PD-L1mRNA的表達(dá)量實(shí)驗(yàn)組高于對(duì)照組（P<0.05）。3討論腫瘤微環(huán)境是腫瘤細(xì)胞與圍繞在腫瘤細(xì)胞周圍的血管、神經(jīng)、淋巴管以及上皮細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、纖維細(xì)胞，以及生長因子、趨化因子、抗體、激酶等多種小分子物質(zhì)，一起構(gòu)成的一個(gè)龐大網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，為圖2共培養(yǎng)肺癌細(xì)胞生長狀態(tài)。共培養(yǎng)48h后肺癌細(xì)胞（200×）：A：實(shí)驗(yàn)組H1975細(xì)胞；B：實(shí)驗(yàn)組H520細(xì)胞；C：對(duì)照組H1975細(xì)胞；D：對(duì)照組H520細(xì)胞。箭頭位置細(xì)胞皺縮不能貼壁而漂浮于培養(yǎng)液中。Fig2Lungcancercellsgrowthafter48h.After48hco-culturedlungcancercells(200×):A:Co-culturedH1975cells;B:Co-culturedH520cells;C:ControlH1975cells;D:ControlH520cells.Arrows:shrunkcellsfloatingintheculturemedium.ABCD圖3肺癌細(xì)胞株H1975、H520PD-L1蛋白表達(dá)率。H1975細(xì)胞PD-L1蛋白表達(dá)率，共培養(yǎng)組19.14%（A），單獨(dú)培養(yǎng)組14.04%（B）；H520細(xì)胞PD-L1蛋白表達(dá)率，共培養(yǎng)組18.81%（C），單獨(dú)培養(yǎng)組12.27%（D）。Fig3ThePD-L1proteinexpressioninH1975andH520.TheexpressionofPD-L1proteininH1975is19.14%intheexperimentgroup(A)and14.04%inthecontrolgroup(B).TheexpressionofPD-L1proteininH520is18.81%intheexperimentgroup(C)and12.72%inthecontrolgroup(D).ABCD表1H1975,H520細(xì)胞PD-L1mRNA表達(dá)Ta1ThePD-L1mRNAexpressioninH1975,H520GroupH1975(pg/mL)H520(pg/mL)Experimentgroup16.45±1.2515.38?
【作者單位】： 武警后勤學(xué)院;武警后勤學(xué)院附屬醫(yī)院;天津市第四中心醫(yī)院;
【基金】：全軍重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室開放基金項(xiàng)目(No.JY1406)資助~~
【分類號(hào)】：R734.2

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本文編號(hào)：2519583