【摘要】：目的探討Src激酶和p38激酶在乙酰肝素酶促進人胃癌細(xì)胞遷移和侵襲中的作用及相互關(guān)系。方法實驗設(shè)正常對照組(細(xì)胞未作其他處理)、人乙酰肝素酶重組蛋白處理組(5、10μg/ml)以及提前3 h加入Src激酶特異性抑制劑pp2(5μmol/L)或p38激酶特異性抑制劑SB 203580(1μmol/L)再加入人乙酰肝素酶重組蛋白(10μg/ml)作用24h組。利用劃痕損傷實驗和Transwell小室基質(zhì)侵襲實驗分別檢測各處理組對人胃癌MGC-803細(xì)胞遷移和侵襲能力的影響;Western blot法檢測各處理組對人胃癌MGC-803細(xì)胞、高表達乙酰肝素酶的人胃癌SGC-7901細(xì)胞和乙酰肝素酶表達被下調(diào)的SGC-7901-Heparanasel(-)細(xì)胞中Src激酶、p38激酶、磷酸化Src激酶(p-Src)和磷酸化p38激酶(p-p38)蛋白表達的影響。結(jié)果與正常對照組比較,5和10μg/ml人乙酰肝素酶重組蛋白均能明顯增強人胃癌MGC-803細(xì)胞遷移和侵襲能力(P0.05);與未加抑制劑的人乙酰肝素酶重組蛋白比較,抑制劑pp2和SB 203580均能削弱人乙酰肝素酶重組蛋白增強的人胃癌MGC-803細(xì)胞的遷移和基質(zhì)侵襲能力(P0.05)。10μg/ml人乙酰肝素酶重組蛋白促進人胃癌MGC-803細(xì)胞Src激酶和p38激酶的磷酸化,而SGC-7901-Heparanasel(-)細(xì)胞中磷酸化的Src激酶和p38激酶表達水平較SGC-7901細(xì)胞明顯下調(diào)(P0.01);抑制劑pp2和SB 203580對人胃癌SGC-7901細(xì)胞中乙酰肝素酶蛋白表達無明顯影響;在人胃癌SGC-7901細(xì)胞和MGC-803細(xì)胞中,Src激酶的抑制劑pp2抑制磷酸化p38蛋白的表達,而p38激酶的抑制劑SB 203580對磷酸化Src蛋白表達無明顯影響。結(jié)論乙酰肝素酶可能通過促進Src激酶磷酸化或p38激酶的磷酸化或先促進Src激酶磷酸化再促進p38激酶的磷酸化,從而促進人胃癌細(xì)胞遷移和侵襲能力。乙酰肝素酶-Src激酶磷酸化-p38激酶磷酸化可能是人胃癌細(xì)胞內(nèi)存在的與細(xì)胞遷移和侵襲有關(guān)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路。
【圖文】：

