【摘要】：乳腺癌是女性中常見(jiàn)的一種惡性腫瘤,發(fā)病率很高,并且呈現(xiàn)出逐年上升的趨勢(shì)。乳腺癌骨轉(zhuǎn)移的發(fā)生率高且難以治療,在尸檢中發(fā)現(xiàn)有90%以上的乳腺癌死亡患者有骨轉(zhuǎn)移。以手術(shù)為主的乳腺癌綜合治療方法雖然取得較好的療效,但仍存在一定的局限性,轉(zhuǎn)移仍是引起腫瘤術(shù)后復(fù)發(fā)的主要因素。因此深入研究乳腺癌骨轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制,尋找特異性靶向治療位點(diǎn)具有重要意義。整合素αvβ3是一種能特異性識(shí)別RGD序列的膜受體蛋白,可特異性的與含RGD(Arg-Gly-Asp)基序的蛋白質(zhì)結(jié)合,在腫瘤細(xì)胞的粘附、遷移、浸潤(rùn)及腫瘤血管新生中起重要作用。骨唾液酸蛋白(bone sialoprotein,BSP)是存在于細(xì)胞外基質(zhì)中的一種高度磷酸化和糖基化的非膠原蛋白。BSP在親骨轉(zhuǎn)移乳腺癌、肺癌、前列腺癌細(xì)胞中異常表達(dá),多項(xiàng)研究提示BSP在腫瘤靶向骨轉(zhuǎn)移的進(jìn)程中發(fā)揮重要作用。目前研究認(rèn)為BSP通過(guò)與細(xì)胞膜αvβ3整合素受體結(jié)合可引發(fā)一系列細(xì)胞生物學(xué)效應(yīng)。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)BSP通過(guò)整合素αvβ3調(diào)控親骨轉(zhuǎn)移乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231BO(231BO)的ILK信號(hào)通路,并影響細(xì)胞增殖;我們近期的實(shí)驗(yàn)結(jié)果還表明231BO細(xì)胞中BSP和αvβ3整合素表達(dá)水平之間存在一定的相關(guān)性,即BSP基因沉默的乳腺癌細(xì)胞(231BO-BSP27)中αvβ3整合素表達(dá)水平下降。但BSP和αvβ3整合素在臨床乳腺癌組織中表達(dá)的相關(guān)性以及BSP是否依賴(lài)αvβ3整合素調(diào)控乳腺癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移并不清楚。本研究采用免疫組織化學(xué)方法分析BSP和αvβ3整合素在乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌組織標(biāo)本中表達(dá)的相關(guān)性;構(gòu)建β3慢病毒表達(dá)載體,轉(zhuǎn)染231BO-BSP27乳腺癌細(xì)胞,通過(guò)免疫細(xì)胞化學(xué)、流式細(xì)胞技術(shù)和Western Blot檢測(cè)β3蛋白表達(dá)水平,篩選獲得BSP-/β3+乳腺癌細(xì)胞株(231BO-BSP27/β3)。應(yīng)用CCK8法、劃痕實(shí)驗(yàn)、Transwell法體外檢測(cè)細(xì)胞的增殖、遷移、侵襲能力,探究在BSP基因沉默的乳腺癌細(xì)胞中,回復(fù)表達(dá)β3整合素對(duì)乳腺癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移生物學(xué)性質(zhì)的影響,以期初步揭示BSP通過(guò)調(diào)控β3整合素表達(dá)影響乳腺癌骨轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制。本實(shí)驗(yàn)的主要研究結(jié)果如下:1.通過(guò)61例乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌組織的免疫組化檢測(cè),結(jié)果提示BSP和整合素αv、β3在癌組織中的表達(dá)呈正相關(guān)。2.采用β3慢病毒載體轉(zhuǎn)染231BO-BSP27,經(jīng)新霉素篩選,獲得穩(wěn)定表達(dá)β3整合素的231BO-BSP27/β3細(xì)胞系。3.與231BO-BSP27細(xì)胞相比,流式細(xì)胞檢測(cè)結(jié)果表明231BO-BSP27/β3細(xì)胞中β3表達(dá)量增高(89.705±0.456,P0.05);Western Blot檢測(cè)也證實(shí)231BO-BSP27/β3細(xì)胞的β3蛋白表達(dá)量(0.428±0.013)高于231BO-BSP27細(xì)胞(0.237±0.012)。免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)231BO-BSP27/β3細(xì)胞顯示β3呈強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá),表達(dá)部位主要在胞膜和胞漿。4.體外細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示231BO-BSP27/β3細(xì)胞生長(zhǎng)速率、細(xì)胞遷移和侵襲能力均高于231BO-BSP27組細(xì)胞。
[Abstract]:Breast cancer is a common malignant tumor in women, the incidence is very high, and showing an upward trend year by year. The incidence of bone metastasis in breast cancer is high and difficult to treat. More than 90% of breast cancer patients died of bone metastasis during autopsies. Although the comprehensive treatment of breast cancer based on operation has achieved good curative effect, there are still some limitations, and metastasis is still the main factor leading to postoperative recurrence of breast cancer. Therefore, it is of great significance to study the molecular mechanism of bone metastasis of breast cancer and to find specific targeted therapeutic sites. Integrin 偽 v 尾 3 is a membrane receptor protein which can specifically recognize RGD sequence. It can specifically bind to proteins containing RGD (Arg-Gly-Asp) motif and play an important role in tumor cell adhesion, migration, invasion and tumor angiogenesis. Bone sialic acid protein (bone sialoprotein,BSP) is