【摘要】：一、非小細胞肺癌中B7-H3和FOXP3的組織水平研究及其臨床分析目的：通過檢測非小細胞肺癌組織中B7-H3和FOXP3的表達情況,探討它們之間表達的相關性及其與非小細胞肺癌臨床病理參數(shù)及患者預后的關系,為非小細胞肺癌的診斷和評價預后提供一定的理論依據(jù)。材料與方法：收集資料完整的非小細胞肺癌石蠟標本110例,應用免疫組織化學法(SP法)檢測B7-H3和FOXP3在非小細胞肺癌組織中的表達情況,分析B7-H3和FOXP3表達與非小細胞肺癌臨床病理參數(shù)的關系,探究B7-H3和FOXP3之間表達的相關性及其與患者預后的關系。免疫組織化學法數(shù)據(jù)采用x2檢驗和雙側t分布檢驗,生存分析采用Log-rank時序檢驗和Kaplan-Meier生存曲線。所有統(tǒng)計學結果采用SPSS 19.0軟件進行統(tǒng)計分析。結果1.B7-H3在非小細胞肺癌組織中的表達與患者年齡、吸煙指數(shù)、腫塊大小和淋巴結有無轉移無關,差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)；B7-H3在非小細胞肺癌組織中的表達與患者性別有關,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05),B7-H3在成年男性非小細胞肺癌中的陽性表達率明顯高于女性。B7-H3在非小細胞肺癌組織中的表達與肺癌的病理學類型有關,差異有顯著的統(tǒng)計學意義(P0.01),B7-H3在肺鱗癌組織中的陽性表達率要高于在腺癌組織中的表達率。B7-H3在非小細胞肺癌組織中的表達與腫瘤TNM分期有關,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05),B7-H3在非小細胞肺癌TNM Ⅱ-Ⅲ期組組織中的表達高于TNM I期組。2. FOXP3在非小細胞肺癌組織中的表達與患者吸煙指數(shù)、病理學類型和腫塊大小無關,差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。FOXP3在非小細胞肺癌中的表達與患者年齡有關,差異有顯著的統(tǒng)計學意義(P0.01),FOXP3在≥60歲年齡組的表達率要高于60歲組。FOXP3在非小細胞肺癌中的表達與患者性別及區(qū)域淋巴結轉移情況有關,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05),FOXP3在成年男性患者中的陽性表達率明顯高于女性,有區(qū)域淋巴結轉移患者中的陽性表達率高于無區(qū)域淋巴結轉移組。FOXP3在非小細胞肺癌組織中的表達與腫瘤TNM分期有關,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05),FOXP3陽性表達率在TNMⅡ-Ⅲ期組明顯要高于TNM I期組。3.B7-H3和FOXP3在非小細胞肺癌組織中的表達成正相關性(P0.05)4.B7-H3在非小細胞肺癌組織中的表達強度與腫瘤浸潤淋巴細胞中FOXP3+Treg細胞數(shù)量成正相關性(P0.05)。5.B7-H3和FOXP3在非小細胞肺癌組織中的表達強度越高,患者總生存期越短和預后越差。結論1.B3-H7和FOXP3在非小細胞肺癌組織中的表達上調。2.B3-H7在非小細胞肺癌組織中的表達與患者年齡、吸煙指數(shù)、腫瘤大小、淋巴結是否轉移無關,而與患者性別、病理學類型、腫瘤TNM分期相關。FOXP3在非小細胞肺癌組織中的表達與患者吸煙指數(shù)、組織學類型、腫瘤大小無關,而與患者年齡、性別、區(qū)域淋巴結轉移情況、腫瘤TNM分期相關。3.B7-H3和FOXP3在非小細胞肺癌組織中的表達成正相關性。4.B7-H3在非小細胞肺癌組織中的表達強度與腫瘤浸潤淋巴細胞中FOXP3+Treg細胞數(shù)量成正相關性。5.B7-H3和FOXP3在非小細胞肺癌組織中的表達強度越高,患者總生存期越短和預后越差。