【摘要】：目的:探討活化微環(huán)境腫瘤相關(guān)成纖維細(xì)胞(cancer-associated fibroblast,CAF)中G蛋白偶聯(lián)雌激素受體(G protein-coupled estrogen receptor,GPER)外分泌HMGB1對(duì)乳腺癌MCF-7細(xì)胞自噬水平和增殖的影響。方法:通過(guò)分析課題組前期TAM與TAM聯(lián)合GPR30特異性抑制劑G15處理CAF細(xì)胞的mRNA芯片數(shù)據(jù),篩選出其中表達(dá)差異的分泌因子,從中挑選出細(xì)胞因子HMGB1,并用qRT-PCR和Western blot法驗(yàn)證芯片結(jié)果。構(gòu)建靶向干擾GPER基因的shRNA慢病毒,穩(wěn)定轉(zhuǎn)染至CAF細(xì)胞,RT-q PCR法及Western blot法分別檢測(cè)陰性對(duì)照慢病毒感染組(CAF-shNC組)與GPER-shRNA慢病毒感染組(CAF-shGPER組)中GPER的mRNA和蛋白表達(dá)情況。利用GPER特異性激動(dòng)劑G1(1μmol/L)處理以上兩組細(xì)胞后,分別得到G1+CAF-shNC組與G1+CAF-shGPER組,運(yùn)用RT-qPCR法、Western blot法及ELISA法檢測(cè)上述各組細(xì)胞中細(xì)胞因子HMGB1的mRNA和蛋白表達(dá)量以及條件培養(yǎng)基中HMGB1的分泌量。加入不同濃度的外源性重組蛋白HMGB1和收集以上各組條件培養(yǎng)基及上述各組培養(yǎng)1本課題由國(guó)家自然科學(xué)基金81372398資助基分別加入HMGB1-中和抗體處理MCF-7細(xì)胞,應(yīng)用Western blot法、CCK8法檢測(cè)腫瘤細(xì)胞自噬蛋白標(biāo)志物Beclin1、P62及LC3的表達(dá)情況和增殖能力。結(jié)果:在前期基因芯片結(jié)果中發(fā)現(xiàn)GPER介導(dǎo)了CAF細(xì)胞分泌多種細(xì)胞因子,而細(xì)胞因子在經(jīng)TAM處理CAF細(xì)胞中HMGB1mRNA和蛋白的表達(dá)上調(diào)(P值均0.01),而對(duì)于該種效應(yīng)可被G15阻斷(P值均0.01)。穩(wěn)轉(zhuǎn)慢病毒shGPER至CAF細(xì)胞后,GPER的表達(dá)被明顯抑制(P0.01)。GPER特異性激動(dòng)劑G1可顯著上調(diào)CAF-shNC組中細(xì)胞因子HMGB1的mRNA及蛋白表達(dá)水平,且進(jìn)一步增加條件培養(yǎng)基中HMGB1的分泌量(P0.05)。然而,在G1+CAF-shGPER組中以上效應(yīng)則被顯著抑制。外源性的HMGB1可以促進(jìn)MCF-7細(xì)胞增殖及自噬的發(fā)生,同樣外分泌至條件培養(yǎng)基中的HMGB1可通過(guò)上調(diào)Beclin1、LC3蛋白及降低P62蛋白表達(dá)增加乳腺癌MCF-7細(xì)胞的自噬水平及其增殖能力(P0.01),并受CAF中GPER的活化情況所調(diào)控。結(jié)論:GPER介導(dǎo)了CAF細(xì)胞分泌細(xì)胞因子HMGB1,進(jìn)而誘導(dǎo)乳腺癌MCF-7細(xì)胞發(fā)生自噬,保護(hù)MCF-7細(xì)胞促進(jìn)其生長(zhǎng)。
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【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R737.9

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 吳曉安;郭林英;杜燕娥;柳滿然;涂剛;;他莫昔芬通過(guò)GPR30介導(dǎo)CAF外分泌CXCL16促進(jìn)乳腺癌MCF-7細(xì)胞遷移及侵襲[J];腫瘤;2016年03期

2 Bhavna Rani;Yuan Cao;Andrea Malfettone;Ciprian Tomuleasa;Isabel Fabregat;Gianluigi Giannelli;;Role of the tissue microenvironment as a therapeutic target in hepatocellular carcinoma[J];World Journal of Gastroenterology;2014年15期

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本文編號(hào)：2489980