組蛋白對人胃癌MGC-803細(xì)胞的遷移和基質(zhì)侵襲能力的影響用5μmol/LSrc激酶的特異性抑制劑pp2或1μmol/Lp38激酶特異性抑制劑SB203580預(yù)處理人胃癌MGC-803細(xì)胞3h后，再加入10μg/ml人乙酰肝素酶重組蛋白作用24h，經(jīng)劃痕遷移實驗顯示，人胃癌MGC-803細(xì)胞的遷移距離較單純由10μg/ml人乙酰肝素酶重組蛋白作用24h的人胃癌MGC-803細(xì)胞遷移距離明顯變短(t=－13.00、－11.92，P＜0.01)(圖2A);經(jīng)Transwell小室試驗顯示，人胃癌MGC-803細(xì)胞穿過小室的細(xì)胞數(shù)較單純由10μg/ml人乙酰肝素酶重組蛋白作用24h后穿過小室的細(xì)胞數(shù)明顯減少(t=－85.23、－83.93，P＜0.01)(圖2B)。可見，Src激酶的特異性抑制劑pp2和p38激酶特異性抑制劑SB203580均能削弱人乙酰肝素酶重組蛋白增強人胃癌MGC-803細(xì)胞的遷移和基質(zhì)侵襲能力。圖2抑制Src激酶和p38激酶后人乙酰肝素酶重組蛋白對人胃癌MGC-803細(xì)胞遷移和基質(zhì)侵襲能力的影響A:人胃癌MGC-803細(xì)胞相對遷移距離;B:人胃癌MGC-803細(xì)胞侵襲能力;1:10μg/ml處理組;2:pp2+處理組;3:SB203580+處理組;與10μg/ml處理組比較:＊＊P＜0.012．3人乙酰肝素酶重組蛋白對人胃癌MGC-803細(xì)胞中p-Src和p-p38蛋白表達的影響經(jīng)Westernblot檢測顯示，與正常對照組相比，10μg/ml處理組作用人胃癌MGC-803細(xì)胞24h后，p-Src和p-p38蛋白表達均明顯升高(t=13.85、20.11，P＜0.01)，而Src和p38蛋白表達均無明顯變化(圖3)。圖3Westernblot法檢測人乙酰肝素酶重組蛋白對人胃癌MGC-803細(xì)胞p-Src和p-p38蛋白表達的影響1:正常對照組;2:10μg/ml處理組;與正常對照組比較:＊＊P＜0.012．4SGC-7901-Heparanasel(－)細(xì)胞中p-Src和p-p38蛋白的表達Westernblot檢測顯示，與高表達乙?

艘陰８嗡孛鋼刈櫚鞍錐?人胃癌MGC-803細(xì)胞遷移和基質(zhì)侵襲能力的影響A:人胃癌MGC-803細(xì)胞相對遷移距離;B:人胃癌MGC-803細(xì)胞侵襲能力;1:10μg/ml處理組;2:pp2+處理組;3:SB203580+處理組;與10μg/ml處理組比較:＊＊P＜0.012．3人乙酰肝素酶重組蛋白對人胃癌MGC-803細(xì)胞中p-Src和p-p38蛋白表達的影響經(jīng)Westernblot檢測顯示，與正常對照組相比，10μg/ml處理組作用人胃癌MGC-803細(xì)胞24h后，p-Src和p-p38蛋白表達均明顯升高(t=13.85、20.11，P＜0.01)，而Src和p38蛋白表達均無明顯變化(圖3)。圖3Westernblot法檢測人乙酰肝素酶重組蛋白對人胃癌MGC-803細(xì)胞p-Src和p-p38蛋白表達的影響1:正常對照組;2:10μg/ml處理組;與正常對照組比較:＊＊P＜0.012．4SGC-7901-Heparanasel(－)細(xì)胞中p-Src和p-p38蛋白的表達Westernblot檢測顯示，與高表達乙酰肝素酶的人胃癌SGC-7901細(xì)胞相比，SGC-7901-Heparanasel(－)細(xì)胞中p-Src和p-p38蛋白表達明顯下降(t=－24.78、－44.52，P＜0.01)(圖4)。2．5Src激酶和p38激酶特異性抑制劑對人胃癌SGC-7901細(xì)胞中乙酰肝素酶蛋白表達的影響5μmol/Lpp2和1μmol/LSB203580作用人胃癌SGC-7901細(xì)胞24h后，，經(jīng)Westernblot檢測顯示，人胃癌SGC-7901細(xì)胞中乙酰肝素酶蛋白的表達無明顯變化(圖5)。2．6Src激酶特異性抑制劑對人胃癌細(xì)胞中p-p38蛋白表達的影響和p38激酶特異性抑制劑對人胃癌細(xì)胞中p-Src蛋白表達的影響經(jīng)Westernblot檢測顯示，5μmol/L的pp2作用人胃癌SGC-7901和MGC-803細(xì)胞24h后，細(xì)胞中p-p38蛋白表達均明顯降低(t=－13.47、－25.76，P＜0.01)(圖6)。而1μmol/L的SB203580作用人胃癌SGC-7901和·948·安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報ActaUniversitatisM
【作者單位】： 內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院病理科;
【基金】：國家自然科學(xué)基金(編號:30660065) 中支地學(xué)校匹配經(jīng)費(編號:X206017001)
【分類號】：R735.2

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本文編號：2519211