a highly phosphorylation and glycosylated non-collagen protein in extracellular matrix. BSP is abnormally expressed in breast cancer, lung cancer and prostate cancer cells. Many studies suggest that BSP plays an important role in the process of tumor targeted bone metastasis. At present, it is suggested that BSP can induce a series of cell biological effects by binding to 偽 v 尾 3 integrin receptor in cell membrane. Our previous study found that BSP regulated the ILK signaling pathway of osteophilic breast cancer cell line MDA-MB-231BO (231BO) through integrin 偽 v 尾 3, and affected the proliferation of breast cancer cells. Our recent results also showed that there was a certain correlation between the expression of BSP and 偽 v 尾 3 integrin in 231BO cells, that is, the expression of 偽 v 尾 3 integrin decreased in BSP gene silenced breast cancer cells (231BO-BSP27). However, the correlation between the expression of BSP and 偽 v 尾 3 integrin in clinical breast cancer and whether BSP depends on 偽 v 尾 3 integrin to regulate the metastasis of breast cancer cells is not clear. In this study, the correlation between the expression of BSP and 偽 v 尾 3 integrin in invasive ductal carcinoma of breast was analyzed by immunohistochemistry. The expression vector of 尾 3 lentivirus was constructed and transfected into 231BO-BSP27 breast cancer cells. BSP-/ 尾 3 breast cancer cell line (231BO-BSP27/ 尾 3) was screened by immunocytochemistry, flow cytometry and Western Blot. CCK8 assay, scratch test and Transwell assay were used to detect the proliferation, migration and invasion of breast cancer cells in vitro, and to explore the effect of 尾 3 integrin expression on the biological properties of breast cancer cell metastasis in breast cancer cells silenced by BSP gene. In order to reveal the molecular mechanism of BSP affecting bone metastasis of breast cancer by regulating the expression of 尾 3 integrin. The main results of this experiment are as follows: 1. The results showed that the expression of BSP and integrin 偽 v, 尾 3 in 61 cases of invasive ductal carcinoma of breast was positively correlated with the expression of integrin 偽 v, 尾 3 in breast invasive ductal carcinoma. 2. 231BO-BSP27/ 尾 3 cell line stably expressing 尾 3 integrin was obtained by transfection of 231BO / BSP27 with 尾 3 lentivirus vector. Compared with 231BO-BSP27 cells, flow cytometry showed that the expression of 尾 3 in 231BO-BSP27/ 尾 3 cells was higher than that in 231BO-BSP27/ 尾 3 cells (89.705 鹵0.456, P 0.05). Western Blot also confirmed that the expression of 尾 3 protein in 231BO-BSP27/ 尾 3 cells (0.428 鹵0.013) was higher than that in 231BO-BSP27 cells (0.237 鹵0.012). The expression of 尾 3 in 231BO-BSP27/ 尾 3 cells was strongly positive by immunocytochemistry, and the expression site was mainly in the membrane and cytoplasm. 4. The results of cell biology in vitro suggested that the growth rate, cell migration and invasiveness of 231BO-BSP27/ 尾 3 cells were higher than those of 231BO-BSP27 group.
【學(xué)位授予單位】：華南理工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R737.9

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9 樸俊杰;乳腺癌差異基因篩選及PAIP1對(duì)其生物學(xué)行為的影響[D];延邊大學(xué);2015年

10 汪[?如;染色體6q25.1區(qū)域基因多態(tài)性與乳腺癌遺傳易感性的關(guān)聯(lián)研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2015年

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