【摘要】：腫瘤源性血栓形成特指由于明確腫瘤誘因所導(dǎo)致的血栓形成和血栓栓塞。在動(dòng)脈系統(tǒng)主要要表現(xiàn)為腦中風(fēng)和心肌梗死,其發(fā)病率為1.5%-3.1%不等；而靜脈系統(tǒng)受累主要包括深靜脈血栓形成和肺動(dòng)脈栓塞,發(fā)病率約有15%-20%,同時(shí)近5%的腫瘤患者是在進(jìn)行其他項(xiàng)目檢查時(shí)意外發(fā)現(xiàn)肺栓塞。腫瘤的發(fā)生部位、類型、分期、分級(jí),及治療方法都會(huì)影響腫瘤患者發(fā)生靜脈血栓的發(fā)病率,其中腫瘤類型被認(rèn)為與發(fā)病率的關(guān)系最為密切,大量研究表明肺癌,胰腺癌,胃癌,卵巢癌等腫瘤患者較其他腫瘤患者更容易出現(xiàn)靜脈血栓,其原因多與腺癌細(xì)胞分泌大量黏蛋白等促凝因子相關(guān)。目前,靜脈血栓形成已經(jīng)成為癌癥患者除去原發(fā)腫瘤外的首要死亡原因,是影響腫瘤患者治療和預(yù)后的重要危險(xiǎn)因素。由于腫瘤患者同時(shí)存在血液高凝狀態(tài)和凝血功能紊亂,同時(shí)腫瘤患者體內(nèi)的靜脈血栓除去血液成分以外還摻雜有腫瘤細(xì)胞,因此在接受常規(guī)抗凝治療后,治療效果并不滿意,甚至伴有大出血的風(fēng)險(xiǎn)。因而探明腫瘤誘導(dǎo)血栓形成的具體機(jī)制,尋找到新的腫瘤源性靜脈血栓治療方向成為目前的研究熱點(diǎn)。腫瘤誘導(dǎo)血栓形成主要包括兩方面：一是腫瘤細(xì)胞憑借自身的高侵襲性穿過血管內(nèi)皮屏障進(jìn)入血液循環(huán)系統(tǒng)；二是與血液成分接觸的腫瘤細(xì)胞通過相關(guān)機(jī)制調(diào)節(jié)促凝因子的釋放,在引發(fā)血栓形成的同時(shí)隨著血液循環(huán)進(jìn)行遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。目前,腫瘤誘導(dǎo)靜脈血栓形成的研究焦點(diǎn)已不再集中于半胱氨酸蛋白酶對(duì)于直接因子X的激活,而是轉(zhuǎn)向以組織因子相關(guān)凝血途徑為代表的外源性凝血途徑的激活。腫瘤細(xì)胞表達(dá)的組織因子和粘蛋白被認(rèn)為在血栓形成過程中起到重要促凝作用。組織因子的大量釋放不僅有助于原癌基因的表達(dá)和抑癌基因的抑制,同時(shí)還協(xié)助腫瘤血管生成從而增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的侵襲性。去整合素金屬蛋白酶(A disintegrin and metalloproteases, ADAMs)是一類具有八個(gè)不同結(jié)構(gòu)域的1型跨膜蛋白,因該族蛋白含有金屬蛋白酶結(jié)構(gòu)域和去整合素結(jié)構(gòu)域,因此被認(rèn)為在細(xì)胞分化和遷移過程中對(duì)于細(xì)胞因子和粘附分子的釋放起到重要作用。ADAM 17因?yàn)閷?duì)腫瘤相關(guān)因子的分泌有促進(jìn)功能因此已經(jīng)在腫瘤細(xì)胞中得到深入研究,與其結(jié)構(gòu)極為相似的ADAM 10最初在阿爾茨海默癥的研究中得到廣泛關(guān)注,因此其研究多集中在神經(jīng)和胚胎系統(tǒng),而在腫瘤領(lǐng)域的研究正逐步展開。本研究將探討在腺癌細(xì)胞系中ADAM 10對(duì)于腫癌遷移能力和侵襲性的影響,以及對(duì)于相關(guān)促凝血因子分泌的調(diào)節(jié)作用,從而為腫瘤患者靜脈血栓治療新靶點(diǎn)的研究提供理論支持。第一部分ADAM10對(duì)腺癌細(xì)胞遷移力和侵襲性的調(diào)節(jié)目的：為了明確ADAM10在mRNA和蛋白水平的降低是否會(huì)引起四種腺癌細(xì)胞的遷移能力和侵襲性發(fā)生相應(yīng)變化。