【摘要】：目的:原發(fā)性肝細胞癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)是發(fā)病率較高的惡性腫瘤之一,尋找肝癌發(fā)生發(fā)展的相關(guān)基因,可為肝癌的診斷、治療提供理論基礎(chǔ)。micro RNA(mi RNA)是一類長度為18-22nt的內(nèi)源性非編碼小RNA,被證明與肝癌的發(fā)生息息相關(guān),其生物效應(yīng)是在轉(zhuǎn)錄階段抑制相關(guān)基因的表達。本研究應(yīng)用實時熒光定量PCR的方法檢測肝癌組織中mi R-221的表達水平,并統(tǒng)計分析mi R-221表達量與HCC患者的分期、分型及預(yù)后等臨床資料的關(guān)系。在此基礎(chǔ)上進一步觀察阻斷mi R-221表達后的肝癌細胞的生物學(xué)特性的改變。方法:收集246例肝癌患者腫瘤及周圍非瘤組織手術(shù)標本,運用實時熒光定量PCR技術(shù)檢測mi R-221的表達水平。根據(jù)mi R-221在肝癌組織中的表達水平,將HCC患者分為mi R-221高表達組和低表達組,分析mi R-221表達量與HCC患者臨床資料之間的關(guān)系。設(shè)計mi R-221反義鏈,通過慢病毒載體轉(zhuǎn)染肝癌細胞株,以CCK-8、克隆形成、劃痕實驗、Transwell、流式細胞周期檢測等觀察阻斷mi R-221表達后的肝癌細胞的生物學(xué)特性。Westernblot檢測阻斷Mi R-221對細胞周期調(diào)節(jié)蛋白p27~(kip1)、p57~(kip2)的影響。結(jié)果:mi R-221表達水平與腫瘤病理學(xué)分級(P=0.0001)、TNM分期(P=0.03)、門靜脈癌栓(P=0.001)、甲胎蛋白(P=0.007)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(P=0.001)密切相關(guān),但與年齡、性別、腫瘤大小、腫瘤數(shù)量、包膜形成等無關(guān),mi R-221高表達與HCC患者總體生存期負相關(guān),COX回歸生存分析結(jié)果顯示mi R-221是判斷HCC患者預(yù)后的一個獨立預(yù)測因子。阻斷mi R-221的表達并能夠有效地抑制肝癌細胞的增殖活動,也能夠阻止其克隆形成及遷移侵襲的能力。流式細胞周期檢測發(fā)現(xiàn)阻斷mi R-221的表達可以誘導(dǎo)肝癌細胞發(fā)生G1期阻滯。阻斷mi R-221的表達導(dǎo)致肝癌細胞中p57~(kip2)、p27~(kip1)蛋白表達量顯著增高。結(jié)論:mi R-221在HCC中表達水平升高,與HCC的發(fā)生發(fā)展具有密切關(guān)系,是HCC患者預(yù)后的一個負性獨立預(yù)測因子。阻斷肝癌細胞中mi R-221的表達將為肝癌的診斷、治療提供新的靶點。
[Abstract]:Objective: primary hepatocellular carcinoma (Hepatocellular carcinoma,HCC) is one of the malignant tumors with high incidence. Micro RNA (mi RNA) is a kind of endogenous non-coding small RNA of length 18-22nt, which has been proved to be closely related to the occurrence of liver cancer, and its biological effect is to inhibit the expression of related genes in the transcriptional stage. In this study, the expression of mi R 鈮，

本文編號：2478338