【摘要】：轉(zhuǎn)移是引起惡性腫瘤死亡的主要生物學(xué)特性和原因。腫瘤轉(zhuǎn)移的步驟包含相應(yīng)的順序以及相關(guān)聯(lián)的步驟過程,其中很多步驟受到上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)的影響。腫瘤細胞獲得間充質(zhì)特性的能力,可以增強細胞的遷移和侵襲能力、誘發(fā)腫瘤細胞的干細胞特性,并抑制細胞凋亡和程序性衰老,使腫瘤細胞發(fā)生轉(zhuǎn)移。上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)的過程已經(jīng)被報道在多種惡性腫瘤中發(fā)揮作用包括結(jié)腸癌(CRC)。結(jié)腸癌(CRC)是發(fā)生在結(jié)腸部位的消化道腫瘤,為我國最常見的惡性腫瘤之一,近年來發(fā)病率不斷增高,嚴重危害了人們的身體健康。在美國,因癌癥死亡的惡心腫瘤中結(jié)腸癌(CRC)位居第三位,據(jù)報告每年大約造成50000人左右死亡。雖然手術(shù)結(jié)合輔助治療提高了結(jié)腸癌(CRC)的預(yù)后生存率,但是仍有大約一半的患者發(fā)生了轉(zhuǎn)移。抑制結(jié)腸癌(CRC)的轉(zhuǎn)移是改善結(jié)腸癌(CRC)的發(fā)生發(fā)展及其預(yù)后的有效治療策略。微小RNA(miRNAs)是一類通過與靶基因的3′非編碼區(qū)(UTR)相結(jié)合,從而在轉(zhuǎn)錄水平調(diào)控靶基因蛋白表達水平的非編碼單鏈小核糖核酸(RNA)分子。一些研究表明miRNAs可以作為調(diào)控上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)的重要抑制劑或啟動子。SMAD蛋白家庭成員3(Smad3)作為TGF-β信號通路的下游的一個關(guān)鍵因素,同時也是惡性腫瘤如結(jié)腸癌(CRC)發(fā)生上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)的一個至關(guān)重要的誘導(dǎo)物。TGF-β結(jié)合兩個跨膜受體,I型(TGFBRI)和II型(TGFBRII),導(dǎo)致Smad2(p-s Smad2)和Smad3(p-Smad3)磷酸化,同時活化物在細胞核內(nèi)與Smad4相結(jié)合,結(jié)合物可以調(diào)節(jié)下游上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)相關(guān)基因的表達。有研究確認,Smad3是micro RNA-140-5p(miR-140)的直接靶點。miR-140首次明確發(fā)現(xiàn)是于斑馬魚和小鼠胚胎的軟骨發(fā)育包括長和扁骨發(fā)生發(fā)展中,miR-140可以抑制結(jié)腸癌干細胞(CSC)的生存和轉(zhuǎn)移可能通過抑制Smad2和自噬來完成的。下調(diào)miR-140誘導(dǎo)上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)的發(fā)生,促進腫瘤細胞侵襲和轉(zhuǎn)移可能是通過調(diào)控靶基因Slug來完成的。miR-140在影響結(jié)腸癌(CRC)侵襲和轉(zhuǎn)移的機制有待進一步研究。第一部分miR-140靶向調(diào)控Smad3基因的表達研究目的:驗證Smad3確為miR-140的靶點。方法:在結(jié)腸癌細胞系HCT116和RKO中通過瞬時轉(zhuǎn)染,使miR-140上調(diào)或者下調(diào),并且同時轉(zhuǎn)染沉默Smad3的模擬物(si RNA),通過q RT-PCR測量轉(zhuǎn)染后,miR-140的表達高低變化,以及Smad3 m RNA。應(yīng)用免疫印跡的方法檢測Smad3和p-Smad3蛋白變化,來驗證轉(zhuǎn)染率,以及小RNA miR-140與基因Smad3之間的關(guān)系。CCK8實驗檢測miR140對細胞增殖的影響。通過平板克隆形成實驗來檢測miR-140對結(jié)腸癌細胞HCT116和RKO細胞克隆形成能力的影響;結(jié)果:通過熒光q RT-PCR檢測,轉(zhuǎn)染miR-140的結(jié)腸癌細胞HCT116和RKO中與對照組相比,miR140組中的miR-140表達增高,具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01);與對照組相比,上調(diào)miR-140后Smad3 m RNA含量無增減變化,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。免疫印跡結(jié)果顯示,與對照組相比miR-140組Smad3和p-Smad3的蛋白含量降低,且具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01),并且抑制了腫瘤細胞的生長和細胞克隆形成的能力(P0.01)。而在結(jié)腸癌細胞HCT116和RKO中轉(zhuǎn)染,使miR-140低表達能使細胞中Smad3和p-Smad3蛋白表達增高(P0.01),并且促進了腫瘤細胞的生長和細胞的克隆形成能力;而miR-140抑制劑和Smad3 si RNA共轉(zhuǎn)染對Smad3和p-Smad3蛋白表達和腫瘤生長、細胞的克隆形成能力無明顯影響(P0.05)結(jié)論:上調(diào)miR-140可使Smad3和p-Smad3表達降低,但不影響Smad3 m RNA的表達,并且抑制了腫瘤細胞的生長:相反使miR-140的表達降低,可升高Smad3和p-Smad3的含量,并且促進腫瘤生長。