【摘要】：研究背景:肺癌是所有癌癥中發(fā)病率和死亡率最高的癌癥。miR-155和miR-21在肺癌的發(fā)生、發(fā)展過程中起著重要的作用,然而miR-155和miR-21是如何促進肺癌的發(fā)生、發(fā)展機制仍不明確。研究目的:探討miR-155和miR-21通過直接靶向SOCS6促進肺癌發(fā)生、發(fā)展;協(xié)同miR-155/21對肺癌發(fā)生、發(fā)展的促進作用優(yōu)于單一 miR-155或miR-21對肺癌的促進作用,從而為臨床找到一種可能更加有效的治療肺癌的手段。材料和方法:(1)臨床標本中首先檢測了 80對肺癌患者癌與癌旁組織的miR-155、miR-21以及SOCS6的表達情況,并分析之間的相互關系;(2)體內(nèi)實驗選取細胞系A549和H1299作為肺癌的細胞株,分別在A549和H1299細胞系中抑制或過表達miR-155、miR-21以及miR-155/21,檢測各組中基因SOCS6的mRNA及蛋白的表達情況;觀察各組腫瘤細胞的增殖、活性、凋亡情況;(3)體外實驗將轉染miR-155、miR-21和miR-155/21的抑制劑A549細胞注射到裸鼠背部皮下,觀察各組裸鼠后背腫瘤的成瘤以及基因SOCS6在腫瘤組織中的表達情況。結果:(1)臨床標本實驗,檢測了 80對肺癌患者癌與癌旁組織,其中癌組織miR-155和miR-21的表達明顯高于癌旁組織,同時SOCS6的表達明顯低于癌旁組織,miR-155和miR-21與SOCS6的表達成反向關系;隨著腫瘤分期進展,miR-155和miR-21的表達逐漸升高,而SOCS6的表達逐漸減低。(2)體外實驗,促進或抑制miR-155、miR-21和miR-155/miR-21表達,均能抑制或促進SOCS6 mRNA及蛋白的表達;但協(xié)同促進或抑制miR-155/miR-21時,對SOCS6的抑制或促進效果優(yōu)于單一miR-155或miR-21對SOCS6的作用效果;當過表達野生型miR-155、miR-21時,SOCS6-3'-UTR熒光活性明顯減低,過表達突變型miR-155、miR-21,SOCS6-3'-UTR 熒光活性未見變化,證實 miR-155、miR-21 是通過直接靶向SOCS6的3'-UTR而降低其表達的。(3)體外實驗,抑制miR-155、miR-21和miR-155/miR-21可以促進A549和H1299細胞的凋亡,同時也抑制了 A549和H1299細胞的增殖比率(細胞數(shù)目、活性、克隆數(shù)),但協(xié)同抑制miR-155/miR-21的效果無論在促進A549和H1299細胞的凋亡,還是在抑制A549和H1299增殖比率均優(yōu)于單一抑制miR-155或miR-21的效果。(4)體內(nèi)實驗,裸鼠后背注射miR-155/21抑制劑組的腫瘤大小明顯低于單純注射miR-155或miR-21抑制劑組;免疫組化示:miR-155/21抑制劑組的SOCS6表達明顯高于單一 miR-155或miR-21抑制劑組SOCS6的表達。結論:(1)臨床患者標本、體外和體內(nèi)實驗證實,miR-155和miR-21是促進肺癌發(fā)生、發(fā)展的關鍵因子;(2) miR-155和miR-21是通過直接靶向SOCS6促進肺癌發(fā)生、發(fā)展;(3)協(xié)同抑制miR-155/miR-21對肺癌的抑制效果優(yōu)于單一 miR-155或miR-21對肺癌的抑制效果。
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圖片說明：圖２邋：邋ｍｉＲ－１５５、ｍｉＲ－２１和ｍｉＲ－２１／１５５的調控網(wǎng)絡分析：（Ａ）邋ｍｉＲ－２１的調控網(wǎng)絡；逡逑
[Abstract]:Background: lung cancer has the highest incidence and mortality among all cancers. MIR-155 and miR-21 play an important role in the occurrence and development of lung cancer. However, how miR-155 and miR-21 promote the occurrence of lung cancer, the development mechanism is still unclear. Objective: to investigate the effect of miR-155 and miR-21 on the occurrence and development of lung cancer by directly targeting SOCS6, and the promoting effect of miR-155/21 on the occurrence and development of lung cancer is better than that of single miR-155 or miR-21 on lung cancer, so as to find a more effective method for clinical treatment of lung cancer. Materials and methods: (1) the expression of miR-155,miR-21 and SOCS6 in 80 pairs of lung cancer and paracancerous tissues were detected in clinical specimens, and the relationship between them was analyzed. (2) in vivo, cell lines A549 and H1299 were selected as lung cancer cell lines to inhibit or overexpress miR-155,miR-21 in A549 and H1299 cell lines, and miR-155/21, was used to detect the expression of SOCS6 mRNA and protein in each group, and the