5.首次分析并闡釋了B7-H3和FOXP3在NSCLC組織中表達的相關性,及其在NSCLC患者預后中的重要性。二、免疫相關細胞因子在非小細胞肺癌患者血清中的表達及意義目的：前文研究中發(fā)現(xiàn)B7-H3參與了非小細胞肺癌中T淋巴細胞的調節(jié)過程,而白細胞介素廣泛參與了T淋巴細胞的調節(jié),為進一步驗證白細胞介素在非小細胞肺癌發(fā)生轉移中的作用及其與患者預后的相關性,本部分研究選取近年來發(fā)現(xiàn)的且在非小細胞肺癌中研究較少的IL-24和IL-36為代表,通過酶聯(lián)免疫吸附法進一步研究它們在非小細胞肺癌患者血清中的表達情況,并探討它們的變化規(guī)律與非小細胞肺癌臨床分期的關系,為非小細胞肺癌的診斷和評價預后提供一定的理論依據(jù)。材料與方法：分別收集41例原發(fā)性非小細胞肺癌患者和10例健康對照者的血清樣本。應用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)對血清中IL-24、IL-36含量進行測定。41例原發(fā)性非小細胞肺癌患者按性別、腫瘤TNM分期與10例健康對照者比較分析。統(tǒng)計學結果采用SPSS 19.0軟件進行統(tǒng)計分析。結果1. NSCLC患者外周血清中IL-24含量遠高于對照組,組間差異較為顯著(p0.01)。NSCLC患者外周血清IL-36含量要高于對照組,組間存在差異(p0.05)。2. NSCLC男性患者外周血清中IL-24含量接近于女性患者,組間水平不存在差異(p0.05)。NSCLC男性患者外周血清中IL-24含量高于對照組,組間存在顯著差異(p0.01)。NSCLC女性患者外周血清中IL-24含量高于對照組,組間存在顯著差異(p0.01)。NSCLC男性患者外周血清中IL-36含量與女性患者IL-36含量相接近,組間差異不明顯(p0.05)。NSCLC男性患者外周血清中IL-36含量高于對照組,組間存在差異(p0.05)NSCLC女性患者外周血清中IL-36含量高于對照組,組間存在差異(p0.05)3.IL-24含量在NSCLC Ⅰ期患者外周血清中含量要高于Ⅱ-Ⅲ期患者,組間存在差異(p0.05)。IL-24含量在NSCLC Ⅰ期患者外周血清中含量要遠高于對照組,組間存在顯著差異(p0.01)。IL-24含量在NSCLC Ⅱ-Ⅲ患者外周血清中含量要遠高于對照組,組間存在顯著差異(p0.01)。IL-36含量在NSCLC Ⅰ期患者外周血清中含量要低于Ⅱ-Ⅲ期患者,組間存在差異(p0.05)。IL-36含量在NSCLC Ⅰ期患者外周血清中含量要高于對照組,組間差異不明顯(p0.05)。IL-36含量在NSCLC Ⅱ-Ⅲ期患者外周血清中含量要高于對照組,組間存在顯著差異(p0.01)。結論1. IL-24、IL-36在非小細胞肺癌患者外周血清中的含量均高于對照組。2.IL-24表達的變化規(guī)律：NSCLC對照組；Ⅰ期Ⅱ-Ⅲ期對照組。IL-36表達的變化規(guī)律：NSCLC對照組；Ⅱ-Ⅲ期Ⅰ期對照組3.首次分析了IL-24、IL-36在NSCLC患者外周血清中的表達情況,并初步探討其與非小細胞肺癌發(fā)展轉移的相關性。4.據(jù)本實驗結果推測,在NSCLC患者中,B7-H3的表達強度與IL-36的表達水平間可能存在著某種正相關的關系性,而B7-H3的表達強度與IL-24的表達水平間可能存住著某種負相關的關系。三、非小細胞肺癌轉移相關基因的驗證目的：為進一步研究B7-H3在非小細胞肺痛腫瘤轉移過程中的作用,本實驗檢測了多個參與腫瘤轉移及免疫逃逸相關因子在DNA轉錄表達水平上與B7-H3的關系,從而進一步驗證了B7-H3在非小細胞肺癌轉移過程中的重要性。材料與方法：以10例非小細胞肺癌患者切除的腫瘤組織為實驗組,相對應癌旁組織為對照組,分別提取其RNA,進行反轉錄之后,通過real-time PCR的方法檢測其中與腫瘤轉移及免疫逃逸相關因子TLR3、TRAK1、EGFR和TCF12的轉錄表達水平,并與B7-H3的表達水平進行相關性分析,統(tǒng)計學結果采用SPSS 19.0軟件進行統(tǒng)計分析。