【摘要】：背景和目的:胃癌是全世界范圍內(nèi)第四大常見的惡性腫瘤,在我國,其死亡率占各大腫瘤之首,對人類的健康造成極大的威脅。目前,越來越多的醫(yī)學(xué)界人士認(rèn)識到腫瘤化學(xué)預(yù)防在防治腫瘤中的重要性。據(jù)研究報(bào)道通過采用合適的膳食調(diào)整方案可以阻止超過30%的人類腫瘤的發(fā)生。因此,膳食結(jié)構(gòu)調(diào)整是一種降低胃癌的發(fā)病率的備選策略。據(jù)研究報(bào)道,攝入大量的新鮮水果、蔬菜及豆制品與較低的胃癌發(fā)病率密切相關(guān)。大豆中含有多種生物活性物質(zhì),其中,以大豆素(Daidzein)和染料木黃酮(Genistein)為主要成分的大豆異黃酮因其具有抗腫瘤、預(yù)防骨質(zhì)疏松癥、改善婦女更年期癥狀、防治心血管疾病等多種生物活性,而受到國內(nèi)外學(xué)者的廣泛關(guān)注。雌馬酚是大豆素的代謝產(chǎn)物,研究進(jìn)一步發(fā)現(xiàn),人群只有30%-50%的個(gè)體能將大豆異黃酮代謝為雌馬酚,而只有代謝為雌馬酚的大豆異黃酮才能發(fā)揮其生物學(xué)活性,因此雌馬酚因具有更高的生物學(xué)活性而受到普遍關(guān)注,成為目前研究的一個(gè)熱點(diǎn)。雌馬酚的腫瘤化學(xué)預(yù)防作用已經(jīng)在乳腺癌及前列腺癌等一系列的人類腫瘤中得到了證實(shí),但雌馬酚在人胃癌細(xì)胞中的作用卻幾乎未見報(bào)道。因此本研究選取人胃癌MGC-803及SGC-7901細(xì)胞為體外研究對象,觀察雌馬酚對人胃癌細(xì)胞的增殖抑制作用、凋亡誘導(dǎo)作用,并研究其可能的抗腫瘤機(jī)制。希望通過本研究為胃癌的防治提供新的思路,為進(jìn)一步開發(fā)利用雌馬酚提供科學(xué)依據(jù)。研究方法:采用MTS實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞生長活性、免疫熒光技術(shù)檢測核增殖抗原Ki67的表達(dá),從而檢測雌馬酚對細(xì)胞增殖的影響;流式細(xì)胞術(shù)碘化丙啶(PI)染色檢測細(xì)胞周期、Annexin V/PI雙染檢測細(xì)胞凋亡及JC-1染色檢測線粒體膜通透性改變;熒光定量PCR和western blot檢測細(xì)胞周期相關(guān)因子和凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)以及MAPK及AKT信號通路相關(guān)蛋白的表達(dá);加用各種阻斷劑,檢測MAPK及AKT信號通路在雌馬酚導(dǎo)致細(xì)胞增殖抑制和細(xì)胞凋亡中的作用。結(jié)果1.雌馬酚抑制了人胃癌MGC-803及SGC-7901細(xì)胞的生長活性,降低了MGC-803細(xì)胞Ki67的m RNA和蛋白的表達(dá)。2.雌馬酚導(dǎo)致人胃癌MGC-803及SGC-7901細(xì)胞周期停滯在G0/G1期,并且降低了MGC-803細(xì)胞CDK2/4、Cyclin D1、Cyclin E1的表達(dá),增加了P21~(WAF1)的表達(dá)。3.雌馬酚明顯引起了人胃癌MGC-803及SGC-7901細(xì)胞的凋亡;導(dǎo)致了MGC-803細(xì)胞Caspase-3、Caspase-9及PARP裂解片段的出現(xiàn),降低了Bcl-2家族成員Bid、Bcl-x L及凋亡抑制蛋白c IAP1的表達(dá);顯著降低了線粒體膜電位水平。4.雌馬酚促進(jìn)了MGC-803細(xì)胞ERK的持續(xù)的活化,但沒有改變JNK和P-38的磷酸化水平。MEK/ERK通路的阻斷劑U0126預(yù)處理細(xì)胞后,雌馬酚對細(xì)胞的生長活性有部分的升高,雌馬酚導(dǎo)致的凋亡細(xì)胞所占的比例有所降低,并且其引起的PARP裂解片段的表達(dá)有所降低,但是雌馬酚導(dǎo)致的G0/G1期細(xì)胞所占的比例有所升高。5.雌馬酚引起了MGC-803細(xì)胞P-AKT(Thr450)位點(diǎn)持續(xù)的去磷酸化(從作用12h開始),呈現(xiàn)時(shí)間及劑量反應(yīng)關(guān)系,對P-AKT(Thr308)和P-AKT(Ser473)位點(diǎn)的影響經(jīng)歷了先升高后降低的過程。PI3K/AKT通路的阻斷劑LY294002降低了P-AKT(Thr308)和P-AKT(Ser473)的表達(dá),但是沒有影響到AKT在Thr450位點(diǎn)的磷酸化水平。LY294002預(yù)處理細(xì)胞后降低了細(xì)胞的生長活性、增加了細(xì)胞周期阻滯和細(xì)胞凋亡水平。結(jié)論雌馬酚抑制人胃癌細(xì)胞的增殖,導(dǎo)致G0/G1期細(xì)胞周期的阻滯,并且誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。ERK的持續(xù)活化及AKT在Thr450位點(diǎn)的去磷酸化可能在雌馬酚誘導(dǎo)的人胃癌細(xì)胞的增殖抑制和細(xì)胞凋亡中起到重要的作用。此外,我們的研究還發(fā)現(xiàn)細(xì)胞周期調(diào)節(jié)因子和細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白,比如CDK2/4,Cyclin D1/E1,p21WAF1,Bcl-x L,Bid,c IAPI,Caspase-3、Caspase-9和PARP裂解片段的出現(xiàn)參與了上述過程的調(diào)控。以上數(shù)據(jù)提示:雌馬酚有可能成為胃癌預(yù)防和治療的新的藥物。
文內(nèi)圖片：
圖片說明： 結(jié)果與分析 1. 雌馬酚對人胃癌細(xì)胞細(xì)胞增殖的影響1.1 雌馬酚抑制人胃癌細(xì)胞的生長活性我們采用 MTS 實(shí)驗(yàn)來檢測雌馬酚對胃癌細(xì)胞的生長活性的影響。如圖 1 所示：雌馬酚處理細(xì)胞一定的時(shí)間，對人胃癌 MGC-803 及 SGC-7901 均有一定程度的生長抑制作用，并呈現(xiàn)時(shí)間及劑量的依賴性。但兩株細(xì)胞對雌馬酚的敏感度有一定的差異：在雌馬酚濃度達(dá)到 5μΜ 時(shí)，就表現(xiàn)出對 MGC-803 細(xì)胞的生長抑制作用（見圖 1B），但對于 SGC-7901 細(xì)胞，只有雌馬酚濃度達(dá)到 50μΜ 時(shí)才表現(xiàn)出明顯的抗增殖作用（見圖 1A）。經(jīng)過 24、48 及 72h 后，雌馬酚在 SGC-7901 細(xì)胞中的IC50分別為 260、161 及 110 μΜ；而雌馬酚處理 MGC-803 細(xì)胞 24、36 及 48h 后，，其在細(xì)胞中的 IC50分別為 180.10、 19.98 和 13.93 μΜ。
文內(nèi)圖片：
圖片說明：雌馬酚對Ki67mRNA表達(dá)的影響
【學(xué)位授予單位】：福建醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R735.2