proliferation, activity and apoptosis of tumor cells in each group were observed. (3) miR-155,miR-21 and miR-155/21 inhibitor A549 cells were injected subcutaneously into the back of nude mice in vitro to observe the tumorigenesis of tumor and the expression of gene SOCS6 in tumor tissue of nude mice in each group. Results: (1) 80 pairs of lung cancer patients with cancer and paracancerous tissues were detected. The expression of miR-155 and miR-21 in cancer tissues was significantly higher than that in paracancerous tissues, and the expression of SOCS6 was significantly lower than that in paracancerous tissues. MiR-155 and miR-21 were inversely related to SOCS6. With the progress of tumor stage, the expression of miR-155 and miR-21 increased gradually, while the expression of SOCS6 decreased gradually. (2) promoting or inhibiting the expression of miR-155,miR-21 and miR-155/miR-21 in vitro could inhibit or promote the expression of SOCS6 mRNA and protein, but by promoting or inhibiting miR-155/miR- 21:00, the inhibitory or promoting effect of miR-155/miR- on SOCS6 was better than that of miR-155 or miR-21 on SOCS6. When the wild type miR-155,miR- was overexpressed at 21:00, the fluorescence activity of SOCS6-3'-UTR decreased significantly, but the fluorescence activity of overexpression mutant miR-155,miR-21,SOCS6-3'-UTR did not change. It was confirmed that miR-155,miR-21 decreased the expression of miR-155,miR-21 by directly targeting the 3'-UTR of SOCS6. (3) inhibition of miR-155,miR-21 and miR-155/miR-21 could promote the apoptosis of A549 and H1299 cells in vitro. At the same time, it also inhibited the proliferation ratio (cell number, activity, clone number) of A549 and H1299 cells, but the synergistic inhibitory effect of miR-155/miR-21 was better than that of miR-155 or miR-21 alone in promoting the apoptosis of A549 and H1299 cells and inhibiting the proliferation ratio of A549 and H1299 cells. (4) in vivo experiment, The tumor size of miR-155/21 inhibitor group was significantly lower than that of miR-155 or miR-21 inhibitor group. The expression of SOCS6 in miR-155/21 inhibitor group was significantly higher than that in single miR-155 or miR-21 inhibitor group. Conclusion: (1) in vitro and in vivo experiments, miR-155 and miR-21 are the key factors to promote the occurrence and development of lung cancer; (2) miR-155 and miR-21 promote the occurrence and development of lung cancer through direct targeting SOCS6; (3) the inhibitory effect of synergistic inhibition of miR-155/miR-21 on lung cancer is better than that of single miR-155 or miR-21 on lung cancer.
【學位授予單位】：中國人民解放軍醫(yī)學院
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R734.2

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本文編號：2511682