結果1. NSCLC患者腫瘤組織中B7-H3基因表達水平要高于癌旁組織的對照組,組間表達水平差異明顯(p0.05),而NSCLC患者腫瘤組織中TLR3基因表達水平與對照組癌旁組織的表達水平相接近,組間表達水平差異不明顯(p0.05)在NSCLC腫瘤組織和癌旁組織中,B7-H3基因與TLR3基因的表達關系不具有相關性。2. NSCLC患者腫瘤組織中TRAK1基因表達水平要高于癌旁組織的對照組的表達水平,組間表達水平差異明顯(p0.05)在癌旁組織中,B7-H3基因與TRAKl基因的表達關系不具有相關性,而在NSCLC腫瘤組織中,B7-H3基因與TRAK1基因的表達關系可能存在一定的正相關性。3. NSCLC患者腫瘤組織中EGFR基因的表達水平要高于對照組癌旁組織的表達水平,組間表達水平差異明顯(p0.05)在癌旁組織中,B7-H3基因與EGFR基因的表達關系不具有相關性,而在NSCLC腫瘤組織中,B7-H3基因與EGFR基因的表達關系可能存在一定的正相關性.4. NSCLC患者腫瘤組織中TCF12基因表達水平與對照組癌旁組織的表達水平相接近,組間表達水平差異不明顯(p0.05)。在NSCLC腫瘤組織和癌旁組織中,B7-H3基因與TCF12基因的表達關系都不具有明顯的相關性。結論1. B7-H3. TRAK1、EGFR基因在NSCLC腫瘤組織中表達水平均高于對照組癌旁組織,而TLR3、TCF12基因表達水平在NSCLC腫瘤組織和癌旁組織間無明顯差異。2.本實驗對非小細胞肺癌轉移相關基因進行了驗證,首次驗證出在NSCLC患者癌組織和癌旁組織中,TARK1和EGFR的表達有顯著差異,而TLR3和TCF12不具有顯著差異,結果提示B7-H3基因與TRAK1、EGFR基因的表達可能存在某種相互的關系。3.基于本實驗中B7-H3、TRAK1、EGFR基因表達特點的相似性以及B7-H3和FOXP3共同促進腫瘤轉移,我們是否可以推測,在NSCLC患者腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過程中,B7-H3與TRAK1、EGFR的信號通道或調控途徑中可能存在著某種未知的誘導或協(xié)作效應,共同促進腫瘤轉移。綜合以上部分可以得出,在非小細胞肺癌中B3-H7和FOXP3的表達上調共同促進腫瘤轉移,但這種上調可能受多種因素影響；在非小細胞癌患者外周血清中IL-24和IL-36的表達也都出現(xiàn)上調,其中IL-24在I期的表達要高于Ⅱ-Ⅲ期,IL-36則在Ⅱ-Ⅲ期中表達更高,說明IL-24和IL-36在NSCLC腫瘤發(fā)展中發(fā)揮著不同的作用；通過real-time PCR對非小細胞肺癌轉移相關基因進行了檢測,結果表明TARK1和EGFR基因的表達有顯著差異,而TLR3和TCF12基因不具有顯著差異,結果提示B7-H3基因與TRAK1、EGFR基因的表達可能存在某種相互的關系,在NSCLC腫瘤的轉移和發(fā)展過程中可能存在某種協(xié)作關系。
【圖文】：

圖２－１邋Ｂ７－Ｈ３在不同非小細胞肺癌組織中免疫組織化學染色情況，Ｂ７－Ｈ３在細胞膜及細胞質逡逑中均有表達（ａ；邋Ｂ７－Ｈ３陰性表達（ＳＰＸ４００），，ｂ：邋Ｂ７－Ｈ３低度表達（ＳＰＸ４００），Ｃ：邋Ｂ７－Ｈ３中逡逑度表達（ＳＰＸ４００），ｄ：Ｂ７－出高度表達（ＳＰＸ４００））．逡逑．．邋

逡逑結果見表３和圖２－２所示。Ｆ０ＸＰ３在非小細胞肺癌姐織中的表達在年齡＜６０}D和逡逑三６０組的陽性率分別為５４．５５％和７２．７３％，兩紐之間的差別具有統(tǒng)統(tǒng)計學意義逡逑表３邋ＦＯＸＰ３在非小細胞肺癌中的表達情況和各臨床病理參數(shù)之間的關系逡逑臨床參數(shù)邐ＦＯＸＰ３陽性細胞逡逑ｎ邐Ｐ值逡逑邐高表達邐低表達邐逡逑年齡巧）逡逑＜６０邐４４邐２４邐２０逡逑０．０４９逡逑

本文編號：2516673