方法：對(duì)人非小細(xì)胞肺腺癌細(xì)胞系A(chǔ)549,人結(jié)直腸腺癌上皮細(xì)胞系DLD-1,人乳腺癌細(xì)胞系MCF-7和人胰腺導(dǎo)管腺癌細(xì)胞系PANC-1四種腺癌細(xì)胞進(jìn)行分組設(shè)置,其中進(jìn)行ADAM10小RNA干擾(Small interfering RNA, siRNA)的細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)組,未經(jīng)過轉(zhuǎn)染處理的細(xì)胞為對(duì)照組。首先使用免疫熒光的方法檢測(cè)目的分子在腺癌細(xì)胞中的表達(dá)情況：其次分別使用劃痕實(shí)驗(yàn)檢驗(yàn)其遷移能力的改變；[ranswell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)其侵襲能力的改變；同時(shí)使用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Real time polymerase chain reaction, Real-Time PCR)和蛋白質(zhì)印跡法(Western Blot)檢測(cè)ADAM10,粘蛋白MUCl和VEGFR-2在mRNA和蛋白水平的改變。結(jié)果：在免疫熒光結(jié)果中,四種腺癌細(xì)胞膜表面均可以見到ADAM10, MUC1和VEGFR-2的表達(dá)。進(jìn)行ADAM10 siRNA轉(zhuǎn)染后,四種腺癌細(xì)胞實(shí)驗(yàn)組較其對(duì)照組在遷移能力和侵襲能力方面均減弱。在mRNA水平, ADAM10在PANC-1中表達(dá)最多,MUC1在MCF-7中表達(dá)最多, VEGFR-2在PANC-1中表達(dá)最多；在蛋白水平, ADAM10在A549中表達(dá)最高,MUC1在MCF-7表達(dá)最高,VEGFR-2在A549中表達(dá)最高。ADAM10, MUC1和VEGFR-2在mRNA和蛋白水平的表達(dá)在實(shí)驗(yàn)組較對(duì)照組均有所下降。結(jié)論：ADAM10在mRNA和蛋白水平的表達(dá)降低能夠引起四種腺癌細(xì)胞的遷移能力和侵襲能力發(fā)生減弱,這種減弱可能與MUC1和VEGFR-2的表達(dá)降低相關(guān)。第二部分ADAM10對(duì)腺癌細(xì)胞促凝血因子釋放的調(diào)節(jié)目的：為了明確ADAM 10在mRNA和蛋白水平的降低是否會(huì)引起四種腺癌細(xì)胞所分泌的促凝血相關(guān)因子的表達(dá)發(fā)生相應(yīng)變化。方法：將四種腺癌細(xì)胞根據(jù)是否進(jìn)行ADAM10siRNA轉(zhuǎn)染分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組。使用免疫熒光的方法檢測(cè)目的分子在腫瘤細(xì)胞中的表達(dá)情況；Real-Time PCR和Wsetern Blot方法分別檢測(cè)ADAM 10, PSGL-1和TF在mRNA和蛋白水平的改變。結(jié)果： 在免疫熒光結(jié)果中,四種腺癌細(xì)胞中均可以見到ADAM 10, PSGL-1和TF在細(xì)胞膜表面表達(dá)。進(jìn)行ADAM 10 siRNA轉(zhuǎn)染后,在mRNA水平,ADAM 10在PANC-1中表達(dá)最多,PSGL-1在PANC-1中表達(dá)最多,TF在DLD-1中表達(dá)最多：在蛋白水平,ADAM 10在A549中表達(dá)最高,PSGL-1在PANC-1表達(dá)最高,TF在A549中表達(dá)最高。在Real-Time PCR和Wsetern Blot結(jié)果中,經(jīng)過轉(zhuǎn)染處理后的實(shí)驗(yàn)組中所有目的分子的表達(dá)均較對(duì)照組有所下降。結(jié)論：ADAM 10在mRNA和蛋白水平的表達(dá)降低能夠引起四種腺癌細(xì)胞所分泌的凝血相關(guān)因子PSGL-1和TF的表達(dá)相應(yīng)減少,這種調(diào)控與腫瘤源性靜脈血栓形成中的高凝狀態(tài)改變相關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R730.2

