【摘要】：研究背景 有近15-25%結(jié)直腸癌病人表現(xiàn)為同時(shí)性肝轉(zhuǎn)移,另有近50%病人在結(jié)直腸癌原發(fā)灶切除后2年出現(xiàn)異時(shí)性肝轉(zhuǎn)移。近年來(lái),綜合治療(手術(shù)為主)使結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移的病人生存得到了顯著提高,根治切除術(shù)后5年生存率可達(dá)50%左右。雖然已有學(xué)者提出用于預(yù)測(cè)可切除結(jié)腸癌肝轉(zhuǎn)移預(yù)后的模型,但仍缺乏精準(zhǔn)的術(shù)前評(píng)估,致使約40%的術(shù)前認(rèn)為可切除的病人,因術(shù)前估計(jì)不足,施行不必要的“剖腹探查”。如何更好的術(shù)前評(píng)估結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移病人引起了廣泛重視。 結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移的發(fā)生除了與癌基因,抑癌基因異常表達(dá)或丟失有關(guān),尚與“表觀遺傳學(xué)”(甲基化,乙�；�,非編碼RNA調(diào)控)密切相關(guān)。已有綜述表明,在腸癌肝轉(zhuǎn)移發(fā)生過(guò)程中廣泛涉及microRNA的調(diào)控。亦已發(fā)現(xiàn)相當(dāng)數(shù)量的microRNA與此相關(guān),已有學(xué)者稱此類microRNA為"metastamiR". 研究目的 我們擬通過(guò)microRNA芯片高通量的分析與結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移可能相關(guān)的microRNA標(biāo)志物,并通過(guò)定量PCR(qRT-PCR)驗(yàn)證。對(duì)芯片發(fā)現(xiàn)與結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移相關(guān)的microRNA494進(jìn)行深入研究,明確microRNA494促進(jìn)肝轉(zhuǎn)移發(fā)生的機(jī)制。 采用meta分析明確PET-CT的應(yīng)用能否在傳統(tǒng)的影像學(xué)檢查的基礎(chǔ)上為結(jié)腸癌肝轉(zhuǎn)移病人術(shù)前評(píng)估提供更多的價(jià)值。采用SEER數(shù)據(jù)分析淋巴結(jié)狀態(tài)對(duì)可切除轉(zhuǎn)移性結(jié)直腸癌預(yù)后的影響。 方法 1、結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移發(fā)生相關(guān)的microRNA標(biāo)記物篩選 獲取31對(duì)結(jié)直腸癌“肝轉(zhuǎn)移”與“無(wú)肝轉(zhuǎn)移”的原發(fā)灶新鮮組織,提取total RNA.采用Agilent芯片分析兩組間microRNA表達(dá)和基因表達(dá)的差異。分析與結(jié)直腸肝轉(zhuǎn)移相關(guān)的microRNA譜及其調(diào)控的靶基因。 2、結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移發(fā)生相關(guān)的microRNA臨床驗(yàn)證 選取126個(gè)結(jié)直腸癌病人,結(jié)合文獻(xiàn)報(bào)道結(jié)果,采用石蠟標(biāo)本對(duì)miR15b, miR19a,miR20a, miR181a,miR181d,miR223,miR4947個(gè)microRNA進(jìn)行驗(yàn)證�；仡櫡治銎渑c肝轉(zhuǎn)移發(fā)生與否關(guān)系,并進(jìn)一步明確其用于預(yù)測(cè)結(jié)直腸癌預(yù)后的價(jià)值。 3、miR494引起結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制 篩選出miR494低表達(dá)的Lovo細(xì)胞株。體外構(gòu)建miR494過(guò)表達(dá)的miR494-Lovo細(xì)胞株,分析miR494對(duì)Lovo細(xì)胞功能影響。進(jìn)一步通過(guò)整合生物學(xué)分析,miR494可能作用靶點(diǎn),引起肝轉(zhuǎn)移的機(jī)制。 4、淋巴結(jié)狀態(tài)對(duì)可切除轉(zhuǎn)移性結(jié)直腸癌預(yù)后的影響-基于SEER的分析 從SEER數(shù)據(jù)庫(kù)里,提取了在2004-2007年期間原發(fā)灶及轉(zhuǎn)移灶均接受了手術(shù)治療的2007例轉(zhuǎn)移性結(jié)直腸癌病人的數(shù)據(jù)。采用單因素及多因素分析原發(fā)灶淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀況對(duì)預(yù)后的影響。 5、PET用于可切除結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移病人術(shù)前評(píng)估的價(jià)值-meta分析 共篩選了213相關(guān)的文獻(xiàn),入組了13篇文獻(xiàn)進(jìn)行meta分析。對(duì)PET用于診斷肝內(nèi)和肝外轉(zhuǎn)移的準(zhǔn)確性,改變治療率及無(wú)效手術(shù)率進(jìn)行了meta分析,用于明確PET在可切除結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移的病人中應(yīng)用的價(jià)值。 結(jié)果 芯片分析結(jié)果顯示：在結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移與無(wú)肝轉(zhuǎn)移兩個(gè)組間有16個(gè)差異表達(dá)的microRNA。其中miR15b,miR223,miR19a在肝轉(zhuǎn)移組表達(dá)下降,miR494在肝轉(zhuǎn)移表達(dá)上升,均可以進(jìn)一步通過(guò)石蠟組織qRT-PCR得到驗(yàn)證。并表明miR494的高表達(dá)與預(yù)后差相關(guān)。體外驗(yàn)證表明miR494可引起細(xì)胞周期改變(S期比例增加),侵襲能力的增加。 對(duì)于可切除轉(zhuǎn)移性結(jié)直腸癌,淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(無(wú)論是轉(zhuǎn)移數(shù)目還是轉(zhuǎn)移率)均與預(yù)后差密切相關(guān)。對(duì)于傳統(tǒng)影像學(xué)檢查評(píng)估為的可切除的結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移的病人,加用PET可以提高肝外轉(zhuǎn)移灶的靈敏度,減少不必要的“剖腹探查”術(shù)。 結(jié)論和創(chuàng)新點(diǎn)： 1、miR15b,miR223,miR19a的低表達(dá)及miR494高表達(dá)均與腸癌肝轉(zhuǎn)移的發(fā)生有關(guān)。同時(shí)miR494高表達(dá)還與結(jié)直腸癌預(yù)后差相關(guān)。 2、miR494可引起Lovo細(xì)胞株侵襲能力增加,有可能成為區(qū)分可切除結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移新的標(biāo)志物。 3、淋巴結(jié)狀態(tài)和PET-CT有助于術(shù)前更為精確的評(píng)估可切除結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移的病人。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R735.34

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本文編號(hào)：2470974