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 馮曉慧;蔡東聯(lián);;雌馬酚的生物活性和臨床應(yīng)用[J];氨基酸和生物資源;2009年02期

2 金迪;蔡東聯(lián);張玉珍;馮曉慧;周金花;;172名上海地區(qū)成人飲食及尿雌馬酚和代謝產(chǎn)物的調(diào)查研究[J];氨基酸和生物資源;2009年04期

3 劉寶花;劉愛萍;內(nèi)山成人;上野友美;李雪駝;王培玉;;北京地區(qū)成人雌馬酚代謝表型及其影響因素研究[J];衛(wèi)生研究;2010年01期

4 江國虹;王卓;田穎;;雌馬酚生理功能的研究進(jìn)展[J];中華疾病控制雜志;2010年04期

5 劉寶花;劉愛萍;內(nèi)山成人;上野友美;小野田墩子;李雪駝;王培玉;;北京市成人雌馬酚代謝水平及健康效應(yīng)[J];中國公共衛(wèi)生;2010年06期

6 蔡莉;王培玉;張玉梅;;雌馬酚產(chǎn)出相關(guān)細(xì)菌研究進(jìn)展[J];世界華人消化雜志;2010年13期

7 王洋;張玉梅;;雌馬酚人體代謝的研究進(jìn)展[J];衛(wèi)生研究;2010年06期

8 劉寶花;秦立強(qiáng);劉愛萍;史宇暉;王培玉;;北京地區(qū)成人雌馬酚代謝表型與血清性激素關(guān)系研究[J];衛(wèi)生研究;2011年06期

9 李笑梅;張娜;賈冰心;;測定雌馬酚的紫外法建立與應(yīng)用[J];食品工業(yè)科技;2012年24期

10 王宇;尹業(yè)師;朱立穎;王欣;;人糞樣中雌馬酚含量調(diào)查及其與菌群結(jié)構(gòu)相關(guān)性研究[J];中國微生態(tài)學(xué)雜志;2013年07期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 王洋;張玉梅;;雌馬酚人體代謝的研究進(jìn)展[A];營養(yǎng)與慢性病——中國營養(yǎng)學(xué)會(huì)第七屆理事會(huì)青年工作委員會(huì)第一次學(xué)術(shù)交流會(huì)議論文集[C];2010年

