發(fā)布時間：2019-05-23 20:15

【摘要】：研究背景及目的:大腸癌(Colorectal cancer,CRC),別名為結(jié)直腸癌,是一種全球范圍內(nèi)發(fā)病率和死亡率都很高的疾病,是世界第五大最常見的腫瘤,第三大全球腫瘤相關(guān)死因[1],其五年生存率小于65%,一般患者確診時已處于晚期階段,從而給治療成功率帶來了很大的限制。有研究顯示,25%的患者確診時已經(jīng)發(fā)生了轉(zhuǎn)移[2]。疾病的早期診斷,對患者生活質(zhì)量提高有很大價值。所以亟需一個靈敏度和特異度都高的腫瘤標志物,來實現(xiàn)對結(jié)直腸癌的早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早治療。利用二維色譜與質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)的蛋白組學,可以發(fā)現(xiàn)癌癥組織與相應(yīng)癌旁組織中蛋白質(zhì)表達的差異,是我們探求新的標志物強有力的技術(shù)支持。本研究通過二維色譜與質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù),分析了大腸癌與癌旁組織之間蛋白表達的不同,構(gòu)建大腸癌的差異蛋白質(zhì)表達譜,期望從中選擇出對大腸癌的診斷及治療有很高價值的標志物。方法:本研究主要分下面幾個部分進行:1.二維色譜與質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)建立大腸癌及相應(yīng)癌旁組織差異蛋白譜。方法:1)選取大腸癌腺癌的癌組織及其相應(yīng)癌旁組織標本,提取組織蛋白,制備多肽混合物。2)應(yīng)用二維色譜及質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)檢測癌組織及相應(yīng)癌旁組織差異表達蛋白。3)分析得到大腸癌及相應(yīng)癌旁組織差異表達蛋白譜。2.驗證ATP5A1在大腸癌中的表達。方法:選取3組大腸癌腺癌的癌組織及其相應(yīng)癌旁組織標本,用Western Blot的方法印證目標蛋白ATP5A1在大腸癌及癌旁組織的表達。3.大腸癌患者ATP5A1表達情況與臨床資料之間的關(guān)系。方法:1)從患者的年齡、性別、TNM分期及有無遠處轉(zhuǎn)移等方面建立臨床病理資料數(shù)據(jù)庫。2)應(yīng)用免疫組化方法檢測ATP5A1在大腸癌中的表達情況,同時分析其表達情況與患者的臨床資料之間的關(guān)系。結(jié)果:1.建立大腸癌及相應(yīng)癌旁組織差異蛋白譜,分析得出差異表達的蛋白質(zhì)25個,其中18個蛋白在癌組織中表達上調(diào),7個蛋白在癌組織中表達下調(diào)。2.Western Blot結(jié)果顯示大腸癌組織中ATP5A1的表達量較癌旁組織明顯升高,進一步驗證了第一部分蛋白組學的結(jié)果。3.⑴ATP5A1在大腸癌癌組織中陽性表達,主要表達在胞漿和胞膜,而在相應(yīng)癌旁組織中呈陰性表達。⑵20例大腸癌組織中,7例ATP5A1蛋白表達陽性,得出陽性率為35%;而20例相應(yīng)癌旁組織中,未見陽性表達。這表明,大腸癌組織中ATP5A1蛋白的表達水平比相應(yīng)的癌旁組織明顯上調(diào),差異有統(tǒng)計學意義(p0.05)。⑶ATP5A1蛋白的表達與大腸癌組織TNM分期、遠處轉(zhuǎn)移有關(guān),并且與患者血清中CEA表達水平高度相關(guān)(p0.05)。但是與患者的年齡、性別、臨床診斷及分化程度均無關(guān)(p0.05)。結(jié)論:1.大腸癌組織中ATP5A1的表達量較癌旁組織明顯升高。2.ATP5A1蛋白的表達與大腸癌組織TNM分期、遠處轉(zhuǎn)移有關(guān),并且與患者血清中CEA表達水平高度相關(guān)。但是與患者的年齡、性別、臨床診斷及分化程度均無關(guān)。3.ATP5A1在大腸癌腫瘤發(fā)生及進展中發(fā)揮重要作用,對大腸癌惡性程度診斷有一定價值,為進一步研究奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:Background and purpose of the study: Colorectal cancer (CRC), an alias of colorectal cancer, is a disease with high morbidity and mortality in the world. It is the fifth most common tumor in the world, the third largest global tumor-related cause of death[1], and the five-year survival rate is less than 65%. In general, the patient is in the advanced stage at the time of diagnosis, so that the success rate of the treatment is greatly limited. A study showed that 25% of patients had been transferred[2] at the time of diagnosis. The early diagnosis of the disease is of great value to the improvement of the quality of the patient's life. Therefore, a tumor marker with high sensitivity and specificity is needed to realize early detection, early diagnosis and early treatment of colorectal cancer. By using the proteomics of two-dimensional chromatography and mass spectrometry, it can be found that the difference between the expression of the proteins in the cancer tissues and the corresponding adjacent tissues is a powerful technical support for us to search for new markers. In this study, by means of two-dimensional chromatography and mass spectrometry, the expression of the protein between the colorectal cancer and the adjacent tissue is analyzed, and the differential protein expression profile of the colorectal cancer is constructed, and it is expected to select a high-value marker for the diagnosis and treatment of the large intestine cancer. Methods: The main part of this study was as follows:1. The differential protein spectrum of colorectal cancer and corresponding adjacent tissues was established by two-dimensional chromatography and mass spectrometry. method:1) selecting a cancer tissue of a large intestine cancer and a corresponding adjacent tissue sample to extract the tissue protein, 2) The expression of the differentially expressed proteins in the cancer tissues and the corresponding adjacent tissues was detected by two-dimensional chromatography and mass spectrometry. To verify the expression of CYP5A1 in colorectal cancer. Methods: The expression of target protein A5A1 in colorectal cancer and adjacent tissues was confirmed by Western Blot method. The relationship between the expression of CYP5A1 and clinical data in patients with colorectal cancer. Methods:1) The clinical and pathological data were established from the age, sex, TNM stage of the patient and the presence or absence of distant metastasis. Results:1. 2. Western Blot showed that the expression of CYP5A1 in the tissues of colorectal cancer was significantly higher than that of the adjacent tissues. The results of the first partial proteomics are further validated. The positive expression of Astragalus 5A1 in the carcinoma of the large intestine is mainly expressed in the cytoplasm and the cell membrane, while in the corresponding adjacent tissues, the expression of the negative expression is negative. In 20 cases of colorectal cancer,7 cases of H5A1 protein were positive, and the positive rate was 35%; in 20 of the 20 corresponding adjacent tissues, no positive expression was found. The expression of CYP5A1 in colorectal cancer was significantly higher than that of the corresponding adjacent tissues, and the difference was statistically significant (p0.05). The expression of the CYP5A1 protein was related to the TNM stage and distant metastasis of the colorectal cancer tissue, and was highly correlated with the level of CEA expression in the serum of the patient (p0.05). However, it was not related to the age, sex, clinical diagnosis and differentiation of the patient (p0.05). Conclusion:1. The expression of CYP5A1 in colorectal cancer was significantly higher than that of the adjacent tissues. The expression of the A5A1 protein was related to the TNM stage and distant metastasis of the colorectal cancer tissues, and was highly correlated with the level of CEA expression in the serum of the patient. 3. A5A1 plays an important role in the tumorigenesis and progression of the large intestine, and has a certain value for the diagnosis of the degree of malignancy of the large intestine, and lays the foundation for further study.
【學位授予單位】：吉林大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R735.34

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本文編號：2484194