【摘要】：目的:制備負(fù)載5-氟尿嘧啶(5-FU)的納米藥物及構(gòu)建載5-氟尿嘧啶納米藥物和順鉑的殼聚糖溫敏凝膠體系,評(píng)價(jià)該體系對(duì)結(jié)直腸癌腹膜擴(kuò)散的治療作用。方法:本文采用分子量為2000的聚乙二醇(PEG)為大分子引發(fā)劑,引發(fā)ε-己內(nèi)酯開(kāi)環(huán)聚合,通過(guò)催化劑辛酸亞錫(Sn(Oct)2)催化合成了分子量為3700的聚己內(nèi)酯-聚乙二醇-聚己內(nèi)酯(PCL-PEG-PCL,PCEC)三嵌段共聚物,然后以PCEC聚合物為載體,通過(guò)自組裝包載5-氟尿嘧啶形成聚合物膠束(5-FU膠束)。再采用殼聚糖溫敏性水凝膠、順鉑和5-FU膠束制備成傳輸雙重藥物并具有緩釋特性的抗腫瘤藥物制劑。通過(guò)動(dòng)態(tài)光散射法和透射電鏡分別表征5-FU膠束的粒徑與形貌,通過(guò)高效液相色譜儀測(cè)定5-FU膠束的載藥率與包封率,以及通過(guò)改良透析法研究5-FU膠束、殼聚糖凝膠藥物體系的體外藥物釋放,噻唑藍(lán)(MTT)試驗(yàn)測(cè)定5-FU膠束與空白PCEC聚合物的體外細(xì)胞毒性,通過(guò)流變儀對(duì)該殼聚糖凝膠藥物體系的流變學(xué)特性進(jìn)行研究。運(yùn)用BALB/c小鼠建立結(jié)直腸癌腹膜擴(kuò)散(CRPC)模型,隨機(jī)分為6組(各組分別為12只,6只觀察腹腔腫瘤結(jié)節(jié)重量和數(shù)量,6只觀察生存期):(1)生理鹽水組(NS組),(2)空白膠束-凝膠組,(3)5-FU膠束(20 mg/Kg),(4)載順鉑的殼聚糖凝膠(1mg/kg),(5)氟尿嘧啶注射液(20mg/kg)+順鉑注射液(1mg/kg),(6)殼聚糖凝膠藥物體系(又名雙重藥物緩釋制劑組)。接著,腹腔注射200ul上述提及的藥物,觀察荷瘤小鼠的生存期評(píng)估雙重藥物緩釋制劑的體內(nèi)抗腫瘤療效。在第21天處死小鼠,因21天后生理鹽水組和空白膠束-凝膠組小鼠開(kāi)始死亡。測(cè)定腫瘤結(jié)節(jié)數(shù)量和重量。此外,收集肝肺組織做he染色,以此評(píng)估腫瘤轉(zhuǎn)移情況。通過(guò)免疫組化法測(cè)定ki-67初步探究抗腫瘤可能的機(jī)制。結(jié)果:該研究制備的5-fu膠束具有較高的包封率,呈球形的,平均粒徑為22.56nm,單分散的,有非常窄的粒徑分布,且隨著載藥量增加,平均粒徑改變也不大。在體外釋放研究結(jié)果中表明,5-fu膠束、殼聚糖凝膠藥物體系中5-fu和順鉑都能從該凝膠載藥體系中釋放出來(lái),無(wú)明顯的突發(fā)釋放,呈現(xiàn)出緩慢的藥物釋放行為。mtt結(jié)果顯示5-fu膠束的細(xì)胞毒性明顯高于游離5-fu,且空白pcec聚合物的毒性相對(duì)較低,是一種理想的安全的藥物傳遞系統(tǒng)。殼聚糖凝膠藥物體系和空白殼聚糖凝膠同樣具有良好的溫敏特性。體內(nèi)研究結(jié)果表明,與ns組(53.83±9.99,2.31±0.38g,p0.001)、空白膠束-凝膠組(52.67±6.12,2.26±0.28g,p0.001)、5-fu膠束(22.5±4.23,0.99±0.17g,p0.001)、載順鉑的殼聚糖凝膠(23.33±3.56,0.98±0.13g,p0.001)、氟尿嘧啶注射液+順鉑注射液(18.16±3.06,0.79±0.13g,p0.05)相比,殼聚糖凝膠藥物體系的腫瘤結(jié)節(jié)的數(shù)量和重量(10.33±2.66,0.49±0.11g)顯著減少,明顯抑制了腫瘤的生長(zhǎng),且空白膠束-凝膠組則沒(méi)顯示出任何的抗腫瘤作用。殼聚糖凝膠藥物體系組的中位生存期為43天,與ns組(25天)、空白膠束-凝膠組(26天)、5-fu膠束(31天)、載順鉑的殼聚糖凝膠組(33天)、氟尿嘧啶注射液+順鉑注射液組(35天)相比是明顯延長(zhǎng)的。此外,觀察結(jié)直腸癌腹膜擴(kuò)散小鼠的肝肺轉(zhuǎn)移情況,通過(guò)肝肺組織的he染色結(jié)果表明,殼聚糖凝膠藥物體系可以在一定程度上抑制結(jié)直腸癌腹膜擴(kuò)散后繼續(xù)向肝肺組織的轉(zhuǎn)移。殼聚糖凝膠藥物體系Ki-67陽(yáng)性表達(dá)細(xì)胞數(shù)(21.83±5.71%)的比例明顯低于NS組(83.67±4.89%,P0.001)、空白膠束-凝膠組(80.67±3.78%,P0.001)、5-FU膠束(57.00±5.66%,P0.001)、載順鉑的殼聚糖凝膠組(55.50±4.64%,P0.001)、氟尿嘧啶注射液+順鉑注射液組(39.50±3.94%,P0.001),且都具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論:PCEC聚合物聯(lián)合單純的殼聚糖水凝膠組成的雙重載藥體系的毒性是相對(duì)較低,是一種理想的安全的藥物載體。載5-氟尿嘧啶納米藥物和順鉑的殼聚糖溫敏凝膠體系具有良好的溫敏性特性,通過(guò)腹腔注射到結(jié)直腸癌腹膜擴(kuò)散動(dòng)物模型后,在腫瘤組織位置形成一個(gè)原位的藥物釋放中心,起到持續(xù)抗腫瘤的作用,一定程度的抑制腫瘤肝肺的轉(zhuǎn)移,同時(shí)減少了傳統(tǒng)給藥途徑引起的全身毒副作用。因此,該藥物制劑具有良好的臨床應(yīng)用前景,可用于腫瘤局部治療的新制劑。
【圖文】：