miR-140能夠靶向調(diào)控基因Smad3的表達來影響腫瘤生長、細胞的克隆形成能力。第二部分miR-140調(diào)控EMT的作用機制研究目的:通過體外實驗探討miR-140調(diào)控EMT對結(jié)腸癌細胞HCT116和RKO遷移和侵襲能力的影響。方法:在結(jié)腸癌細胞系HCT116和RKO中通過瞬時轉(zhuǎn)染,使miR-140上調(diào)或者下調(diào),并且同時轉(zhuǎn)染沉默Smad3的模擬物(si RNA),通過劃痕實驗和Transwell遷移和侵襲實驗,研究高表達或低表達miR-140對結(jié)腸癌細胞系HCT116和RKO遷移和侵襲能力的作用方式。免疫印跡和免疫熒光細胞化學(xué)法研究EMT相關(guān)蛋白E-cadherin及Vimentin的含量變化。探討miR-140在結(jié)腸癌細胞遷移侵襲中的作用及其調(diào)控機制。結(jié)果:劃痕實驗結(jié)果顯示,與對照組相比miR-140組細胞的遷移能力減弱,細胞的遷移距離具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01);Transwell遷移和侵襲實驗的結(jié)果顯示,與Con和NC等對照組相比,miR-140組的穿膜細胞數(shù)明顯減少,且差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01)。EMT相關(guān)分子E-cadherin表達增高,而Vimentin表達減少(P0.01)。si Smad3組與miR-140組的作用相比,其差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);與Con和NC等對照組相比使miR-140表達降低,促進細胞的遷移和侵襲能力,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01),EMT相關(guān)分子E-cadherin表達減少,而Vimentin表達增高(P0.01)。而miR-140抑制劑和Smad3 si RNA共轉(zhuǎn)染時細胞的遷移和侵襲能力無明顯變化(P0.05)。結(jié)論:miR-140的過表達抑制結(jié)腸癌細胞HCT116和RKO的遷移和侵襲能力,阻滯了EMT的發(fā)生;miR-140的表達降低則促進EMT的發(fā)生,增高結(jié)腸癌細胞HCT116和RKO的遷移和侵襲能力。同時使miR-140表達降低和沉默Smad3,則對結(jié)腸癌細胞HCT116和RKO遷移和侵襲的能力和EMT的發(fā)生無明顯影響。第三部分miR-140對結(jié)腸癌HCT-116細胞裸鼠移植瘤生長和轉(zhuǎn)移的抑制作用目的:探討過表達miR-140抑制裸鼠移植瘤的機制方法:將裸鼠通過背部或尾靜脈注射的方法,各組分別注射慢病毒感染的miR-140細胞、陰性對照細胞、和沉默Smad3的細胞,并采用免疫組織化學(xué)染色和western blotting技術(shù)分析相關(guān)蛋白的表達情況。結(jié)果:過表達miR-140組或下調(diào)Smad3組移植瘤體積較小,生長緩慢并且轉(zhuǎn)移率較低。腫瘤組織中Smad3,p-Smad3,Vimentin和Zeb1表達減低,E-cadherin表達增高。結(jié)論:過表達miR-140能明顯抑制裸鼠移植瘤的生長,并可能通過抑制Smad3蛋白的表達來完成的。
文內(nèi)圖片：
圖片說明： 定量 qPCR：結(jié)果顯示轉(zhuǎn)染后的 HCT116 和 RKO 細胞中 miR-140 表達水平與 NC增高，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義（**:p<0.01）。0 上調(diào)對 Smad3 表達的影響生物信息學(xué)軟件 TargetScan（www.targetscan.com）分析結(jié)果提示，miRNA3'-UTR 端存在互補配對（圖 1-2）。圖 1-2 miR-140 與 Smad3 序列配對結(jié)果tern blotting(免疫印跡)結(jié)果示，與 Con 和 NC 照組相比，miR-140 可以使 Smad3 和 p-Smad3 的蛋白異具有統(tǒng)計學(xué)意義（**:p<0.01），而與 Smad3 siRNA 組水平相當（圖
文內(nèi)圖片：
圖片說明： 表達水平為其的 1.09 和 1.167 倍，兩者之間差異不具有統(tǒng)計學(xué)意義（p> 0.05，，圖 1-1）。 1-1 熒光定量 qPCR：結(jié)果顯示轉(zhuǎn)染后的 HCT116 和 RKO 細胞中 miR-140 表達水平與 NC 組和ntrol 組顯著增高，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義（**:p<0.01）。 miR-140 上調(diào)對 Smad3 表達的影響2.1 通過生物信息學(xué)軟件 TargetScan（www.targetscan.com）分析結(jié)果提示，miR-140 Smad3 mRNA3'-UTR 端存在互補配對（圖 1-2）。
【學(xué)位授予單位】：大連醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R735.35

