【摘要】：目的:研究和探討c-Met小分子酪氨酸激酶抑制劑ARQ197是否對肺腺癌細胞有放射增敏作用,若具有放射增敏作用則進一步探討其放射增敏的可能機制,為ARQ197作為增敏劑應用于肺癌放射治療提供實驗依據(jù)。方法:采用人肺腺癌細胞系A(chǔ)549、H1299體外培養(yǎng)作為研究對象。首先用不同系列濃度的重組人肝細胞生長因子(HGF)和ARQ197分別處理肺腺癌細胞,應用克隆形成試驗檢測細胞增殖情況,篩選出用于放射敏感性研究的HGF和ARQ197的合適濃度。隨后將肺腺癌細胞分為以下四組:對照組、HGF處理組、ARQ197處理組、HGF和ARQ197共同處理組,應用細胞克隆形成試驗,繪制放射后細胞存活曲線,觀察不同組別之間放射敏感性的差異。而后用HGF單獨或聯(lián)合應用不同濃度的ARQ197分別處理肺腺癌細胞,應用蛋白印記檢測HGF單獨或聯(lián)合應用不同濃度ARQ197對細胞c-Met及下游Akt和Erk1/2蛋白表達和活化的影響。最后將肺腺癌細胞分為:對照組、ARQ197處理組,觀察兩組接受2Gy照射前和照射后6h、9h c-Met及下游Akt和Erk1/2蛋白表達和活化水平的變化。結(jié)果:肺腺癌細胞的克隆形成率隨著HGF濃度的增加呈進行性升高,而隨著ARQ197濃度的增加則進行性下降。放射后細胞存活曲線示對照組、HGF處理組、HGF和ARQ197共同處理組及ARQ197處理組的SF2值,A549細胞分別為48.28±2.16%、82±2.62%、41.53±1.71%和38.91±1.71%,H1299細胞分別為58.41.±3.47%、85.23±6.07%、44.80±3.47%和43.30±2.96%。HGF、HGF和ARQ197共同處理及ARQ197對A549肺腺癌細胞的放射增益比分別為0.79、1.11、1.19,對H1299肺腺癌細胞的放射增益比分別為0.85、1.20、1.27。H1299細胞在HGF刺激后,p-c Met、p-Akt、p-Erk1/2高表達,同時應用ARQ197,隨著ARQ197濃度的增加,p-c Met、p-Akt、p-Erk1/2蛋白的表達進行性下降。細胞接受2Gy照射后,p-c Met、p-Akt、p-Erk1/2高表達;同時應用ARQ197,p-c Met、p-Akt、p-Erk1/2蛋白的表達顯著下降,總的c-Met、Akt和Erk1/2蛋白的表達水平無明顯變化。結(jié)論:通過平板克隆形成分析法,我們可以得出ARQ197對人肺腺癌細胞有一定的放射增敏作用。通過蛋白印記檢測,我們進一步得出ARQ197通過抑制HGF/c-Met及其下游傳導通路的活化對離體肺腺癌細胞株有顯著的放射增敏作用。通過此實驗,為ARQ197作為放射增敏劑運用于肺腺癌的聯(lián)合治療提供實驗依據(jù)。
【圖文】：

1 細胞形態(tài)學觀察A549、H1299 細胞復蘇后 4～6h 散在貼壁，為梭形、類圓形或多角形，胞漿，單層生長，一般 10～12 天形成克隆。（見圖 1）

HGF單獨或聯(lián)合應用不同濃度ARQ197對cMet及其下游Akt和Erk1/2蛋白表達和活化的影響
【學位授予單位】：蘇州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R734.2

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本文編號：2519692