【摘要】：研究背景和研究目的結(jié)直腸癌是全世界范圍內(nèi)最常見的消化道腫瘤之一,在我國結(jié)直腸癌的發(fā)病率位列消化道腫瘤的第一位,同時隨著近年來膳食結(jié)構(gòu)的改變,結(jié)直腸癌的發(fā)病率仍在不斷上升,且多數(shù)病人發(fā)現(xiàn)時已屬于腫瘤的中晚期階段,因此結(jié)直腸癌已成為嚴重危害中國人健康的疾病。目前結(jié)直腸癌仍是以手術(shù)切除為主,同時輔以放化療治療,但是其生存率仍然沒有得到明顯提高,因此,研究結(jié)直腸癌的發(fā)生發(fā)展的分子機制,找到更加有效的分子檢測靶標來進行結(jié)直腸癌的診斷,并且對腫瘤的轉(zhuǎn)移和復發(fā)進行更準確的判斷,以此提高結(jié)直腸癌患者的診斷和治療,使其獲得長期術(shù)后生存和較高生活質(zhì)量有著十分重要的意義。SET domain bifurcated 1(SETDB1)是一種組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶,其基因長度為50kbp,定位于人1q21.3染色體上,能調(diào)節(jié)組蛋白甲基化,并參與基因沉默和轉(zhuǎn)錄抑制的過程。通過對SETDB1進行基因沉默和轉(zhuǎn)錄抑制,認為其在疾病的發(fā)病機制中扮演了一個非常重要的角色。在結(jié)直腸癌的發(fā)生發(fā)展中SETDB1是否也起到重要的作用,尚不清楚。本課題首先探討了在結(jié)直腸癌患者組織中SETDB1的表達情況,分析其表達與相關(guān)臨床病理指標的相互關(guān)系;隨后使用si RNA干擾技術(shù)沉默SETDB1基因的表達觀察其低表達對結(jié)直腸癌細胞增殖凋亡的影響。研究方法1、SETDB1在結(jié)直腸癌組織中的表達及臨床意義利用免疫組化分別檢測SETDB1在70例結(jié)直腸癌組織及癌旁黏膜中的分布及表達情況,并分析SETDB1表達與臨床病理特征的相關(guān)性。2、沉默SETDB1后對結(jié)直腸癌細胞增殖和凋亡能力的影響1)利用Real-Time PCR檢測3種結(jié)直腸癌細胞株Lovo、HT29、SW480中SETDB1的表達,篩選出SETDB1m RNA表達最高的細胞株對SETDB1基因進行沉默干擾。2)使用Si RNA干擾技術(shù)轉(zhuǎn)染SETDB1基因表達量最高的細胞株Lovo,運用Real-Time PCR和Western blot檢測轉(zhuǎn)染后的結(jié)直腸癌細胞株中SETDB1 m RNA及蛋白的表達情況,檢測其轉(zhuǎn)染效率。3)用CCK8、流式細胞技術(shù)比較SETDB1基因沉默前后細胞增殖和凋亡能力的變化;并用Western blot、Real-Time PCR檢測增殖和凋亡相關(guān)基因cyclin D1和Bcl-2、Bax的蛋白及m RNA表達水平。研究結(jié)果1、SETDB1在結(jié)直腸癌組織中的表達及臨床意義70例結(jié)直腸癌組織免疫組化結(jié)果顯示,SETDB1在結(jié)直腸癌組織中的表達高于癌旁黏膜組織。統(tǒng)計學分析發(fā)現(xiàn),SETDB1的表達與患者的年齡、性別、浸潤深度、腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及遠處轉(zhuǎn)移無關(guān)(P0.05),而與腫瘤的分化程度具有顯著性相關(guān)性(P0.05)。2、Si RNA沉默SETDB1基因表達對結(jié)直腸癌細胞增殖和凋亡的影響1)SETDB1基因在Lovo細胞株中高表達。2)合成的三條SETDB1 Si RNA干擾片段,其中SETDB1/Si RNA-1/-2兩條轉(zhuǎn)染效率相當,且轉(zhuǎn)染效率高于SETDB1/Si RNA-3。3)CCK8實驗結(jié)果顯示:與對照組Lovo/NC相比,沉默SETDB1基因后的結(jié)腸癌細胞Lovo/SETDB1/Si RNA-1/-2的增殖能力降低。4)流式細胞技術(shù)實驗結(jié)果顯示:與對照組Lovo/NC相比,SETDB1基因沉默后的結(jié)腸癌細胞Lovo/SETDB1/Si RNA-1/-2的G1期細胞比例減少,而G2期和S期細胞比例增加,發(fā)生G2/M期阻滯;凋亡率均較對照組明顯增加。且Western blot、Real-Time PCR檢測結(jié)果Bcl-2的m RNA及蛋白表達水平降低,Bax及cyclin D1的m RNA及蛋白表達水平升高。結(jié)論SETDB1在結(jié)直腸癌組織中表達增高。體外實驗表明,沉默SETDB1基因能抑制結(jié)直腸癌細胞株的增殖,并促進其凋亡。
【圖文】：

西 南 醫(yī) 科 大 學 碩 士 學 位 論 文列腺癌的增殖、凋亡、侵襲與轉(zhuǎn)移[33],SETDB1siRNA 干涉后引起神經(jīng)母細胞瘤生長、增殖受到抑制，下調(diào) SETDB1 抑制嘿吟核普酸的從頭合成[34]。通過對 SETDB1 進行基因沉默和轉(zhuǎn)錄抑制，，認為其在疾病的發(fā)病機制中扮演了一個非常重要的角色，同時已確定其是舞蹈病的一個治療靶點[35]。目前在該基因肺癌中研究比較深入，且認為是一個潛在的致癌基因[36]。

圖 1.1 癌組織中 SETDB1 陽性表達re 1.1 positive expressionof SETDBl in CRC直腸癌組織及癌旁正常黏膜中 SETDB11-1 Expressions of SETDB1 in the adjacentmucosa and CRC tissuesSETDB1 的表達 陽性率（%） 2陰性 陽性49 21 30682 68 97.14
【學位授予單位】：西南醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R735.34

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前3條

1 邵仟仟;林國樂;;2017.V1版《NCCN結(jié)直腸癌診治指南》更新解讀[J];中國全科醫(yī)學;2017年06期

2 詹天成;顧晉;;NCCN 2016 V1版直腸癌診治指南更新及其解讀[J];實用腫瘤雜志;2016年04期

3 張寧;閆永平;蘇海霞;趙斌;李莎;戴曉玲;;2011年-2013年陜西省1185例結(jié)直腸癌住院病例臨床特征分析[J];中國病案;2015年05期

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1 祝順琴;組蛋白H3K9甲基化轉(zhuǎn)移酶SETDB1對神經(jīng)母細胞瘤增殖與分化的調(diào)控研究[D];重慶大學;2014年

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1 唐冠楠;谷氨酸脫羧酶1（GAD1）在腫瘤發(fā)生中的甲基化激活機制研究[D];第二軍醫(yī)大學;2013年

2 潘云慧;p300通過激活RASSF2基因表達誘導胃癌細胞HGC-27細胞周期S/G2阻滯的分子機制[D];東北師范大學;2011年

本文編號：2516384