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 ;橄欖油防結(jié)腸癌[J];安徽科技;2000年10期

2 鄭應(yīng)芳;結(jié)腸癌誤診8例報道[J];安徽預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志;2000年06期

3 馮智;結(jié)腸癌并發(fā)急腹癥16例誤診分析[J];包頭醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2000年04期

4 馬致祥;22例結(jié)腸癌誤診觀察[J];蘭州醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2000年04期

5 李祁新;結(jié)腸癌誤診闌尾炎7例分析[J];農(nóng)墾醫(yī)學(xué);2000年01期

6 陳偉輝;103例結(jié)腸癌臨床分析[J];中國基層醫(yī)藥;2000年01期

7 鄭應(yīng)芳,鄒慧民;結(jié)腸癌誤診8例報道[J];河南外科學(xué)雜志;2000年02期

8 ;蔬菜水果不能降低結(jié)腸癌危險[J];浙江中醫(yī)雜志;2001年03期

9 陳友恒;12例老年人結(jié)腸癌誤診闌尾膿腫原因分析[J];福建醫(yī)藥雜志;2001年04期

10 Aloys LA,廖小燕,常元勛;紅肉與結(jié)腸癌[J];國外醫(yī)學(xué)(衛(wèi)生學(xué)分冊);2001年03期

相關(guān)會議論文 前10條

1 張體嶺;王琳;;急診以闌尾炎為首發(fā)癥狀的結(jié)腸癌(附11例分析)[A];中華醫(yī)學(xué)會全國第五次急診醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會議論文集[C];1994年

2 Paulo M.Hoff;;結(jié)腸癌化療的最新進展(英文)[A];中國醫(yī)師協(xié)會內(nèi)鏡醫(yī)師分會成立大會、中國第十四屆內(nèi)鏡醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)大會、《中國內(nèi)鏡雜志》創(chuàng)刊十周年學(xué)術(shù)討論會、恩德思獎（Endoscopics Award）頒獎大會論文匯編(一)[C];2005年

3 梁忠炎;張勻;陳作兵;陳中華;郭豐;高原;周永慶;;以急腹癥為表現(xiàn)的結(jié)腸癌72例診療分析[A];2007年浙江省急診醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2007年

4 劉敏;顧婧;張晶;申秀錦;鄧紅;;結(jié)腸癌的傅立葉紅外光譜分析[A];2009年浙江省病理學(xué)學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2009年

5 張瑜;王磊;郭繼中;;結(jié)腸癌的早期診斷[A];第二十二屆全國中西醫(yī)結(jié)合消化系統(tǒng)疾病學(xué)術(shù)會議暨消化疾病診治進展學(xué)習(xí)班論文匯編[C];2010年

6 張立春;;合并闌尾炎的結(jié)腸癌誤診分析[A];中華醫(yī)學(xué)會急診醫(yī)學(xué)分會第十三次全國急診醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)年會大會論文集[C];2010年

7 岳亞軍;韓元媛;溫巧生;;左右側(cè)結(jié)腸癌的臨床病理比較[A];中國中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會第十五次全國消化系統(tǒng)疾病學(xué)術(shù)研討會論文匯編[C];2003年

8 張國富;趙菊環(huán);;結(jié)腸癌內(nèi)瘺的臨床及影像學(xué)診斷[A];中華醫(yī)學(xué)會第十三屆全國放射學(xué)大會論文匯編（下冊）[C];2006年

9 李天天;;結(jié)腸癌患者住院費用影響因素分析[A];全國危重病急救醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2007年

10 王建軍;楊培金;李樹金;張永生;;螺旋CT掃描對結(jié)腸癌的診斷價值[A];第八屆全國腫瘤介入診療學(xué)術(shù)大會、第一屆中國抗癌協(xié)會腫瘤介入學(xué)護理專業(yè)學(xué)組會議暨國家級介入診療繼續(xù)教育學(xué)習(xí)班、腫瘤介入治療新進展研討會論文匯編[C];2007年

