發(fā)布時間：2019-05-30 07:21

【摘要】：目的 :建立吉非替尼獲得性耐藥非小細胞肺癌細胞株,并篩選和分析耐藥前后差異表達的環(huán)狀RNA(circular RNA,circ RNA)。方法:利用吉非替尼敏感性非小細胞肺癌細胞株H292(簡稱為H292_S),采用逐步加藥法建立吉非替尼獲得性耐藥株(命名為H292_R)。CCK-8法檢測吉非替尼對2種細胞增殖的抑制作用;RNA測序(RNA sequencing,RNA-seq)法篩選2種細胞中差異表達的circRNA;實時熒光定量PCR法驗證RNA-seq結(jié)果,并結(jié)合統(tǒng)計學(xué)和生物信息學(xué)方法對差異circRNA來源基因的生物學(xué)功能進行分析。結(jié)果:吉非替尼對H292_S和H292_R細胞增殖的半數(shù)抑制濃度分別為(108.63±0.32)nmol/L和(982.37±2.62)nmol/L,2者間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P值均0.05),耐藥細胞H292_R對吉非替尼的耐藥指數(shù)為9.04。2種細胞中存在36個差異表達circRNA,其中耐藥細胞中24個circRNA表達上調(diào)(P值均0.05),12個circRNA表達下調(diào)(P值均0.05);GO富集分析發(fā)現(xiàn),異常表達的circRNA主要涉及調(diào)節(jié)細胞生長增殖、蛋白轉(zhuǎn)運和基因轉(zhuǎn)錄等生物學(xué)過程;KEGG通路分析發(fā)現(xiàn),異常circRNA的信號通路主要涉及細胞質(zhì)DNA感受通路、核因子κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)、胞吞和凋亡等通路。實時熒光定量PCR法驗證2種細胞中差異表達circRNA hsa_circ_0000567和hsa_circ_0000620的表達水平差異,結(jié)果顯示耐藥細胞中這2個circRNA水平均明顯上調(diào)(P值均0.05),與RNA-seq結(jié)果相符。結(jié)論:篩選出吉非替尼獲得性耐藥相關(guān)的差異表達circRNA,這有助于更深入地闡明非小細胞肺癌耐藥的機制,并可能為其早期診斷提供生物學(xué)標志。
[Abstract]:Objective: to establish a gefitinib acquired drug-resistant non-small cell lung cancer cell line and screen and analyze the differentially expressed cyclic RNA (circular RNA,circ RNA). Before and after drug resistance. Methods: Gifetinib sensitive non-small cell lung cancer cell line H292 (abbreviated as H292 鈮，

本文編號：2488632