【摘要】：研究背景和研究目的結(jié)直腸癌是全世界范圍內(nèi)最常見(jiàn)的消化道腫瘤之一,在我國(guó)結(jié)直腸癌的發(fā)病率位列消化道腫瘤的第一位,同時(shí)隨著近年來(lái)膳食結(jié)構(gòu)的改變,結(jié)直腸癌的發(fā)病率仍在不斷上升,且多數(shù)病人發(fā)現(xiàn)時(shí)已屬于腫瘤的中晚期階段,因此結(jié)直腸癌已成為嚴(yán)重危害中國(guó)人健康的疾病。目前結(jié)直腸癌仍是以手術(shù)切除為主,同時(shí)輔以放化療治療,但是其生存率仍然沒(méi)有得到明顯提高,因此,研究結(jié)直腸癌的發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制,找到更加有效的分子檢測(cè)靶標(biāo)來(lái)進(jìn)行結(jié)直腸癌的診斷,并且對(duì)腫瘤的轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)進(jìn)行更準(zhǔn)確的判斷,以此提高結(jié)直腸癌患者的診斷和治療,使其獲得長(zhǎng)期術(shù)后生存和較高生活質(zhì)量有著十分重要的意義。SET domain bifurcated 1(SETDB1)是一種組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶,其基因長(zhǎng)度為50kbp,定位于人1q21.3染色體上,能調(diào)節(jié)組蛋白甲基化,并參與基因沉默和轉(zhuǎn)錄抑制的過(guò)程。通過(guò)對(duì)SETDB1進(jìn)行基因沉默和轉(zhuǎn)錄抑制,認(rèn)為其在疾病的發(fā)病機(jī)制中扮演了一個(gè)非常重要的角色。在結(jié)直腸癌的發(fā)生發(fā)展中SETDB1是否也起到重要的作用,尚不清楚。本課題首先探討了在結(jié)直腸癌患者組織中SETDB1的表達(dá)情況,分析其表達(dá)與相關(guān)臨床病理指標(biāo)的相互關(guān)系;隨后使用si RNA干擾技術(shù)沉默SETDB1基因的表達(dá)觀察其低表達(dá)對(duì)結(jié)直腸癌細(xì)胞增殖凋亡的影響。研究方法1、SETDB1在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)及臨床意義利用免疫組化分別檢測(cè)SETDB1在70例結(jié)直腸癌組織及癌旁黏膜中的分布及表達(dá)情況,并分析SETDB1表達(dá)與臨床病理特征的相關(guān)性。2、沉默SETDB1后對(duì)結(jié)直腸癌細(xì)胞增殖和凋亡能力的影響1)利用Real-Time PCR檢測(cè)3種結(jié)直腸癌細(xì)胞株Lovo、HT29、SW480中SETDB1的表達(dá),篩選出SETDB1m RNA表達(dá)最高的細(xì)胞株對(duì)SETDB1基因進(jìn)行沉默干擾。2)使用Si RNA干擾技術(shù)轉(zhuǎn)染SETDB1基因表達(dá)量最高的細(xì)胞株Lovo,運(yùn)用Real-Time PCR和Western blot檢測(cè)轉(zhuǎn)染后的結(jié)直腸癌細(xì)胞株中SETDB1 m RNA及蛋白的表達(dá)情況,檢測(cè)其轉(zhuǎn)染效率。3)用CCK8、流式細(xì)胞技術(shù)比較SETDB1基因沉默前后細(xì)胞增殖和凋亡能力的變化;并用Western blot、Real-Time PCR檢測(cè)增殖和凋亡相關(guān)基因cyclin D1和Bcl-2、Bax的蛋白及m RNA表達(dá)水平。研究結(jié)果1、SETDB1在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)及臨床意義70例結(jié)直腸癌組織免疫組化結(jié)果顯示,SETDB1在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)高于癌旁黏膜組織。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析發(fā)現(xiàn),SETDB1的表達(dá)與患者的年齡、性別、浸潤(rùn)深度、腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移無(wú)關(guān)(P0.05),而與腫瘤的分化程度具有顯著性相關(guān)性(P0.05)。2、Si RNA沉默SETDB1基因表達(dá)對(duì)結(jié)直腸癌細(xì)胞增殖和凋亡的影響1)SETDB1基因在Lovo細(xì)胞株中高表達(dá)。2)合成的三條SETDB1 Si RNA干擾片段,其中SETDB1/Si RNA-1/-2兩條轉(zhuǎn)染效率相當(dāng),且轉(zhuǎn)染效率高于SETDB1/Si RNA-3。3)CCK8實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:與對(duì)照組Lovo/NC相比,沉默SETDB1基因后的結(jié)腸癌細(xì)胞Lovo/SETDB1/Si RNA-1/-2的增殖能力降低。4)流式細(xì)胞技術(shù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:與對(duì)照組Lovo/NC相比,SETDB1基因沉默后的結(jié)腸癌細(xì)胞Lovo/SETDB1/Si RNA-1/-2的G1期細(xì)胞比例減少,而G2期和S期細(xì)胞比例增加,發(fā)生G2/M期阻滯;凋亡率均較對(duì)照組明顯增加。且Western blot、Real-Time PCR檢測(cè)結(jié)果Bcl-2的m RNA及蛋白表達(dá)水平降低,Bax及cyclin D1的m RNA及蛋白表達(dá)水平升高。結(jié)論SETDB1在結(jié)直腸癌組織中表達(dá)增高。體外實(shí)驗(yàn)表明,沉默SETDB1基因能抑制結(jié)直腸癌細(xì)胞株的增殖,并促進(jìn)其凋亡。
【圖文】：

西 南 醫(yī) 科 大 學(xué) 碩 士 學(xué) 位 論 文列腺癌的增殖、凋亡、侵襲與轉(zhuǎn)移[33],SETDB1siRNA 干涉后引起神經(jīng)母細(xì)胞瘤生長(zhǎng)、增殖受到抑制，下調(diào) SETDB1 抑制嘿吟核普酸的從頭合成[34]。通過(guò)對(duì) SETDB1 進(jìn)行基因沉默和轉(zhuǎn)錄抑制，，認(rèn)為其在疾病的發(fā)病機(jī)制中扮演了一個(gè)非常重要的角色，同時(shí)已確定其是舞蹈病的一個(gè)治療靶點(diǎn)[35]。目前在該基因肺癌中研究比較深入，且認(rèn)為是一個(gè)潛在的致癌基因[36]。

圖 1.1 癌組織中 SETDB1 陽(yáng)性表達(dá)re 1.1 positive expressionof SETDBl in CRC直腸癌組織及癌旁正常黏膜中 SETDB11-1 Expressions of SETDB1 in the adjacentmucosa and CRC tissuesSETDB1 的表達(dá) 陽(yáng)性率（%） 2陰性 陽(yáng)性49 21 30682 68 97.14
【學(xué)位授予單位】：西南醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R735.34

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2516384