相關(guān)重要報紙文章 前10條

1 中南大學(xué)湘雅醫(yī)院教授 羅學(xué)宏;警惕藏在闌尾炎身后的結(jié)腸癌[N];大眾衛(wèi)生報;2007年

2 北京大學(xué)腫瘤醫(yī)院外科教授 顧晉邋李明;50歲起 定期篩查結(jié)腸癌[N];健康報;2007年

3 記者 鄭曉春;結(jié)腸癌與染色體變異有關(guān)[N];科技日報;2007年

4 顧鋼;早期診斷結(jié)腸癌可免去手術(shù)[N];科技日報;2007年

5 王增;貪吃容易引發(fā)結(jié)腸癌[N];衛(wèi)生與生活報;2008年

6 方留民;喝牛奶可減少結(jié)腸癌[N];中國食品質(zhì)量報;2002年

7 東南大學(xué)附屬中大醫(yī)院腫瘤中心主任 李蘇宜 吳葉青 程守勤整理;腹瀉和便秘交替警惕結(jié)腸癌[N];健康報;2009年

8 本報記者 唐夏;李明：養(yǎng)成良好飲食習(xí)慣預(yù)防結(jié)腸癌[N];中國消費者報;2010年

9 阿明;結(jié)腸癌為何“掛羊頭賣狗肉”？[N];大眾衛(wèi)生報;2004年

10 中南大學(xué)湘雅醫(yī)院急診科 教授 羅學(xué)宏;急性闌尾炎與結(jié)腸癌[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2009年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 高會杰;整合素ανβ6與ERK-ETS1信號通路在調(diào)控結(jié)腸癌侵襲轉(zhuǎn)移中的作用機制研究[D];山東大學(xué);2015年

2 郭松佳;地皮菜水應(yīng)激蛋白的制備及其抗結(jié)腸癌效應(yīng)研究[D];山西大學(xué);2015年

3 李曉琴;磁共振動態(tài)增強和彌散加權(quán)成像評估結(jié)腸癌裸鼠皮下移植瘤抗腫瘤治療效果的實驗研究[D];新疆醫(yī)科大學(xué);2016年

4 李嘉芝;miR-140在結(jié)腸癌上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化中的作用與機制研究[D];大連醫(yī)科大學(xué);2017年

5 王錫明;多層螺旋CT在結(jié)腸癌診斷和分期中的臨床應(yīng)用[D];山東大學(xué);2005年

6 邱培菊;5-羥基多甲氧基黃酮抗結(jié)腸癌活性及其分子機制研究[D];中國海洋大學(xué);2010年

7 張蒂;跨膜型腫瘤壞死因子-a單克隆抗體治療結(jié)腸癌的實驗研究[D];武漢大學(xué);2013年

8 張振亞;白細胞介素21抑制結(jié)腸癌生長的相關(guān)研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2005年

9 張青松;5’-甲基硫代腺苷對結(jié)腸癌細胞凋亡的影響及其相關(guān)機制的研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2008年

10 趙會民;癌胚抗原對結(jié)腸癌進展作用機制的初步研究[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2011年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 劉震;光動力療法對結(jié)腸癌Caco-2細胞的殺傷作用及其機制研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

2 張慧;TRPV5、TRPV6對結(jié)腸癌SW480細胞生物學(xué)行為的影響[D];遵義醫(yī)學(xué)院;2015年

3 蘭曉瑜;C-myc原癌基因啟動區(qū)G-四鏈體DNA序列對結(jié)腸癌細胞增殖的影響[D];山西醫(yī)科大學(xué);2015年

4 王爽;G四鏈體抑制結(jié)腸癌細胞增殖和血管生成的研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2015年

5 馬馳;結(jié)腸癌術(shù)后刀口感染危險因素的分析[D];山東大學(xué);2015年

6 高辛亞;結(jié)腸癌D3根治術(shù)后32例吻合口瘺原因探討與后期治療[D];山東大學(xué);2015年

7 胡盼盼;乳酸菌胞外多糖誘導(dǎo)結(jié)腸癌HT-29細胞凋亡的機制研究[D];哈爾濱工業(yè)大學(xué);2015年

8 顏斐;脂多糖對結(jié)腸癌肝轉(zhuǎn)移的影響及作用機制研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2015年

9 張偉;呼吸道合胞病毒對結(jié)腸癌的溶瘤作用研究[D];河南科技大學(xué);2015年

10 唐瑞t

本文編號：2513400