2 秦玉;糜漫天;;雌馬酚的生物學(xué)效應(yīng)研究進(jìn)展[A];重慶市營養(yǎng)學(xué)會(huì)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2010年

3 倪迎冬;魏曉靜;張春曉;鐘遠(yuǎn);趙茹茜;;胚內(nèi)注射雌馬酚對肉雞甘油三脂和膽固醇代謝的影響[A];“基因、進(jìn)化與生理功能多樣性”海內(nèi)外學(xué)術(shù)研討會(huì)暨中國生理學(xué)會(huì)第七屆比較生理學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要[C];2009年

4 金迪;蔡東聯(lián);張玉珍;馮曉慧;周金花;;172名上海地區(qū)成人飲食及尿雌馬酚和代謝產(chǎn)物的調(diào)查研究[A];生命發(fā)展機(jī)遇——窗口期營養(yǎng)——達(dá)能營養(yǎng)中心第十二屆學(xué)術(shù)年會(huì)會(huì)議論文集[C];2009年

5 郭開平;張波;陳裕明;陳超剛;蘇宜香;;廣州居民24小時(shí)尿雌馬酚排出現(xiàn)狀調(diào)查[A];中國營養(yǎng)學(xué)會(huì)第十次全國營養(yǎng)學(xué)術(shù)會(huì)議暨第七屆會(huì)員代表大會(huì)論文摘要匯編[C];2008年

6 蔡東聯(lián);金迪;馮曉慧;張玉珍;林寧;王瑩;曲丹;鄭慧;;上海地區(qū)居民尿排出雌馬酚研究[A];中國營養(yǎng)學(xué)會(huì)第十次全國營養(yǎng)學(xué)術(shù)會(huì)議暨第七屆會(huì)員代表大會(huì)論文摘要匯編[C];2008年

7 王建;糜漫天;;高效液相色譜法分析人群尿中雌馬酚水平[A];中國營養(yǎng)學(xué)會(huì)第十次全國營養(yǎng)學(xué)術(shù)會(huì)議暨第七屆會(huì)員代表大會(huì)論文摘要匯編[C];2008年

8 劉寶花;內(nèi)山成人;上野友美;王培玉;;北京地區(qū)成人雌馬酚產(chǎn)生者及與大豆類食品攝入量關(guān)系研究[A];中國營養(yǎng)學(xué)會(huì)第十次全國營養(yǎng)學(xué)術(shù)會(huì)議公共營養(yǎng)分會(huì)論文集[C];2008年

9 劉寶花;內(nèi)山成人;上野友美;王培玉;;北京地區(qū)成人雌馬酚產(chǎn)生者及與大豆類食品攝入量關(guān)系研究[A];中國營養(yǎng)學(xué)會(huì)第十次全國營養(yǎng)學(xué)術(shù)會(huì)議暨第七屆會(huì)員代表大會(huì)論文摘要匯編[C];2008年

10 王萌;任國峰;;雌馬酚抑制人乳腺癌MCF-7細(xì)胞增殖及機(jī)制研究[A];達(dá)能營養(yǎng)中心青年科學(xué)工作者論壇優(yōu)秀論文集2014年第1期[C];2014年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前2條

1 本報(bào)記者 王寧采訪整理;大豆分離蛋白干預(yù)效果明顯[N];中國食品報(bào);2011年

2 健康時(shí)報(bào)記者 余易安;黃豆作用不是增加雌激素[N];健康時(shí)報(bào);2008年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

1 楊志平;雌馬酚抑制人胃癌細(xì)胞生長及其相關(guān)機(jī)制的研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2015年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 許艷麗;飲用豆?jié){和奶粉對學(xué)齡前兒童腸道代謝功能的影響[D];鄭州大學(xué);2016年

2 李靜;外消旋體雌馬酚體外抗癌作用研究[D];河北農(nóng)業(yè)大學(xué);2008年

3 史成陽;（S）-雌馬酚的全合成[D];黑龍江大學(xué);2012年

4 李巖;人體腸道內(nèi)產(chǎn)雌馬酚菌的分離及其性質(zhì)的研究[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2012年

5 姜雪;利用人體腸道菌發(fā)酵豆芽制備雌馬酚的研究[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2013年

6 賈冰心;素食者降解大豆異黃酮產(chǎn)生雌馬酚菌的分離與鑒定[D];哈爾濱商業(yè)大學(xué);2014年

7 郭遠(yuǎn)洋;生物催化大豆苷元產(chǎn)S-雌馬酚菌株篩選及其轉(zhuǎn)化特性研究[D];華僑大學(xué);2012年

8 謝雁景;5-羥基-雌馬酚產(chǎn)生菌的分離、耐氧馴化及耐氧機(jī)制研究[D];河北農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

9 劉慧;雌馬酚對大鼠血管張力和心肌缺血/再灌注損傷的作用[D];山西醫(yī)科大學(xué);2008年

10 孫小燕;豆粕中異黃酮的微生物降解及降解產(chǎn)物提取的研究[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2009年

本文編號：2514192