結(jié) 果1.1 5-FU 膠束的制備及表征5-FU膠束通過(guò)固體分散法制備而成，其粒徑及形貌表征如下圖1所示。從圖 1A 可見(jiàn)幾種物質(zhì)的外觀：（a）生理鹽水（NS），（b）空白 PCEC 膠束，（c）5-FU 膠束，，（d）5-FU 膠束的凍干粉末，（e）復(fù)溶的 5-FU 膠束。從圖中可以看出，5-FU 膠束在生理鹽水中呈現(xiàn)藍(lán)色的乳光。此外，復(fù)溶的5-FU 膠束非常穩(wěn)定且為同樣具有藍(lán)色乳光的均勻透明溶液。圖 1： 5-FU 膠束的表征。（A）幾種物質(zhì)的外觀：（a）生理鹽水，（b）空白 PCEC膠束

西 南 醫(yī) 科 大 學(xué) 碩 士 學(xué) 位 論 文藥物釋放曲線，結(jié)果如圖 2B 所示。殼聚糖凝膠藥物體系中 5-FU 和順鉑續(xù)緩慢釋放，然而順鉑累積釋放率高于 5-FU。殼聚糖凝膠藥物體系的延藥物釋放作用使藥物最大化發(fā)揮抗腫瘤效應(yīng)并使正常組織毒性反應(yīng)最化，因而其具有廣泛的應(yīng)用前景。
【學(xué)位授予單位】：西南醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R735.34

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2519173