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 劉愛華;鄭幼橋;;少量腹水中查到腺癌細(xì)胞1例[J];檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床;2013年23期

2 孫亞軍;李梅;吳建農(nóng);付先利;肖栩;劉穎;;細(xì)胞塊技術(shù)聯(lián)合免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)漿膜腔積液中腺癌細(xì)胞的價(jià)值[J];實(shí)用醫(yī)技雜志;2013年09期

3 沈建炳;虞積耀;;呼吸困難,腹部腫塊,胸腹水,腺癌細(xì)胞[J];海軍醫(yī)學(xué);1986年04期

4 吳廣平,王恩華,李建華,張福會(huì),蘇若萍,徐彥平,劉冬娟,宋今丹;肺癌患者胸水中腺癌細(xì)胞的超微病理診斷[J];電子顯微學(xué)報(bào);2005年05期

5 季晨陽(yáng),張義勛;胸水腺癌細(xì)胞中期染色體掃描電鏡樣品制作方法[J];臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志;1991年01期

6 彭善友,黎輝,汪艷,王則勝;胸腹水中腺癌細(xì)胞的圖像分析研究[J];湖北醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);1999年01期

7 楊萬勇,李永紅,杜宗孝,滕萬鐘;胸水瑞氏染色發(fā)現(xiàn)腺癌細(xì)胞1例[J];寧夏醫(yī)學(xué)雜志;1999年08期

8 周春輝;申洪;;胸腔積液中腺癌細(xì)胞甲狀腺轉(zhuǎn)錄因子-1表達(dá)的定量研究[J];中國(guó)體視學(xué)與圖像分析;2007年03期

9 孫才新,姚陳果,熊蘭,米彥,廖瑞金,胡麗娜,胡婭;陡脈沖電場(chǎng)對(duì)惡性腫瘤細(xì)胞殺傷效應(yīng)的研究[J];生物物理學(xué)報(bào);2002年04期

10 盛健惠;;免疫細(xì)胞化學(xué)在漿膜腔積液中的腺癌細(xì)胞與增生的間皮細(xì)胞鑒別診斷中應(yīng)用[J];齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2010年22期

相關(guān)會(huì)議論文 前3條

1 魯永鮮;劉靜霞;張琳;胡曼蘿;劉昕;陸江陽(yáng);;卵巢外腹膜漿液性乳頭狀癌3例臨床分析[A];紀(jì)念卓越的人民醫(yī)學(xué)家林巧稚大夫誕辰100周年——全國(guó)婦產(chǎn)科高級(jí)學(xué)術(shù)論壇論文集[C];2001年

2 白靜;閆承慧;張小玲;馬琳琳;孟祥寧;王哲;傅松濱;李璞;;轉(zhuǎn)移能力不同的腺癌細(xì)胞系A(chǔ)nip973和AGZY83-a的蛋白質(zhì)組學(xué)研究[A];中國(guó)細(xì)胞生物學(xué)學(xué)會(huì)第八屆會(huì)員代表大會(huì)暨學(xué)術(shù)大會(huì)論文摘要集[C];2003年

3 俞靖龍;周道銀;王學(xué);;腫瘤相關(guān)的膽固醇性胸腔積液1例[A];第十屆全軍檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2005年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

1 于淼;ADAM10在腺癌細(xì)胞中對(duì)促凝血相關(guān)因子的調(diào)節(jié)作用[D];華中科技大學(xué);2016年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前2條

1 郭正武;Napsin A、TTF-1等五種抗體鑒別漿膜腔積液腺癌細(xì)胞來源的臨床研究[D];吉林大學(xué);2016年

2 周曄;EpCAM特異性免疫效應(yīng)細(xì)胞對(duì)EpCAM~(high)腺癌細(xì)胞的體外殺傷實(shí)驗(yàn)研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2014年

，

本文編號(hào)：2513501