【摘要】：研究背景 有近15-25%結(jié)直腸癌病人表現(xiàn)為同時性肝轉(zhuǎn)移,另有近50%病人在結(jié)直腸癌原發(fā)灶切除后2年出現(xiàn)異時性肝轉(zhuǎn)移。近年來,綜合治療(手術(shù)為主)使結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移的病人生存得到了顯著提高,根治切除術(shù)后5年生存率可達50%左右。雖然已有學者提出用于預測可切除結(jié)腸癌肝轉(zhuǎn)移預后的模型,但仍缺乏精準的術(shù)前評估,致使約40%的術(shù)前認為可切除的病人,因術(shù)前估計不足,施行不必要的“剖腹探查”。如何更好的術(shù)前評估結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移病人引起了廣泛重視。 結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移的發(fā)生除了與癌基因,抑癌基因異常表達或丟失有關(guān),尚與“表觀遺傳學”(甲基化,乙�；�,非編碼RNA調(diào)控)密切相關(guān)。已有綜述表明,在腸癌肝轉(zhuǎn)移發(fā)生過程中廣泛涉及microRNA的調(diào)控。亦已發(fā)現(xiàn)相當數(shù)量的microRNA與此相關(guān),已有學者稱此類microRNA為"metastamiR". 研究目的 我們擬通過microRNA芯片高通量的分析與結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移可能相關(guān)的microRNA標志物,并通過定量PCR(qRT-PCR)驗證。對芯片發(fā)現(xiàn)與結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移相關(guān)的microRNA494進行深入研究,明確microRNA494促進肝轉(zhuǎn)移發(fā)生的機制。 采用meta分析明確PET-CT的應用能否在傳統(tǒng)的影像學檢查的基礎(chǔ)上為結(jié)腸癌肝轉(zhuǎn)移病人術(shù)前評估提供更多的價值。采用SEER數(shù)據(jù)分析淋巴結(jié)狀態(tài)對可切除轉(zhuǎn)移性結(jié)直腸癌預后的影響。 方法 1、結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移發(fā)生相關(guān)的microRNA標記物篩選 獲取31對結(jié)直腸癌“肝轉(zhuǎn)移”與“無肝轉(zhuǎn)移”的原發(fā)灶新鮮組織,提取total RNA.采用Agilent芯片分析兩組間microRNA表達和基因表達的差異。分析與結(jié)直腸肝轉(zhuǎn)移相關(guān)的microRNA譜及其調(diào)控的靶基因。 2、結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移發(fā)生相關(guān)的microRNA臨床驗證 選取126個結(jié)直腸癌病人,結(jié)合文獻報道結(jié)果,采用石蠟標本對miR15b, miR19a,miR20a, miR181a,miR181d,miR223,miR4947個microRNA進行驗證�；仡櫡治銎渑c肝轉(zhuǎn)移發(fā)生與否關(guān)系,并進一步明確其用于預測結(jié)直腸癌預后的價值。 3、miR494引起結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移的分子機制 篩選出miR494低表達的Lovo細胞株。體外構(gòu)建miR494過表達的miR494-Lovo細胞株,分析miR494對Lovo細胞功能影響。進一步通過整合生物學分析,miR494可能作用靶點,引起肝轉(zhuǎn)移的機制。 4、淋巴結(jié)狀態(tài)對可切除轉(zhuǎn)移性結(jié)直腸癌預后的影響-基于SEER的分析 從SEER數(shù)據(jù)庫里,提取了在2004-2007年期間原發(fā)灶及轉(zhuǎn)移灶均接受了手術(shù)治療的2007例轉(zhuǎn)移性結(jié)直腸癌病人的數(shù)據(jù)。采用單因素及多因素分析原發(fā)灶淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀況對預后的影響。 5、PET用于可切除結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移病人術(shù)前評估的價值-meta分析 共篩選了213相關(guān)的文獻,入組了13篇文獻進行meta分析。對PET用于診斷肝內(nèi)和肝外轉(zhuǎn)移的準確性,改變治療率及無效手術(shù)率進行了meta分析,用于明確PET在可切除結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移的病人中應用的價值。 結(jié)果 芯片分析結(jié)果顯示：在結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移與無肝轉(zhuǎn)移兩個組間有16個差異表達的microRNA。其中miR15b,miR223,miR19a在肝轉(zhuǎn)移組表達下降,miR494在肝轉(zhuǎn)移表達上升,均可以進一步通過石蠟組織qRT-PCR得到驗證。并表明miR494的高表達與預后差相關(guān)。體外驗證表明miR494可引起細胞周期改變(S期比例增加),侵襲能力的增加。 對于可切除轉(zhuǎn)移性結(jié)直腸癌,淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(無論是轉(zhuǎn)移數(shù)目還是轉(zhuǎn)移率)均與預后差密切相關(guān)。對于傳統(tǒng)影像學檢查評估為的可切除的結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移的病人,加用PET可以提高肝外轉(zhuǎn)移灶的靈敏度,減少不必要的“剖腹探查”術(shù)。 結(jié)論和創(chuàng)新點： 1、miR15b,miR223,miR19a的低表達及miR494高表達均與腸癌肝轉(zhuǎn)移的發(fā)生有關(guān)。同時miR494高表達還與結(jié)直腸癌預后差相關(guān)。 2、miR494可引起Lovo細胞株侵襲能力增加,有可能成為區(qū)分可切除結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移新的標志物。 3、淋巴結(jié)狀態(tài)和PET-CT有助于術(shù)前更為精確的評估可切除結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移的病人。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：浙江大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R735.34

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本文編號：2470974